DB1303∕T 286-2020 豬傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)程

1、ICS 11.220B 41DB1303秦皇島市地方標準DB 1303/T 2862020豬傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)程2020 - 11 - 25 發(fā)布2020 - 11 - 28 實施秦皇島市市場監(jiān)督管理局發(fā) 布DB13/T XXXXXXXX前言本文件按照GB/T 1.12020標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由河北科技師范學院提出。 本文件由秦皇島市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。本文件起草單位：河北科技師范學院。本文件主要起草人：芮萍、張珍珍，關(guān)景林，宋濤、葉云鵬、嚴世杰、焦桂華、馬增軍、劉謝榮。I庫七七 標準下載豬傳染性胸膜肺炎防治技術(shù)規(guī)程1 范圍本文件規(guī)定了豬傳染

2、性胸膜肺炎的術(shù)語和定義、診斷和防治措施。本文件適用于秦皇島地區(qū)生豬飼養(yǎng)場（戶）和動物診療單位對豬傳染性胸膜肺炎的診斷和防治。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 17824.2-2008規(guī)模豬場生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY/T 537-2002 豬放線桿菌胸膜肺炎診斷技術(shù)NY 5030-2006 無公害食品 生豬飼養(yǎng)獸藥使用準則NY 5031-2001 無公害食品 生豬飼養(yǎng)獸醫(yī)防疫準則SN/T 1447-2011 豬傳染性胸膜肺炎檢

3、疫技術(shù)規(guī)范中華人民共和國獸藥典獸藥質(zhì)量標準（不建議引用，若引用，建議寫全名稱及版本）3 術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4 診斷病原胸膜肺炎放線桿菌為巴氏桿菌科放線桿菌屬，革蘭氏陰性小球桿菌，有莢膜和鞭毛。根據(jù)莢膜多糖和LPS的抗原性差異，目前將APP分為15個血清型，其中血清1型和5型又分為 1a、1b及5a、5b兩個亞型。根據(jù)對輔酶（NAD）的依賴性，又分為生物型和型，型依賴NAD，包括112及15型，型不依賴NAD，包括13、14型。其中血清1、5、9和11型的毒力最強，3和6型毒力低。流行特點4.2.1 發(fā)病日齡各種年齡豬均易感，其中6周齡至6月齡的豬較多發(fā)，但以3月齡仔豬最

4、為易感。4.2.2 發(fā)病季節(jié)一年四季均可發(fā)生，但夏末秋初或冬末春初時較易發(fā)生。14.2.3 傳染源病豬和亞臨床感染帶菌豬。4.2.4 傳播途徑傳播途徑主要包括：直接接觸或短距離的飛沫傳播；遠距離可通過污染的工具和飼養(yǎng)人員的衣服、靴子以及漂浮于空氣中的氣溶膠傳播；小嚙齒類動物和鳥也可能傳播此病；引種使不同豬群間傳播；飼養(yǎng)環(huán)境突然改變、豬群的轉(zhuǎn)移或混群、擁擠或長途運輸、通風不良、濕度過高、氣溫驟變等 應(yīng)激因素，均可引起本病發(fā)生或加速疾病傳播。臨床癥狀4.3.1 最急性型主要表現(xiàn)為：發(fā)病突然，體溫高達 41.5，精神沉郁；呼吸困難，血液循環(huán)衰竭，在鼻、耳、腿和軀體末稍表現(xiàn)發(fā)紺，很快死亡；有的病例看不

5、到任何臨床癥狀，突然死亡，通常于口腔和鼻孔流出大量的血色分泌物。4.3.2 急性型主要表現(xiàn)為：呼吸髙度困難，張口呼吸，嚴重腹式呼吸，呈犬坐姿勢，體溫可達 40.541，表現(xiàn)精神沉郁，拒食；死亡前鼻孔流出大量帶血泡沫狀液體。4.3.3 慢性型主要表現(xiàn)為：在急性癥狀消失之后，往往轉(zhuǎn)成亞急性或慢性型。此期很少有發(fā)熱或者不發(fā)熱；見咳嗽、喘氣，運動時更加明顯，生長不良。4.3.4 其他表現(xiàn)為：流產(chǎn)，尤以 SPF 豬群多見；胸膜肺炎放線桿菌 3 型菌株感染多為慢性型經(jīng)過，且并發(fā)關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎及不同部位的膿腫。病理剖檢特征4.4.1 本病的病變僅出現(xiàn)在胸腔的組織器官。肺炎病變大多為雙側(cè)性、局灶性，病變在膈

6、葉為主，往 往涉及心葉和間葉，病變部與健部界限清楚。4.4.2 最急性型病理剖檢特征為：以泛發(fā)性纖維素性出血性胸膜肺炎病變?yōu)橹饕卣鳎挥袛⊙Y變化，肺臟嚴重充血、出血，呈暗紅色，膨大；肺病變組織脆弱易碎，往往切面不整，流出大量血色液體，胸腔中有大量的血色液體。4.4.3 急性型病理剖檢特征為：肺臟嚴重出血，呈暗紅色，腫脹實變，肺臟切面迅速滲出血液；氣管和支氣管充滿泡沫樣血色黏液分泌物，胸腔中有血色液體。4.4.4 慢性型病理剖檢特征為：最常見在膈葉上有大小不等的壞死結(jié)節(jié)，周圍包有結(jié)締組織形成的厚包囊，壞死結(jié)節(jié)有的在肺2內(nèi)部，有的突出于肺表面；剖檢見嚴重的心包炎，心內(nèi)膜有出血點。肺臟表面覆蓋纖維

7、素性滲出物，或者與胸壁粘連，或 者肺臟表面和實質(zhì)有膿性病灶。病原學診斷4.5.1 病料采集病料采集方式如下：a) 活體病料采集：用棉拭子伸入鼻腔采集分泌物，放入無菌試管中立即送回實驗室；b) 死后病料采集：無菌采集具有典型病變的肺組織、胸水、鼻及氣管滲出物，立即接種培養(yǎng)基或 送回實驗室；c) 樣品運送：采集的樣品，應(yīng)在 4條件下，24 h 內(nèi)送回實驗室。4.5.2 涂片鏡檢涂片作常規(guī)革蘭氏染色鏡檢，APP為革蘭氏染色陰性，兩極著染略深的小球桿菌或纖細桿菌。繼代培養(yǎng)中呈明顯多形態(tài)，幼齡培養(yǎng)物中偶有成絲狀。4.5.3 細菌分離培養(yǎng)無菌將病料接種到TSA+培養(yǎng)基，置于5% CO2環(huán)境37培養(yǎng)1824

8、 h（燭缸培養(yǎng)亦可），觀察細菌的生長情況。分離菌在TSA+培養(yǎng)基平板上長出圓形、表面光滑、灰白色半透明的水珠樣菌落。4.5.4 CAMP（第一次出現(xiàn)，應(yīng)寫全程，或者是在縮略語中表明）試驗用金黃色葡萄球菌在7%鮮血瓊脂平板中央劃一條直的接種線，然后在線的兩側(cè)距離3 mm5 mm處垂直劃線接種每個待檢培養(yǎng)物，37培養(yǎng)18 h24 h，兩種細菌交界處形成箭頭狀的溶血區(qū)為CAMP試驗陽性。血清學診斷4.6.1 ELISA 試驗用針對ApxIV毒素建立的ELISA鑒別診斷試劑盒，具體試驗方法按試劑盒說明書操作。4.6.2 改良補體結(jié)合試驗操作程序參照 NY/T 537-2002進行。PCR 診斷4.7.

9、1 引物參考 Boss JT等設(shè)計的APP Apx IV 通用檢測引物，上游引物5- TTATCCGAACTTTGGTTTAGCC -3， 下游引物5- CATATTTGATAAAACCATCCGTC-3。擴增目的片段長度為418 bp。4.7.2 模板制備挑取APP單菌落于20 L滅菌生理鹽水中，在旋窩震蕩儀上輕徑混勻后作為PCR反應(yīng)模板。4.7.3 PCR 擴增體系3反應(yīng)總體積為15 L，其中 2Taq master Mix 7.5L，10mol/ L上、下游引物各1 L，DNA模板2.0L，滅菌雙蒸水3.5 L。4.7.4 PCR 反應(yīng)程序95 5 min，95 30 s，55 30 s

10、，72 45s，30個循環(huán)，72 5 min。取6 L PCR 擴增產(chǎn)物， 置于1%瓊脂糖凝膠中80 V電泳25 min檢測。5 防治加強生物安全措施堅持自繁自養(yǎng)、全進全出及“兩點式”或“三點式”飼養(yǎng)方式，如需引進公豬或后備母豬時，應(yīng)進 行血清學檢測，避免引進陽性種豬，做好引種及豬群轉(zhuǎn)出隔離。嚴格控制場內(nèi)外人員出入；車輛應(yīng)專車 專用，徹底消毒；豬舍及環(huán)境應(yīng)定期消毒，每次消毒要全面、徹底、不留死角，保證藥物濃度和藥物作 用時間。加強飼養(yǎng)管理按 GB/T 17824.2執(zhí)行，減少斷奶后混群和轉(zhuǎn)欄的頻率，盡可能做到保育階段的全進全出；注意豬群密度合理、豬舍良好通風；減少人員串欄引起的交叉?zhèn)鞑?。免疫預(yù)防疫苗接種是生產(chǎn)中控制豬傳染性胸膜肺炎的有效手段。根據(jù)本地區(qū)流行菌株的血清型，選擇多價滅 活疫苗進行免疫。藥物防治5.4.1 對于發(fā)病的豬場，最好分離致病菌，通過藥敏試驗篩選敏感藥物，有針對性進行防治。5.4.2 在治療過程中所有藥物的使用應(yīng)符合 NY 5030-2006、NY 5031-2001、中華人民共和國獸藥典、獸藥質(zhì)量標準的規(guī)定。4附錄A（附錄應(yīng)在正文中提及）（規(guī)范性） 培養(yǎng)基配置A.1