LCTechGPC操作規(guī)程

1、LCTECH GPCULTRA（全在線(xiàn)預(yù)濃縮-凈化-定量濃縮聯(lián)用）操作說(shuō)明一、 原理GPC（Gel Permeation Chromatography）凝膠凈化色譜是根據(jù)溶質(zhì)分子大小進(jìn)行分離的色譜技術(shù)，選擇性?xún)H與分子大小的差異有關(guān)。要改進(jìn)分離度只能靠凝膠的孔徑大小和孔徑分布的最佳化來(lái)實(shí)現(xiàn)。試樣的分離并不依賴(lài)于溶劑與試樣間的相互作用力（與一般色譜的不同）。輸液泵將流動(dòng)相與樣品帶入凈化柱，試樣中各組分按照分子大小順序洗脫，大分子油脂、色素、生物堿、聚合物先淋洗出來(lái)農(nóng)藥等較小分子后淋洗出來(lái)，檢測(cè)器檢測(cè)出信號(hào)，組分收集器收集含有目標(biāo)組分的洗脫液。二、 操作注意事項(xiàng)1、 硬件部分主機(jī)電源只用開(kāi)一個(gè)，開(kāi)關(guān)

2、機(jī)間隔1 min以上；冷凝水開(kāi)關(guān)三個(gè)，確保冷凝水箱是滿(mǎn)的；真空瓶需用防爆瓶，收集瓶盡量也用防爆瓶；定期倒掉廢液，檢查廢液瓶容積；不要觸摸進(jìn)樣針，只有在儀器處于關(guān)閉狀態(tài)時(shí)，才可用手移動(dòng)機(jī)械臂；定量環(huán)5 mL，一次準(zhǔn)確上樣5 mL，二聯(lián)機(jī)實(shí)際吸取樣品大于5 mL（滿(mǎn)環(huán)上樣）。2、 凝膠凈化柱農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)柱：Bio-Breads S-X3 200-400目，柱長(zhǎng)400 mm，內(nèi)徑25 mm，流速一般5 mL/min。一根柱子一般可用2-3年，可分析5000個(gè)樣品。3、 樣品去除樣品中可見(jiàn)雜質(zhì)；樣品脫水；上柱時(shí)樣品必須是環(huán)己烷/乙酸乙酯體系，丙酮極性大進(jìn)柱子會(huì)使填料膨脹；含油量高的樣品，上樣1 g，因?yàn)橛?/p>

3、含量太高容易堵塞柱子上下過(guò)濾膜。4、 儀器維護(hù)避免柱干，儀器不用時(shí)一個(gè)星期沖一次，對(duì)于沸點(diǎn)高的體系2-3個(gè)星期沖一次也行。沖洗方法為：直接開(kāi)主機(jī)電源，按泵上start按鈕，以5 mL/min速度沖15 min（約75 mL溶劑）。5、 故障清除泵壓：液相泵壓力顯示范圍為0.2-11.2 Bar。低壓報(bào)警：低于0.2 Bar時(shí)，說(shuō)明管路中有氣泡，在stop（不工作）模式下，松開(kāi)半圈黃色閥門(mén)，兩只手同時(shí)按住鍵排氣泡，直到氣泡排除干凈松開(kāi)兩只手，擰緊閥門(mén)即可。高壓報(bào)警：柱子堵了，柱子流向是下進(jìn)上出，一般進(jìn)口端（下端）易堵，此時(shí)可將柱子反接，沖洗一段時(shí)間排除故障。反壓閥（阻尼器）堵了，將其拆下不接入管

4、路，開(kāi)泵沖洗管路，如果壓力到1 Bar，說(shuō)明阻尼器堵，此時(shí)將阻尼器用丙酮超聲15 min后重新接入管路中。閥未切回來(lái)也可導(dǎo)致壓力過(guò)高，重新開(kāi)機(jī)自檢一般可排除故障，如果不行，說(shuō)明閥出問(wèn)題。在儀器運(yùn)行樣品處理程序時(shí)，如要停止運(yùn)行，需要關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)，如要繼續(xù)執(zhí)行處理程序，在關(guān)閉電源開(kāi)關(guān)一分鐘后，再重新開(kāi)機(jī)。處理程序被取消后，一旦儀器再次開(kāi)機(jī)并且自檢完畢后，需要通過(guò)樣品表執(zhí)行清洗程序（按F1鍵選擇）。三、 軟件介紹UltraSoft_1.17：更穩(wěn)定，不能保存紫外譜圖UltraSoft_2.08：可以保存紫外譜圖GPC_Ultra_Concentrator：濃縮模式GPC_Ultra_Online_G

5、PC：在線(xiàn)模式GPC總共有三種模式： 單濃縮：一次可分析26個(gè)樣，定容到2 mL/5 mL 二聯(lián)機(jī)：凈化+定量濃縮，滿(mǎn)環(huán)上樣，上樣會(huì)有損失，一般預(yù)先將樣品定容到10 mL，只上樣5 mL。 三聯(lián)機(jī)：預(yù)濃縮+凈化+定量濃縮（+），全部上樣，沒(méi)有損失。三個(gè)樣品盤(pán)： 多用盤(pán)：?jiǎn)螡饪s+三聯(lián)機(jī)，樣品瓶（100 mL）/收集瓶（16 mL） 二聯(lián)機(jī)：樣品瓶（16 mL）/收集瓶（2 mL2）/收集瓶（4 mL1） 三聯(lián)機(jī)：樣品瓶（60 mL）/收集瓶（2 mL2）/收集瓶（4 mL1）更換樣品盤(pán)時(shí)，凹槽對(duì)準(zhǔn)中心軸在離線(xiàn)狀態(tài)下更換最佳，如果是在線(xiàn)更換，需重新selftest自檢。四、 GPC_Ultra_C

6、oncentrator（單濃縮模式）點(diǎn)擊桌面GPC_Ultra_Concentrator進(jìn)入單濃縮界面，菜單欄中system圖標(biāo)亮成綠色，表示連機(jī)正確。輸入密碼admin，點(diǎn)擊屏幕中綠色的按鈕logon進(jìn)行登錄，登錄成功時(shí)工具欄被激活，否則工具欄是灰色的。1、 自檢點(diǎn)擊（status）進(jìn)入系統(tǒng)狀態(tài)窗口，每當(dāng)儀器重新開(kāi)機(jī)或改換樣品盤(pán)后，都需要進(jìn)行系統(tǒng)自檢。自檢操作過(guò)程：點(diǎn)擊“selftest”-選擇正確的樣品盤(pán)-再點(diǎn)擊“selftest”儀器將進(jìn)行自檢程序。2、 方法編輯點(diǎn)擊圖標(biāo)可創(chuàng)建新方法或?qū)σ砸呀⒑玫姆椒ㄟM(jìn)行參數(shù)修改。每個(gè)方法可輸入方法名稱(chēng)、方法 ID 號(hào)和詳細(xì)說(shuō)明，進(jìn)行方法的詮釋?zhuān)@些方

7、法的內(nèi)容可打印在試驗(yàn)樣品記錄中。在編輯樣品序列時(shí)，可選擇相應(yīng)的方法 ID 號(hào)來(lái)指定樣品運(yùn)行的方法?？偣部删庉嫶鎯?chǔ) 97 個(gè)方法（#1#97），如果只做單濃縮，在1-19,41-98中編輯，因?yàn)?0-40是三聯(lián)機(jī)預(yù)留方法。如果做三聯(lián)機(jī)，則需要在單濃縮和二聯(lián)機(jī)模式下都編輯好相應(yīng)方法參數(shù)，且方法序數(shù)（20-40號(hào)）要一致，最后在單濃縮模式下編輯序列運(yùn)行。二聯(lián)機(jī)模式的話(huà)隨便哪個(gè)方法序號(hào)都可以。首先在open/save中選擇方法序數(shù)，Name中輸入方法名稱(chēng)，Procedure中選擇運(yùn)行程序。方法參數(shù)編輯好后，必須在“PC”和“system”中都進(jìn)行保存。 單濃縮程序說(shuō)明：Procedure 1 Syst

8、em rinsing program 系統(tǒng)內(nèi)部清洗程序(只清洗不上樣)，默認(rèn)設(shè)定，不需要修改。Procedure 2 Standard Evaporation 標(biāo)準(zhǔn)濃縮模式 先大體積（高位激光5 mL）小體積（低位激光2 mL）定容到5 mL，需注意的是，5 mL樣品不是能夠完全被轉(zhuǎn)移出來(lái)的，管子有一定的內(nèi)徑。Procedure 3 Concentrate for SPE 用于 SPE 的快速濃縮模式，不定容，體積不準(zhǔn)，樣品直接轉(zhuǎn)移到原樣品瓶。Procedure 4 Solvent Exchange Complex不蒸干溶劑轉(zhuǎn)換，只能是低沸點(diǎn)溶劑變成高沸點(diǎn)溶劑轉(zhuǎn)換，一般2-3次可轉(zhuǎn)換完全，定容

9、體積5 mL。Procedure 6 Precess to Dryness蒸干溶劑轉(zhuǎn)換，可用于高沸點(diǎn)溶劑轉(zhuǎn)換成低沸點(diǎn)溶劑，適用于相對(duì)干凈的樣品，不會(huì)在濃縮腔壁上產(chǎn)生沉淀，定容體積5 mL。Procedure 7 & Internal Standard加入內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)濃縮，不需要通過(guò)激光的準(zhǔn)確判斷，直接濃縮到低位激光，過(guò)程更快，定容體積2 mL。 參數(shù)編輯 單濃縮部分主要是溫度和真空度影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，真空度為主，溫度為輔。以溶劑沸點(diǎn)60-70為分界點(diǎn)，低沸點(diǎn)溶劑油浴溫度為33-35，真空度360-400 mbar；高沸點(diǎn)溶劑油浴溫度為40，真空度180-200 mbar。Parameters in P

10、rocess to Upper Laser 第一次濃縮（高位濃縮，5 mL）Heat Bath Temperature（油浴溫度）：30-70 乙酸乙酯/環(huán)己烷作為流動(dòng)相，濃縮腔最佳溫度為40。如使用不同的溶劑，濃縮腔溫度設(shè)定必須要與相應(yīng)溶劑的沸點(diǎn)相對(duì)應(yīng)。Nominal vacuum（真空度）：濃縮腔設(shè)定真空度大約要低于1040mbar相對(duì)應(yīng)溶劑的蒸汽壓。Shut Down vacuum（結(jié)束真空度）：設(shè)置與Nominal vacuum相同即可。Automatic Mode（自動(dòng)模式）：不打勾，自動(dòng)模式適用于復(fù)雜體系的濃縮。自動(dòng)模式下前面設(shè)置的溫度和真空度都沒(méi)用。Frequency Limit

11、 of the Vacuum Pump：默認(rèn)值30 HZParameters in Process to Lower Laser 第二次濃縮（低位濃縮，2 mL）Heat Bath Temperature（油浴溫度）：一般與第一次濃縮一致。Nominal vacuum（真空度）：真空度要比濃縮過(guò)程1的真空度低，為了在一個(gè)緩和的條件下濃縮。此階段真空度可以設(shè)定為所用溶劑的蒸汽壓。真空濃縮壓力程序2設(shè)定壓力范圍10500mbar。其它同第一次濃縮。Sample Transfer to Vacuum Chamber 將樣品吸入濃縮腔參數(shù)的設(shè)定vacuum for Sample Suction（抽樣真

12、空度）：一般設(shè)定700-800 mbar。沸點(diǎn)越低設(shè)定數(shù)值越高。乙酸乙酯/環(huán)己烷體系777 mbar。Batch Interval（進(jìn)樣間隔）：當(dāng)樣品體積大于100 mL時(shí)，先抽100 mL樣品進(jìn)入濃縮腔，先濃縮一段時(shí)間，再將剩余的樣品抽入濃縮腔繼續(xù)濃縮。一般設(shè)成600 s。Rinsing Cycles of Sample bottle（清洗次數(shù)）：一般清洗1次。Solvent (red/grey/viol/oran)（清洗溶劑）：可以選擇不同顏色接口瓶中的溶劑。Rinsing volume for Sample Vial（清洗體積）：一般3000 L。sediment of Sample（含

13、沉淀物樣品）： NO =低位置取樣，樣品瓶底部（無(wú)沉淀），YES =高位置取樣，進(jìn)樣針在距瓶底大約10mm的位置（樣品有沉淀物）。Parameters for the ProcessSolvent Exchange SE 溶劑轉(zhuǎn)換參數(shù)設(shè)定只有在Procedure 4 Solvent Exchange Complex時(shí)才有用。Heat Bath Temperature（油浴溫度）：設(shè)置成轉(zhuǎn)換后高沸點(diǎn)溶劑相對(duì)應(yīng)的溫度。Nominal vacuum（真空度）：設(shè)置成轉(zhuǎn)換后高沸點(diǎn)溶劑相對(duì)應(yīng)的真空度。Shut Down vacuum（結(jié)束真空度）：設(shè)置與Nominal vacuum相同即可。Automa

14、tic Mode（自動(dòng)模式）：不打勾，自動(dòng)模式適用于復(fù)雜體系的濃縮。自動(dòng)模式下前面設(shè)置的溫度和真空度都沒(méi)用。Frequency Limit of the Vacuum Pump：默認(rèn)值30 HZ。Solvent used for solvent exchange（轉(zhuǎn)換溶劑）：可以選擇不同顏色接口瓶中的溶劑。Volume of Solvent used for SE（轉(zhuǎn)換溶劑體積）：指一次轉(zhuǎn)換的體積，一般3000 L。Number of SE-Cycles（轉(zhuǎn)換次數(shù)）：一般4次。Rinsing after Process downto upper Laser Level 濃縮到高位激光位的清洗當(dāng)

15、樣品濃縮到高位激光位后，將抽1-2 mL溶劑進(jìn)行濃縮腔的清洗，一般清洗兩次就滿(mǎn)足清洗效果。清洗溶劑種類(lèi)可通過(guò)1-4鍵進(jìn)行選擇。Rinsing volume：2000 LRinsing Cycles：2 timesSolvent for (red/grey/viol/oran):Rinsing after Process downto Lower Laser Level 濃縮到低位激光位的清洗濃縮到低位激光位時(shí)（已經(jīng)有2 mL了），濃縮腔清洗參數(shù)設(shè)定時(shí)，要注意溶劑用量不能過(guò)多（1st+ 2nd3 mL），不然溶劑量超過(guò)高位激光位，儀器不進(jìn)行定容。如溶劑用量過(guò)少，清洗效果不夠，會(huì)影響回收率。Sol

16、vent Volume for 1st Rinsing：1500 LSolvent Volume for 2nd Rinsing：1500 LSolvent Type used for Rinsing（清洗溶劑）：可以選擇不同顏色接口瓶中的溶劑。Filling Volume of concentrate（濃縮后轉(zhuǎn)移出來(lái)的體積）：全部轉(zhuǎn)移5000 L（實(shí)際小于5000 L，因?yàn)楣苈酚袣埩簦?。如果設(shè)置成2 mL，說(shuō)明另外3 mL排廢。特別注意：如果用Procedure 7 & Internal Standard內(nèi)標(biāo)濃縮程序時(shí)，因?yàn)樽罱K定容體積是2.0 mL，所以1st Rinsing（250 L）

17、，2nd Rinsing（250 L）Dilution of Concentrate 樣品稀釋為下一步過(guò)柱子做準(zhǔn)備，一般不用。Volume for Dilution Concentrate（稀釋體積）：0 LRinsing of Chamber 系統(tǒng)清洗Solvent for Pre-Rinsing of Chamber（預(yù)清洗）：一般用4.grey丙酮清洗Solvent for Main-Rinsing of Chamber（主清洗）：一般用7.orange乙酸乙酯和環(huán)己烷清洗Solvent Volume for Rinsing the Chamber（主清洗體積）：指每次所以體積，3000

18、 LNumber of rinsing cycles（清洗次數(shù)）：一般3次。 Cooler：一般6。方法參數(shù)編輯好后，必須在“PC”和“system”中都進(jìn)行保存。3、 樣品序列編輯點(diǎn)擊圖標(biāo)（sample）進(jìn)入樣品序列編輯窗口，首先通過(guò)“Rack”下拉菜單選擇合適的樣品盤(pán)，選擇要使用的方法，點(diǎn)“”圖標(biāo)，將該方法輸入在序列菜單中。序列是從1開(kāi)始按順序運(yùn)行，如果中間的某個(gè)樣品不想做了，但又不想影響后面的樣品，可以將該位置設(shè)置為方法 99（skip）。在序列最后一個(gè)樣品的后面一位，要設(shè)置為方法 0（Stop），顯示為桔黃色。這意味著整個(gè)樣品序列的結(jié)束。樣品序列編輯好后，點(diǎn)擊進(jìn)行保存并命名。特別說(shuō)明：

19、如果連接了紫外檢測(cè)器，則有可能需要自動(dòng)保存紫外圖譜。自動(dòng)保存需要在序列的樣品名前加上$。否則，序列里的圖譜均無(wú)法自動(dòng)保存，只有最后一個(gè)樣品做完后，可以手動(dòng)的點(diǎn)擊“Save”保存。4、 運(yùn)行序列重新回到status狀態(tài)窗口，點(diǎn)擊（open）圖標(biāo)，調(diào)出編輯好的樣品序列，點(diǎn)擊“start process”按鈕，儀器運(yùn)行樣品方法。開(kāi)始運(yùn)行后，根據(jù)樣品盤(pán)上的不同的顏色來(lái)表示樣品處于的不同狀態(tài)。運(yùn)行結(jié)束后，也會(huì)在信息欄里告知，而且所有運(yùn)行完的樣品顯示為綠色。5、 紫外檢測(cè)器的操作點(diǎn)擊圖標(biāo)進(jìn)入紫外檢測(cè)器數(shù)據(jù)監(jiān)測(cè)窗口，在可以實(shí)時(shí)觀(guān)察紫外光譜圖或打開(kāi)已保存紫外光譜圖。特別說(shuō)明：紫外光譜圖察看和處理必須是在二聯(lián)機(jī)

20、或 GPC Vario 中進(jìn)行。如需將樣品運(yùn)行時(shí)監(jiān)測(cè)紫外光譜圖進(jìn)行保存，需在編輯樣品序列時(shí)，在樣品名前加前綴“$”。在紫外監(jiān)測(cè)窗口點(diǎn)擊圖標(biāo)，可以打開(kāi)以保存的紫外光譜圖。此窗口可以同時(shí)顯示 6 條紫外光譜曲線(xiàn)，通過(guò)勾選曲線(xiàn)“t”和“plot”方框，可以顯示紫外光譜圖的時(shí)間和光譜吸收峰。6、 查看和打印試驗(yàn)記錄點(diǎn)擊圖標(biāo)進(jìn)入試驗(yàn)記錄窗口，窗口中將顯示樣品、方法和序列的描述和樣品處理程序的參數(shù)等信息。通過(guò)點(diǎn)擊圖標(biāo)可以直接打印此窗口頁(yè)面。五、 GPC_Ultra_Online_GPC（二聯(lián)機(jī)模式）點(diǎn)擊桌面GPC_Ultra_Online_GPC進(jìn)入二聯(lián)機(jī)界面，菜單欄中system圖標(biāo)亮成綠色，表示連機(jī)正

21、確。輸入密碼admin，點(diǎn)擊屏幕中綠色的按鈕logon進(jìn)行登錄，登錄成功時(shí)工具欄被激活，否則工具欄是灰色的。1、 自檢同單濃縮模式2、 方法編輯點(diǎn)擊圖標(biāo)可創(chuàng)建新方法或?qū)σ砸呀⒑玫姆椒ㄟM(jìn)行參數(shù)修改。每個(gè)方法可輸入方法名稱(chēng)、方法 ID 號(hào)和詳細(xì)說(shuō)明，進(jìn)行方法的詮釋?zhuān)@些方法的內(nèi)容可打印在試驗(yàn)樣品記錄中。在編輯樣品序列時(shí)，可選擇相應(yīng)的方法 ID 號(hào)來(lái)指定樣品運(yùn)行的方法?？偣部删庉嫶鎯?chǔ) 97 個(gè)方法（#1#97），二聯(lián)機(jī)模式的話(huà)隨便哪個(gè)方法序號(hào)都可以。首先在open/save中選擇方法序數(shù)，Name中輸入方法名稱(chēng)，Procedure中選擇運(yùn)行程序。方法參數(shù)編輯好后，必須在“PC”和“system”中

22、都進(jìn)行保存。 二聯(lián)機(jī)程序說(shuō)明：Procedure 1 System rinsing program 系統(tǒng)清洗程序(只清洗不上樣)，默認(rèn)設(shè)定，編輯方法時(shí)不需要修改。Procedure 3 GPC with int. StandardGPC 凈化后濃縮定容到2 mL，可使用內(nèi)標(biāo)（2 mL體積怕不準(zhǔn)）.Procedure 4 GPC+ ALiqGPC 凈化后濃縮定容到 5 mL，可實(shí)現(xiàn)分樣收集功能。程序 4 要求將濃縮后的樣品準(zhǔn)確的分樣收集在*2，*3，*4 的 3 個(gè)位置中的瓶子內(nèi)。當(dāng)分析的樣品要求上不同檢測(cè)器檢測(cè) S、N、P 時(shí)，收集的樣品可以分別上檢測(cè)器分析。Procedure 5 GPC +

23、 SE + Aliq GPC不蒸干溶劑轉(zhuǎn)換。凈化濃縮后實(shí)現(xiàn)溶劑轉(zhuǎn)換后定容到 5 mL，并可實(shí)現(xiàn)分樣功能，轉(zhuǎn)換的溶劑默認(rèn)選用 Voilet （紫色瓶）的溶劑，注意正確選用轉(zhuǎn)換溶劑。Procedure 7 GPC Elluet to Dryness蒸干溶劑轉(zhuǎn)換。定容到 5 mL。Procedure 13 Flask rinsing program 濃縮腔清洗程序，全自動(dòng)，不需要設(shè)定參數(shù)。只有濃縮腔和 VK 閥會(huì)被清洗。這是讓用戶(hù)專(zhuān)門(mén)的單獨(dú)清洗濃縮腔的程序。其中，只需要設(shè)置油浴溫度，清洗閥和濃縮腔的次數(shù)。 參數(shù)編輯根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法上規(guī)定的餾分收集時(shí)間來(lái)設(shè)定，需要注意的是我們的GPC柱長(zhǎng)400 mm，內(nèi)徑

24、25 mm，如果標(biāo)準(zhǔn)方法與之不同，需對(duì)應(yīng)修改，也可參照經(jīng)驗(yàn)值設(shè)定。Parameters for Process column Clean Up GPC上樣過(guò)程參數(shù)設(shè)置GPC Flow rate（GPC流速）：默認(rèn)5 mL/minColumn Pre-Clean Timer（預(yù)沖洗時(shí)間）：10-30 sGPC Forerun（丟棄時(shí)間）：GPC-Main Fraction（收集時(shí)間）：GPC-Tailing（沖洗時(shí)間）：300 s夠了Column Selection：默認(rèn)值Sedimentation of sample：不打勾Solvent Exchange（溶劑轉(zhuǎn)換次數(shù)）：只針對(duì)Procedu

25、re 5 有用，轉(zhuǎn)換的溶劑默認(rèn)選用 Voilet （紫色瓶）的溶劑，一般3-4次足夠。Parameters for Process Clean Up the System 系統(tǒng)清洗為保證系統(tǒng)連續(xù)工作，在處理樣品期間要進(jìn)行沖洗，包括進(jìn)樣環(huán)和注射口。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，清洗3次便可以達(dá)到滿(mǎn)意的清潔效果，無(wú)須過(guò)分追求清洗的次數(shù)。Rinsing：3 timesRinsing Needle：3 timesParameters for Vacuum process 濃縮過(guò)程設(shè)置Heating Bath Temperature（油浴溫度）：30-70 乙酸乙酯/環(huán)己烷作為流動(dòng)相，濃縮腔最佳溫度為40。如使用不同的溶劑，濃縮腔溫度設(shè)定必須要與相應(yīng)溶劑的沸點(diǎn)相對(duì)應(yīng)。Pressure Phase 1（第一步濃縮）：濃縮腔設(shè)定真空度大約要低于1040mbar相對(duì)應(yīng)溶劑的蒸汽壓。乙酸乙酯/環(huán)己烷體系180-200 mbar。Pressure Phase 2（第二步濃縮）：真空度要比濃縮過(guò)程1的真空度低。乙酸乙酯/環(huán)己烷體系200-220 mbar。Pressure