第二章藥物鑒別技術(shù)

1、第二章 藥物鑒別技術(shù)藥物鑒別技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握常用物理常數(shù)測定法的原理、方法，常用藥物鑒別實驗方法。2.熟悉藥物鑒別試驗的分類。3.了解藥物性狀的含義及藥物鑒別試驗的特點。4.學(xué)會性狀和鑒別實驗操作，檢驗結(jié)果的計算、判斷和檢驗原始記錄的填寫。5.牢固樹立藥品質(zhì)量第一的觀念，具有認(rèn)真、嚴(yán)謹(jǐn)求實的工作態(tài)度。導(dǎo)學(xué)情景導(dǎo)學(xué)情景 情景描述： 某制藥公司購買了一批阿莫西林原料，懷疑是假藥，要求質(zhì)量部判斷藥物的真?zhèn)?，質(zhì)量部小王接到任務(wù)，按藥典要求進行檢驗，最后給出藥物真?zhèn)蔚慕Y(jié)論。學(xué)前導(dǎo)語： 藥物鑒別是藥品檢驗工作的首要任務(wù)。通過本章的學(xué)習(xí)和實訓(xùn)，同學(xué)們將會學(xué)會藥物鑒別的操作、計算，并能根據(jù)結(jié)果判斷

2、藥物的真?zhèn)巍?第一節(jié)第一節(jié) 性狀觀測性狀觀測一、概述 藥物的性狀是藥物質(zhì)量指標(biāo)之一，對判斷藥物的真?zhèn)斡兄匾饔?。在進行藥物檢驗時，藥物的性狀觀測是首項工作。藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)性狀項一般包括外觀、溶解度、一般穩(wěn)定性和物理常數(shù)等。（一）外觀性狀外觀性狀是指藥物的色澤和外表感觀，包括藥物存在狀態(tài)、晶型、色澤、臭味等。藥典2015年版中貝諾酯的外觀描述為本品為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭，微甜。（二）溶解度 溶解度為物理性質(zhì)，在一定程度上反應(yīng)了藥物的純度。中國藥典用“極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、極微溶解、幾乎不溶或不溶”來描述藥物在不同溶劑中的溶解度。貝諾酯的溶解度描述為：在水中不溶，在甲醇或者乙醇中微

3、溶。 藥典規(guī)定了溶解度的試驗法：除另有規(guī)定外，稱研成細(xì)粉的供試品或量取液體供試品，在25左右一定容量的溶劑中，每隔5min強力振搖30s，觀察30min內(nèi)的溶解情況，如無目視可見的溶質(zhì)顆?；蛞旱螘r，視為完全溶解。 溶解度術(shù)語： 易溶：溶質(zhì)1g在溶劑1-10ml中溶解 不溶：溶質(zhì)1g在溶劑10000ml中不能完全溶解。（三）一般穩(wěn)定性 一般穩(wěn)定性是指與藥物貯藏有關(guān)的是否具有引濕、風(fēng)化、遇光變質(zhì)等性質(zhì)。 例如鹽酸氯丙嗪的性狀穩(wěn)定性的記載：有吸水性，遇到光易變色；有的還描述酸堿性，如鹽酸氯丙嗪的酸堿性的記載為：水溶液顯示酸性反應(yīng)。 （四）物理常數(shù) 物理常數(shù)是可以鑒別藥物真?zhèn)?，還可以檢查藥物的純度。常

4、見的物理常數(shù)有相對密度、熔點、沸點、比旋度、遮光性、吸收系數(shù)、PH等。二、相對密度測定法（一）基本原理 是指在相同的溫度、壓力條件下，某物質(zhì)的密度與水的密度之比。一般規(guī)定溫度為20度。純藥物的相對密度在特定條件下為不變的常數(shù)，藥物的純度改變，相對密度也隨之改變，測定相對密度，可以區(qū)別或檢查藥物的純雜程度。（二）測定方法 中國藥典相對密度測定法有兩種，即比重瓶法和韋氏比重秤法。測定對象均是液體藥物。 比重瓶法是常用方法，特點是所需供試品量小，準(zhǔn)確度高，適用于一般液體。 1. 1.儀器儀器 比重瓶比重瓶比重瓶B比重瓶A2.操作方法 操作流程：稱比重瓶重量，裝滿供試品，20度恒溫水浴，稱重（比重瓶+

5、供試品），洗干凈比重瓶并裝滿水，20恒溫水浴，稱重。（比重瓶+水）3.計算 供試品的相對密度=供試品重量/水重量（三）注意事項1.比重瓶必須潔凈、干燥2.裝過供試品的比重瓶必須沖洗干凈3.避免產(chǎn)生氣泡4.水中取出時，應(yīng)手指拿瓶頸5.采用純化水6.環(huán)境溫度低于20度三、熔點測定法（一）基本原理 熔點是指一種物質(zhì)由固體融化成液體的溫度、熔融同時分解的溫度或在融化時自初熔至全熔的一段溫度范圍。熔點是固體物質(zhì)的物理常數(shù)，鑒別藥物的真?zhèn)?，檢查藥物的純雜程度。（二）測定方法根據(jù)藥物的性狀不同，中國藥典（2010年版）中收載有三種熔點測定的方法：第一法 用于測定易粉碎的固體藥物。第二法 用于測定不易粉碎的固

6、體藥品。第三法 用于測定凡士林或其他類似的物質(zhì)。1.儀器 傳溫液用容器、具有0.5刻度的分浸型溫度計、熔點測定用毛細(xì)管、加熱器、傳溫液2.操作方法（1）取供試品適量，研稱細(xì)粉，按照規(guī)定條件進行干燥，備用。（2）分取供試品適量，置一端熔封的毛細(xì)管中，借助長約60cm的潔凈玻璃管（垂直放在表面皿或其他適宜的硬質(zhì)物體上），將裝有供試品的毛細(xì)血管放入玻璃管上口使其自由落下，反復(fù)數(shù)次，使供試品密集在毛細(xì)管的熔封段，裝入高度3mm，如圖2-3中A圖（3）將溫度計垂直懸掛于加熱用容器中，使溫度計汞球部的底端與容器的底部距離在2.5cm以上。（4）容器中加入適量的傳溫液，并使傳溫液受熱后的液面恰在溫度計的分浸

7、線處，如圖2-3中B圖。（5）將傳溫液緩緩加熱，待溫度上升至較規(guī)定熔點的底線約底10時，將裝有供試品的毛細(xì)管進入傳溫液，貼附在溫度計上，位置須使毛細(xì)管的內(nèi)容無恰好在溫度計汞球中部，如圖2-3中C圖；繼續(xù)加熱調(diào)節(jié)升溫速率為每分鐘上升1.01.5，加熱時需不斷攪拌使傳溫液溫度保持均勻，記錄供試品在初熔至全熔時的溫度，重復(fù)測定3次，取其平均值，即得。(三）注意事項1.測定熔點時，應(yīng)注意毛細(xì)管的規(guī)格大小。毛細(xì)管應(yīng)由中性硬質(zhì)玻璃管制成，管長9cm以上，內(nèi)徑0.91.1mm，壁厚0.100.15mm，一段熔封。2.溫度計必須經(jīng)過校正。3.傳溫液 熔點在80以下者，用水；熔點在80以上者，用硅油或液狀石蠟。

8、4.應(yīng)以熔點測定管內(nèi)供試品開始局部液化（出現(xiàn)明顯液滴）時的溫度，作為初融溫度；供試品全部融化（液體完全澄清）時的溫度作為全融溫度。5.測定熔點過程中遇有“發(fā)毛”、“收縮”、“軟化”及“出汗”等現(xiàn)象，均不作初熔判斷。6.熔點讀書時，宜估計到0.1。記錄時應(yīng)按修約間隔0.5進行修約，即0.10.2舍去，0.30.7修約為0.5,0.80.9進為1四、旋光度測定法（一）基本原理 某些有機藥物分子結(jié)構(gòu)中具有不對稱的手性碳原子，具有旋光現(xiàn)象，即當(dāng)平面偏振光通過其液體或溶液時，使偏振光的平面向左或向右發(fā)生旋轉(zhuǎn)，偏轉(zhuǎn)的度數(shù)稱為旋光度。用符號表示，常以“+”表示右旋，“”表示左旋。 當(dāng)偏振光透過長1dm且每1

9、ml中含有旋光性物質(zhì)1g的溶液，在一定波長和溫度下測得的旋光度稱為比旋度，用符號【】 表示 比旋度為旋光物質(zhì)的物理常數(shù)，測定物質(zhì)的比旋度可以區(qū)別不同的藥物或檢查藥物的純雜程度。一定條件下與濃度呈線性關(guān)系，采用旋光法測定法可以進行含量測定。tD（二）測定方法1.儀器：旋光儀2.操作方法 一般規(guī)定為20攝氏度，使用波長鈉光譜D線。先校正，再將管用供試液沖洗數(shù)次，然后緩緩注入供試液適量，置于旋光儀內(nèi)檢測并讀書，即得供試液的旋光度。 = 100/（LC）：試驗測得旋光度L：測定管的長度C：100ml中所含的溶質(zhì)的重量tD(三）注意事項1.每次測定前應(yīng)用空白實驗校正。零點校正，要求同一測定管。2.溫度要

10、求20度左右。3.測定應(yīng)使用規(guī)定的溶劑。4.在往測定管加液體時，盡量不要有氣泡。5.取兩份供試液測定。（四）應(yīng)用 1.藥物鑒別2.雜質(zhì)檢查3.含量測定 C%= / （ L ）tD五、PH值測定法（一）基本原理PH是水溶液中氫離子活度的表示方法。最新版藥典規(guī)定用電位法測定。 PH=PHs+(E-Es)/k式中： E ：為含有待測溶液（PH）的原電池電動勢 Es：為含有標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（PHs）的原電池電動勢 k：為與溫度t（）有關(guān)的常數(shù)【k=0.059+0.000198（t-25）（二）測定方法1.儀器 測定使用PH酸度計 分為PH測量電池和PH指示器2.操作方法（1）酸度計校正（2）測定供試液 酸度

11、計校正常用的3種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液及配制方法1.苯二甲酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液（20，PH 4.00) 2.磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液（20，PH 6.88）3.硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液（20，PH 9.23）（三）注意事項1.儀器定位后，再用第二種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液核對儀器示值，誤差不大于0.02PH單位。2.每次更換更換標(biāo)準(zhǔn)液或供試液前，應(yīng)洗滌電極。3.應(yīng)使用純化水4.標(biāo)準(zhǔn)緩沖液可以保存2-3個月，如發(fā)現(xiàn)渾濁等現(xiàn)象，不能繼續(xù)使用。（四）應(yīng)用PH值測定法在藥品檢驗中廣泛應(yīng)用于對PH有嚴(yán)格要求的注射劑、滴眼劑和供配制注射劑用的原料藥的酸堿度檢查。點滴積累點滴積累。1.藥物的性狀包括外觀、溶解度、一般穩(wěn)定性和物理常數(shù)等。2.相對密度是指

12、相同的溫度、壓力條件下，某物質(zhì)的密度與水的密度之比。一般液體的相對密度用比重瓶法。3.熔點是指一種物質(zhì)按規(guī)定方法測定，由固體融化成液體的溫度、熔融同時分解的溫度或在融化時自初熔至全熔的一段溫度范圍。4.比旋度為物理常數(shù)，測定比旋度可以鑒別藥物。5.PH值測定啊是測定水溶液中氫離子活度的方法，藥典采用電位法測定。第二節(jié)第二節(jié) 藥物的鑒別實驗藥物的鑒別實驗一、藥物鑒別實驗的特點 定義：藥物鑒別實驗是根據(jù)藥物分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)，利用化學(xué)、物理化學(xué)或生物學(xué)方法來判斷藥物的真?zhèn)?，是藥品質(zhì)量檢驗工作的首項任務(wù)，只有在藥物鑒別無誤的情況下，進行藥物的雜質(zhì)檢查和含量測定才有意義。特點：（1）確證實驗 （2）個

13、別分析 （3）互相印證及綜合判斷二、藥物鑒別實驗的分類（一）一般鑒別實驗 一般鑒別實驗是依據(jù)某一類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其理化性質(zhì)的特征，通過化學(xué)反應(yīng)來鑒別藥物真?zhèn)巍?對無機藥物是根據(jù)其組成的陰離子和陽離子的特殊反應(yīng)，對有機藥物則大多都采用的典型的官能團反應(yīng)進行鑒別。2015年版藥典四部通則收載的一般鑒別項目有以下幾類：1. 芳香第一胺類 供試品+鹽酸+亞硝酸鈉+堿性萘酚，出現(xiàn)橙黃到猩紅色沉淀。2.丙二酰脲類（1）硝酸銀試液反應(yīng)：供試品+碳酸鈉+硝酸銀+過量硝酸銀，沉淀不溶解。（2）銅吡啶試液反應(yīng)：供試品+吡啶+銅吡啶，顯示紫色沉淀。3.水楊酸鹽（1）三氯化鐵反應(yīng)：加三氯化鐵，顯示紫色（2）沉淀反應(yīng)

14、：供試品+鹽酸,白色水楊酸沉淀。4.氯化物：（1）硝酸銀試液反應(yīng)： 供試品+稀硝酸+硝酸銀，白色沉淀。（2）二氧化錳-硫酸反應(yīng)：供試品+二氧化錳+硫酸+加熱，產(chǎn)生氯氣。5.鈉鹽：（1）焰色反應(yīng)：取鉑絲，鹽酸濕潤，無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。（2）焦銻酸鉀試液反應(yīng)：供試品加碳酸鉀，加熱無沉淀，加焦銻酸鉀，冷水中，出現(xiàn)沉淀。（二）專屬鑒別實驗 藥物的專屬鑒別實驗是證實某一種藥物的依據(jù)，是根據(jù)每一種藥物的依據(jù)，是依據(jù)每一種藥物的結(jié)構(gòu)特點和理化特性，選用某些特有的靈敏度高的反應(yīng)，來鑒別藥物的真?zhèn)巍?如巴比妥類藥物可以根據(jù)母核5,5位上不同取代基所具有的不同的化學(xué)性質(zhì)鑒別不同的藥物。苯巴比妥有苯環(huán)，

15、能與硫酸-亞硝酸鈉發(fā)生亞硝基化反應(yīng)來進行專屬鑒別；司可巴比妥具有雙鍵,能與碘試液發(fā)生加成反應(yīng)而鑒別。 一般鑒別試驗是指某類藥物的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)為依據(jù)，根據(jù)其相同的理化性質(zhì)進行藥物真?zhèn)舞b別，其目的是區(qū)別不同類別的藥物。專屬鑒別實驗是在一般鑒別實驗的基礎(chǔ)上利用各種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異來鑒別藥物，其目的是區(qū)別同類藥物或具有相同化學(xué)結(jié)構(gòu)的各種藥物單體，最終達到確證藥物真?zhèn)蔚哪康?。三、藥物鑒別的方法 化學(xué)藥物常用的鑒別方法有化學(xué)辨別法、光譜鑒別法、色譜鑒別法、生物學(xué)法等，對于中藥材及其提取物，制劑常用的鑒別方法還有顯微鑒別法和特征圖譜或指紋圖譜鑒別法。(一）化學(xué)鑒別法 化學(xué)鑒別法是根據(jù)藥物與規(guī)定的化學(xué)試劑在

16、一定的條件下發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的顏色、沉淀、氣體等現(xiàn)象鑒別藥物真?zhèn)蔚姆椒ā；瘜W(xué)鑒別法有一定的專屬性和靈敏性，簡便易行，所以化學(xué)鑒別法是最常用的鑒別方法之一。 化學(xué)鑒別法要注意鑒別實驗的條件，否則會影響結(jié)果的判斷。影響鑒別反應(yīng)的因素主要有溶液的濃度、溫度、酸堿度，反應(yīng)時間和共存的干擾物質(zhì)等。此外，在選擇化學(xué)鑒別反應(yīng)時要注意其反應(yīng)的靈敏性和專屬性。（二)光譜鑒別法%11cmE1.紫外-可見分光光度法 是通過測定藥物在紫外-可見光區(qū)的吸收光譜特征對藥物進行鑒別的方法。鑒別的主要依據(jù)是具有共軛體系的有機藥物在紫外光區(qū)或可見光區(qū)有明顯的特征吸收，根據(jù)吸收光譜特征如最大吸收波長的吸收系數(shù)進行鑒別。但是具

17、有相同或者相似共軛體系結(jié)構(gòu)的不同藥物，常表現(xiàn)一些特征吸收，故本法用于藥物鑒別，專屬性不如紅外光譜法。常用的鑒別方法有：（1）對比吸收系數(shù)的一致性 吸收系數(shù)是吸光物質(zhì)的物理常數(shù)，可以用于藥物的鑒別。如：藥典2015年版規(guī)定貝諾酯加無水乙醇制成每1ml約含7.5ug的溶液，在240nm的波長處有最大吸收；在240nm處測定吸光度，按干燥品計算：吸收系數(shù)為730-760（2）對比最大吸收波長、最小吸收波長、肩峰波長的一致性：藥典2015年版規(guī)定布洛芬加0.4%氫氧化鈉溶液制成每1ml中含0.25mg的溶液。在265nm與273nm的波長處有最大吸收,在245nm與271nm波長處有最小吸收，在259

18、nm處有一肩峰。（3）對比最大吸收波長及其吸光度的一致性，藥典2015年版規(guī)定地西泮加硫酸甲醇溶液制成每1ml含5ug的溶液，在242、284、366nm的波長處有最大吸收；在242nm波長處吸光度約為0.51，在284nm處的吸光度為0.23.（4）對比吸光度比值的一致性：藥典規(guī)定奮乃靜加甲醇制成規(guī)定溶液，在313nm與258nm處的吸光度比值為0.12-0.13.2.紅外分光光度法 是通過測定藥物在紅外光驅(qū)的吸收光譜對藥物進行鑒別的方法。專屬性強，應(yīng)用較廣。主要用于組分單一或結(jié)構(gòu)明確的原料藥，特別適合于用其他方法不易區(qū)分的同類藥物的鑒別，比如甾體激素類，磺胺類和半合成抗生素類。（1）藥物紅外光譜圖示例：（2）鑒別方法：采用標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照法，規(guī)定條件測定藥物紅外光譜，與藥品紅外光譜圖集中對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)圖譜對比，核對峰位、峰形、和相對強度是否一致，應(yīng)該按照藥物在藥典正文或光譜圖中備注的方法進行預(yù)處理后，再進行繪制對比。如黃體酮的紅外吸收光譜圖。（三）色譜鑒別法 色譜鑒別法是利用物質(zhì)在一定的 色譜條件下所產(chǎn)生