蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選

1、蛋白酶產(chǎn)生菌的篩選組別：第*組班級(jí)：生工*班組員：* 指導(dǎo)老師：*一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)從自然界中分離蛋白酶產(chǎn)生菌二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容蛋白酶產(chǎn)生菌的分離三、實(shí)驗(yàn)原理許多細(xì)菌和霉菌產(chǎn)生蛋白酶，細(xì)菌中的芽孢桿菌是最常見(jiàn)的蛋白酶產(chǎn)生菌。本實(shí)驗(yàn)將土壤樣品懸液加熱處理，殺死非芽孢細(xì)菌及其他微生物后進(jìn)行劃線分離得到芽孢桿菌，將其接種到奶粉培養(yǎng)平板并進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)奶粉平板的水解圈做初篩。將初篩的蛋白酶產(chǎn)生菌接入產(chǎn)酶培養(yǎng)基振蕩培養(yǎng)，測(cè)定蛋白酶的活力，最終得到產(chǎn)蛋白酶的芽孢桿菌。也可直接將細(xì)菌接種到奶粉培養(yǎng)平板進(jìn)行培養(yǎng)，分離篩選其他蛋白酶產(chǎn)生菌。四、實(shí)驗(yàn)材料和用具1.材料：土壤樣品2.試劑：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)及平板、奶粉培養(yǎng)基

2、平板、45ml無(wú)菌水（帶玻璃珠）、芽孢染色液、3.儀器及用具：紫外分光光度計(jì)、顯微鏡、恒溫水浴鍋、搖床、酒精燈、接種針、游標(biāo)卡尺、無(wú)菌移液管、無(wú)菌試管、量筒、容量瓶、漏斗、試劑瓶、漏斗、載玻片、濾紙、擦鏡紙。五、操作步驟（一） 配制所需培養(yǎng)基按照以下配方配制所需的培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，nacl 0.5g，瓊脂 1.52.0g，水 100ml，ph 7.2 配制200ml奶粉培養(yǎng)基：牛肉膏 0.5g，蛋白胨 1g，nacl 0.5g，瓊脂 2.0g，水 100ml，ph 7.07.2脫脂奶粉 3g，配制200ml（二） 分離1.采集土壤樣品，用無(wú)菌水植被1:1

3、0土壤懸液。2.取1:10土壤懸液5 ml，注入已滅過(guò)菌的試管中，將此試管放入7580水浴中熱處理10min以殺死非芽孢細(xì)菌。3.取加熱處理過(guò)的土壤懸液100200l，涂布接種到牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)平板，后將平板倒置，于3032下培養(yǎng)2448h.4.對(duì)長(zhǎng)出的單菌落進(jìn)行編號(hào)，選擇表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少許菌苔涂片，做芽孢染色，判斷是否為芽孢桿菌。（三） 篩選1、從判定為芽孢桿菌的菌落處，分別挑取少許菌苔，先接種奶粉斜面培養(yǎng)基，再轉(zhuǎn)接奶粉培養(yǎng)基平板上，3032下培養(yǎng)2448h。2、選擇水解圈直徑與菌落直徑比值大的菌，接入牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基30-32振蕩培養(yǎng)48小時(shí)，將發(fā)酵液過(guò)濾或離心，取清

4、夜檢測(cè)蛋白酶活力進(jìn)行復(fù)篩。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：相關(guān)圖片：（2）菌株的分離根據(jù)菌落大小、形狀、表面光澤、隆起程度、透明程度、邊緣性狀和菌落顏色的差別，最終從培養(yǎng)基上篩選出23個(gè)菌落。（3）將分離到的菌株分別接種到含脫脂奶粉的培養(yǎng)基上，置于32培養(yǎng)60h，于室溫下觀察是否產(chǎn)生細(xì)胞外蛋白酶，分解培養(yǎng)基中的脫脂牛奶，進(jìn)而產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的水解透明圈。結(jié)果表明，在接種的23株菌落中，共有18株產(chǎn)生胞外蛋白酶分解脫脂牛奶，形成肉眼可見(jiàn)的透明圈。從中篩選出9株水解圈與菌落直徑比值較大的菌株。如下表：菌株編號(hào)123456789比值+說(shuō)明：“+”表示：水解圈與菌落直徑比值約為3：1，“+”表示：水解圈與菌落直徑大于3：1.。六、結(jié)果分析在奶粉培養(yǎng)基平板上，蛋白質(zhì)被孢芽桿菌產(chǎn)生的蛋白酶水解，形成透明圈（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)相關(guān)圖片）。不同種類的微生物產(chǎn)生的蛋白酶的種類和活力各不相同，起