實(shí)驗(yàn)12植物組織中丙二醛含量的測(cè)定(精)

1、植物組織中丙二醛含量的測(cè)定古一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握植物體內(nèi)丙二醛含量測(cè)定的原 理及方法。2. 了解丙二醛積累對(duì)細(xì)胞的傷害:、實(shí)驗(yàn)原理逆境或衰老膜脂的過氧化作用丙二醛通過MDA 了解膜脂過氧化作用及間接反應(yīng)植物組織 受傷害程度；MDA在酸性和高溫條件下與硫代巴比妥酸（TBA）反 應(yīng)生成紅棕色的三甲川（3, 5, 5-三甲基惡哇2,4- 二酮），最大吸收波長(zhǎng)532nm,最大干擾物質(zhì)可溶 性糖（吸收峰450mn）,用雙組分分光度法排除。 計(jì)算公式P173： 44-2. 44-3丙二醛3,5,5三甲基惡哇2,4 二酮（三甲川）HN硫代巴比妥酸TBA三、實(shí)驗(yàn)器材1、材料：受干旱.高溫、低溫等逆境脅迫的植

2、 物葉片或衰老的植物器官2、儀器：紫外分光光度計(jì).離心機(jī)3、試劑：10%三氯乙酸（TCA） 0. 6%硫代巴比妥酸（先加少量Imo 1/L氫氧化鈉溶解， 再用10%三氯乙酸定容）石英砂實(shí)驗(yàn)步驟1 MDA的提取：稱lg葉片，加入2ml 10% TCA及少量石 英砂，研磨至勻漿，再加8ml 10%TCA進(jìn)一步研磨， 定容至10ml,勻漿以4000r/min離心lOmin,其上清液即為MDA提取液。2 MDA的測(cè)定:取2ml MDA提取液（對(duì)照加2ml蒸餡水）, 加2ml 0. 6 % TBA,混和液在沸水浴中保溫15min后， 立即置于冰浴中冷卻，然后離心lOmin,于波長(zhǎng) 532mn、450nm

3、600nm下測(cè)定0D值。五、結(jié)果計(jì)算以測(cè)得的OD532減去OD600的非特異吸收值，分別計(jì)算衰 老和正常組的值。MDA濃度(pinol/L)=6 45 (D5 32-D600) -0. 56D450植物紐織鮮車（g）MDA含量（mol/g FW）=咧濃度3 “提取液休積z注意事項(xiàng)D450、D532、D600分別代表450nm、532nm和600nm波長(zhǎng)下 的光密度值。 MDA-TBA顯色反應(yīng)的加熱時(shí)間，最好控制沸水浴10-15min 之間。時(shí)間太短或太長(zhǎng)均會(huì)引起532nm下的光吸收值下降; 如待測(cè)液渾濁，可適當(dāng)增加離心力及時(shí)間，最好使用低溫 離心機(jī)離心?？扇苄蕴桥cTBA顯色反應(yīng)的產(chǎn)物在532 nm也有吸收（最大 吸收在450 nm）,當(dāng)植物處于干旱、高溫.低溫等逆境時(shí) 可溶性糖含量會(huì)增高，必要時(shí)要排除可溶性糖的干擾。思考題