免疫SOP：CA 125 II作業(yè)指導書

1、55文件編號：LABOPMY020第 頁，共 頁 版本：A/0生效日期：2008-02-01 Elecsys E 170/E 411糖類抗原125(CA 125II)XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導書 糖1. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個過程18分鐘完成。 第1步：20l標本、生物素化的抗CA 125II特異性的單克隆抗體和釕（Ru）標記的抗CA 125II特異性的單克隆抗體混勻，形 成夾心復合物。 第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。 第3步：反應(yīng)混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液

2、洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學發(fā)光，通過光電倍增管進行測定。儀器通過2點定標曲線以及試劑條碼提供的母定標曲線計算出結(jié)果。2. 標本要求血清：按標準常規(guī)方法采集。血漿：肝素鈉、鋰、銨,檸檬酸鈉和EDTA-K3抗凝。使用檸檬酸鈉抗凝結(jié)果要增加10。標本在28度可穩(wěn)定5天，-20oC可穩(wěn)定3個月。不要使用加熱滅活的標本。標本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。標本、定標液和質(zhì)控品在測定前應(yīng)預溫到室溫。3. 試劑、校準品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M： 鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5ml。粒子濃度0.72mg/ml。含防腐劑。R1：生物素化的抗CA 125II單克隆抗體（灰蓋），

3、1瓶，9ml，1mg/l，磷酸緩沖液100mmol/l，Ph 7.4；含防腐劑。R2：Ru(bpy)32+標記的抗CA 125II單克隆抗體（黑蓋），1瓶，9ml。濃度1mg/l，磷酸緩沖液100mmol/l，pH 7.4,含防腐劑。校準品：Cal 1 陰性定標液（白蓋），2瓶，1ml/瓶Cal 2 陽性定標液（黑蓋），2瓶，1ml/瓶兩個定標品的CA 125II的濃度范圍約為35U/ml和500U/ml，以人血清為基質(zhì)，含防腐劑。質(zhì)控品：Elecsys 腫瘤標志物質(zhì)控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）貨號11776452其他所需材料：Elecsys E170/E

4、411分析儀Elecsys 通用稀釋液貨號11732277 Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）貨號11298500 Elecsys E411分析儀 Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell）貨號11662988 Elecsys 測量池清洗液（CleanCell）貨號11662970 Elecsys 添加劑液（SysWash）貨號11930346 Elecsys 適配器 （Adapter for SysClean），貨號11933159, Elecsys 反應(yīng)杯（CUP），貨號11706829 Elecsys 加樣頭（TIP），貨號11706802 Elecsys E170分析儀

5、Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell）貨號04880340 Elecsys 測量池清洗液（CleanCell）貨號04880293 Elecsys 試劑針清洗液（ProbeWash）貨號03005712 Elecsys PC/CC杯,貨號03023141 Elecsys 反應(yīng)杯/加針頭/廢物袋（CUP/TIP），貨號12102137 Elecsys 系統(tǒng)清洗適配器（SysClean Adapter M），貨號030276514. 儀器和校準使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)Elecsys 2010/E 170/E 411全自動電化學發(fā)光免疫自動分析儀儀器校準：每批 CA 125II試劑盒必須

6、用新鮮試劑和CA 125II Cal 1, Cal 2定標一次。另外，以下情況需要再次定標：Elecsys E170分析儀： 一個月（同一批號試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒）各種分析儀均適用的情況：根據(jù)要求進行定標：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時。5. 操作步驟（以E 170為例）5.1 校準操作步驟：在編緝各項目的參數(shù)時，已經(jīng)在ApplicationCalib菜單中定義好了定標類型和幾點定標。因此在對各項目進行定標時，只需在定標菜單Calibration中進行即可。進入CalibrationStatus菜單，用鼠標選擇需定標的項目，再根據(jù)需要點單點定標（BLANK鍵）或兩點定標（TWO POIN

7、T鍵）、全點定標（FULL鍵），再選擇其它項目進行相應(yīng)選擇，最后點SAVE，將定標物放入在CalibrationCalibrator中定義好的位置，點Start，再點Start，儀器開始定標。 在CalibrationStatus菜單中看定標結(jié)果，點Calibration Result鍵看定標結(jié)果，點Reaction Monitor鍵看每個定標物的反應(yīng)曲線。5.2 樣本檢測程序： 單個樣本輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點SAVE鍵，樣本號自動累加。批量常規(guī)標本的輸入，在主菜單下

8、選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入起始標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目，點REPEAT，輸入該批標本的最后一個標本號，點OK即可。進樣分析，將標本按在Workplace菜單中輸入的標本號順序在樣本架上排好，放入進樣盤內(nèi),按START鍵，輸入該批上機標本的起始標本號，再點START鍵，儀器自動開始推架檢測標本。6. 質(zhì)量控制用Elecsys腫瘤標志物質(zhì)控品1和2 （PreciControl Tumor Marker）。質(zhì)控品1和質(zhì)控品2至少每24小時或每一次定標后測定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實驗室的具體要求。檢測值應(yīng)落在確定的范圍

9、內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計算方法儀器會自動計算標本的濃度（U/ml,U/L或者kU/l）。8. 參考范圍593例健康女性（絕經(jīng)前后）95%的范圍35U/ml.9. 分析性能9.1精密度10. 干擾因素 該方法不受黃疸（膽紅素66mg/dl）、溶血（血紅蛋白3.2g/dl）、脂血（脂質(zhì)2000mg/dl）和生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8小時后才能采血。不受類風濕因子干擾（1200U/ml）。28種常 用藥物經(jīng)試驗對本測定無干擾。CA 125濃度高達50000U/ml也不出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。接受過小鼠單抗治療或體內(nèi)診斷的病人會出現(xiàn)假陽 性反應(yīng)。El

10、ecsys CA 125II測定結(jié)果應(yīng)結(jié)合病人病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來進行診斷。11. 臨床意義 CA 125屬腫瘤標志物，其測定值由使用單克隆抗體OC125來命名。在Elecsys測定法中，OC 125 單克隆抗體被用作檢測抗體。 另一種單克隆抗體M 11用作捕獲抗體。正常人的卵巢上皮表面不表達CA 125，但在上皮來源的非粘液性卵巢腫瘤中CA 125表達率很 高，并可在血清中檢測到。CA 125升高可見于卵巢癌患者外，還可見于子宮內(nèi)膜癌、乳房癌、胃腸道癌和其它惡性腫瘤。各種惡性 腫瘤引起的腹水也可見CA 125升高。CA 125升高也可見于多種婦科良性疾病，如卵巢囊腫、子宮內(nèi)膜病、宮

11、頸炎及子宮肌瘤等。輕 度升高可見于妊娠早期和其它良性疾病，如急、慢性胰腺炎、胃腸道疾病、腎功能衰竭、自身免疫病等。明顯升高也可見于肝硬化、 肝炎。盡管CA 125是非特異的指標，卻是迄今為止用于監(jiān)測卵巢癌病人治療效果、觀察疾病發(fā)展的最重要指標。以65U/ml為cut-off 值,Elecsys CA 125 II的敏感性是79%，特異性是 82%，如cut-off值設(shè)為 150U/ml，即敏感性是 69%，特異性是 93%。12參考文獻1. Davis HM, Zurawski VR Jr, Bast RC Jr, Klug TL. Characterization of the CA 125

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