儀器(紫外分光光度儀)

1、4.2 4.2 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理 光的波長(cm)、頻率 (Hz) ，它們與光速c的關(guān)系是：4.2.2 光的基本性質(zhì)光的基本性質(zhì)cEhhc 在真空介質(zhì)中，光速為2.99791010cm/s。單個光子的能量E與上述三要素的關(guān)系是： E光子的能量，J；h普朗克常數(shù)（6.6251034Js）能復(fù)合成白光的兩種顏色的光叫能復(fù)合成白光的兩種顏色的光叫互互補色光。補色光。物質(zhì)所顯示的物質(zhì)所顯示的顏色是吸顏色是吸收光的互補色。收光的互補色。01lntIk bI02lgtIk bI上式稱為朗伯定律。如用A=lg(I0/It)或lg(1/T),則021lglgtIAk bITA稱為吸光度

2、。 通常稱比耳定律。04lgtIAk cIT1/3T2 這說明濃度與01lglgtIAkcbIT即通常所稱的 Ac11111222221 21212121 2121212AAAccAAAccA 原理雙光束光度計動畫示意 單波長單光束分光光度計有國產(chǎn)751型、XG-125型、英國SP500型和伯克曼DU-8型等。 單波長雙光束分光光度計有國產(chǎn)710型、730型、740型、日立UV-340型等就屬于這種類型。 雙波長分光光度計的優(yōu)點：是可以在有背景干憂或共存組分吸收干憂的情況下對某組分進行定量測定。 國產(chǎn)WFZ800-5型、島津UV-260型、UV-265型等。 分子和原子一樣，也有它的特征分子能

3、分子和原子一樣，也有它的特征分子能級級 。分子內(nèi)部的運動可分為價電子運動，分子。分子內(nèi)部的運動可分為價電子運動，分子內(nèi)原子在平衡位置附近的振動和分子繞其重心內(nèi)原子在平衡位置附近的振動和分子繞其重心的轉(zhuǎn)動。因此分子具有電子能級、振動能級和的轉(zhuǎn)動。因此分子具有電子能級、振動能級和轉(zhuǎn)動能級。轉(zhuǎn)動能級。 分子的能量分子的能量 E 等于下列三項之和：等于下列三項之和： E=Ee+Ev+Er 分子從外界吸收能量后，就能引起分子分子從外界吸收能量后，就能引起分子能級的躍遷，即從基態(tài)能級躍遷到激發(fā)態(tài)能級。能級的躍遷，即從基態(tài)能級躍遷到激發(fā)態(tài)能級。分子吸收能量具有量子化的特征，即分子只能分子吸收能量具有量子化的

4、特征，即分子只能吸收等于兩個能級之差的能量：吸收等于兩個能級之差的能量： E=EE=E2 2-E-E1 1=h=h =hc=hc/ 電子能級轉(zhuǎn)動能級振動能級 有機化合物的紫外有機化合物的紫外可見吸收光可見吸收光譜，是其分子中外層價電子躍遷的結(jié)果譜，是其分子中外層價電子躍遷的結(jié)果（三種）（三種）電子、電子、電子、電子、n電子。電子。 外層電子吸收紫外或可見輻射后，外層電子吸收紫外或可見輻射后，就從基態(tài)向激發(fā)態(tài)就從基態(tài)向激發(fā)態(tài)(反鍵軌道反鍵軌道)躍遷。主躍遷。主要有四種躍遷所需能量要有四種躍遷所需能量大小順序為大小順序為n n 200nm的光的光)，但當(dāng)它們與生色團相連，但當(dāng)它們與生色團相連時，就會發(fā)生時，就會發(fā)生n共軛作用，增強生色團的生色共軛作用，增強生色團的生色能力能力(吸收波長向長波方向移動，且吸收強度增加吸收波長向長波方向移動，且吸收強度增加)，這樣的基團稱為助色團。這樣的基團稱為助色團。有機化合物的吸收譜帶常有機化合物的吸收譜帶常常因引入取代基或改變?nèi)艹Ｒ蛞肴〈蚋淖內(nèi)軇┦棺畲笪詹ㄩL劑使最大吸收波長max和吸收強度發(fā)生變化和吸收強度發(fā)生變化: max向長波方向移動向長波方向移動稱為稱為紅移紅移，向短波方向移，向短波方向移動稱為動稱為藍移藍移 (或紫移或紫移)。吸。吸收強度即摩爾吸光系數(shù)收強度即摩爾