第10章_高效液相色譜分離檢測(cè)技術(shù)

1、4.4 4.4 高效液相色譜分離方式高效液相色譜分離方式 HPLC 分離方式分離方式 液譜分離系統(tǒng)液譜分離系統(tǒng) 液固吸附色譜液固吸附色譜 分配色譜分配色譜 離子交換和離子色譜離子交換和離子色譜 離子對(duì)色譜離子對(duì)色譜 體積排阻色譜法體積排阻色譜法 親合色譜法親合色譜法 1 1、固定相（柱填料）、固定相（柱填料） 常用填料基質(zhì)可分為硅膠、氧化物和聚合物。常用填料基質(zhì)可分為硅膠、氧化物和聚合物。 硅膠是硅膠是HPLC HPLC 填料中最常用的基質(zhì)。它具有良好的機(jī)械強(qiáng)度、容易控制的孔結(jié)構(gòu)和比表面積、較好填料中最常用的基質(zhì)。它具有良好的機(jī)械強(qiáng)度、容易控制的孔結(jié)構(gòu)和比表面積、較好 的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性以

2、及專(zhuān)一的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性以及專(zhuān)一 的表面化學(xué)反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)外，還有一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是其表面含有豐的表面化學(xué)反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)外，還有一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是其表面含有豐 富的硅羥基，這是硅膠可以進(jìn)行表面鍵合或改性的基礎(chǔ)。富的硅羥基，這是硅膠可以進(jìn)行表面鍵合或改性的基礎(chǔ)。 缺點(diǎn)：在堿性水溶性流動(dòng)相中不穩(wěn)定。缺點(diǎn)：在堿性水溶性流動(dòng)相中不穩(wěn)定。 4.4.1 液譜分離系統(tǒng)液譜分離系統(tǒng) 目前市場(chǎng)主要可供選擇的硅膠填料粒徑目前市場(chǎng)主要可供選擇的硅膠填料粒徑 1.7m，1.8m，2.2m 快速液相色譜柱：匹配快速色譜儀快速液相色譜柱：匹配快速色譜儀 2.7m 多孔殼層：在常規(guī)液相色譜儀上實(shí)現(xiàn)快速分離多孔殼層：在常規(guī)液相色

3、譜儀上實(shí)現(xiàn)快速分離(Halo) 3.0m，3.5m 普通快速分析普通快速分析 5.0m 常規(guī)分析常規(guī)分析 顆粒越小，柱效越高，但是耐污染性能下降，柱壓升高。顆粒越小，柱效越高，但是耐污染性能下降，柱壓升高。 1. 1. 液液- -液分配及離子對(duì)分離固定相液分配及離子對(duì)分離固定相 （1）全多孔型擔(dān)體）全多孔型擔(dān)體 氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用 100m的大顆粒，表面涂漬固定液，性能不佳已不多見(jiàn)。 現(xiàn)采用10m以下的小顆粒，化學(xué)鍵合制備柱填料。 （2 2）表面多孔型擔(dān)體）表面多孔型擔(dān)體 （薄殼型微珠擔(dān)體） 3040m的玻璃微球，表面附著 一層厚度為1 2m的多孔硅膠。 表面積小

4、，柱容量底。 4.4.1 液譜分離系統(tǒng)液譜分離系統(tǒng) HPLC 固定相狀態(tài)分固定相狀態(tài)分 液液-固色譜法（固色譜法（LSC） 液液-液色譜法（液色譜法（LLC） 分離機(jī)制分分離機(jī)制分 吸附色譜法吸附色譜法 分配色譜法分配色譜法 離子交換色譜法離子交換色譜法 分子排阻色譜法分子排阻色譜法 化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相色譜法 親合色譜法親合色譜法 離子色譜法離子色譜法 一、化學(xué)鍵合相色譜法一、化學(xué)鍵合相色譜法 化學(xué)鍵合相（化學(xué)鍵合相（chemically bonded phase）將固定液（含不將固定液（含不 同官能團(tuán)的有機(jī)分子）利用化學(xué)反應(yīng)鍵合到同官能團(tuán)的有機(jī)分子）利用化學(xué)反應(yīng)鍵合到載體載體表面上，

5、使表面上，使 其形成均一、牢固的單分子薄層而構(gòu)成的固定相其形成均一、牢固的單分子薄層而構(gòu)成的固定相 1鍵合相類(lèi)型鍵合相類(lèi)型 載體載體-硅膠硅膠 類(lèi)型類(lèi)型 非極性固定相非極性固定相 (ODS） 極性鍵合相極性鍵合相 （鍵合鍵合-NH2、-CN、醇基等極性基團(tuán)）、醇基等極性基團(tuán)） 離子型鍵合相離子型鍵合相 （鍵合可交換陰或陽(yáng)離子基團(tuán)鍵合可交換陰或陽(yáng)離子基團(tuán) ) ClSi R1 R2 C18H37 -HCl OH +Si OSi R1 R2 C18H37Si 鍵合反應(yīng)鍵合反應(yīng)-硅烷化反應(yīng)、硅酸酯化反應(yīng)硅烷化反應(yīng)、硅酸酯化反應(yīng) 2分離原理分離原理 （1）正相鍵合相色譜法）正相鍵合相色譜法 特征特征-固

6、定相極性流動(dòng)相極性固定相極性流動(dòng)相極性 分離機(jī)制分離機(jī)制 -類(lèi)似液類(lèi)似液-液分配色譜的分離原理液分配色譜的分離原理 應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍-適于分離溶于有機(jī)溶劑的適于分離溶于有機(jī)溶劑的 極性至中等極性的分子型化合物極性至中等極性的分子型化合物(如脂如脂 溶性維生素、脂、芳香醇、芳香胺等）溶性維生素、脂、芳香醇、芳香胺等） （2）反相鍵合相色譜法）反相鍵合相色譜法 特征特征-固定相極性流動(dòng)相極性固定相極性流動(dòng)相極性 分離機(jī)制分離機(jī)制 -“疏溶劑作用疏溶劑作用”理論理論 應(yīng)用范圍應(yīng)用范圍-適用于分離非極性至適用于分離非極性至 中等極性的分子型化合物中等極性的分子型化合物 流動(dòng)相流動(dòng)相-有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑

7、流動(dòng)相流動(dòng)相-水水+有機(jī)調(diào)節(jié)劑有機(jī)調(diào)節(jié)劑 疏溶劑作用理論疏溶劑作用理論 利用非極性溶質(zhì)分子或利用非極性溶質(zhì)分子或 溶質(zhì)分子中非極性基團(tuán)和極溶質(zhì)分子中非極性基團(tuán)和極 性溶劑接觸時(shí)產(chǎn)生排斥力，性溶劑接觸時(shí)產(chǎn)生排斥力， 而從溶劑中被而從溶劑中被“擠出擠出”，即，即 產(chǎn)生疏溶劑作用，促使溶質(zhì)產(chǎn)生疏溶劑作用，促使溶質(zhì) 分子與鍵合相表面的非極性分子與鍵合相表面的非極性 的烷基發(fā)生疏水締合，而使的烷基發(fā)生疏水締合，而使 溶質(zhì)分子保留在固定相中溶質(zhì)分子保留在固定相中 . 想一想想一想 影響溶質(zhì)保留（時(shí)間長(zhǎng)短）的因素有哪些影響溶質(zhì)保留（時(shí)間長(zhǎng)短）的因素有哪些? （1）溶質(zhì)分子中非極性部分的總表面積）溶質(zhì)分子中非

8、極性部分的總表面積 溶質(zhì)和固定相接觸的總表面積愈大，保留值愈大，所以溶質(zhì)的極性愈溶質(zhì)和固定相接觸的總表面積愈大，保留值愈大，所以溶質(zhì)的極性愈 弱，疏水性越強(qiáng)，保留值越大。弱，疏水性越強(qiáng)，保留值越大。 （2）鍵合相上的烷基總面積）鍵合相上的烷基總面積 烷基鍵合固定相的作用在于提供非極性的作用表面。隨著碳鏈的加長(zhǎng)，烷基鍵合固定相的作用在于提供非極性的作用表面。隨著碳鏈的加長(zhǎng)， 烷基的疏水特性增強(qiáng)，溶質(zhì)的保留值也隨烷基烷基的疏水特性增強(qiáng)，溶質(zhì)的保留值也隨烷基碳鏈長(zhǎng)度的增加而增大碳鏈長(zhǎng)度的增加而增大。 影響溶質(zhì)保留（時(shí)間長(zhǎng)短）的四大主要因素影響溶質(zhì)保留（時(shí)間長(zhǎng)短）的四大主要因素 時(shí)間，時(shí)間，min 固

9、定相：固定相：C1固定相：固定相：C8固定相：固定相：C18 1-尿嘧啶；尿嘧啶；2-苯酚；苯酚；3-乙酰苯；乙酰苯；4-硝基苯；硝基苯；5-苯甲酸甲酯；苯甲酸甲酯；6-甲苯甲苯 （3）流動(dòng)相的表面張力）流動(dòng)相的表面張力 流動(dòng)相的表面張力愈大，介電常數(shù)愈大，極性亦愈強(qiáng)；流動(dòng)相的表面張力愈大，介電常數(shù)愈大，極性亦愈強(qiáng)； 溶質(zhì)和烷基鍵合相的締合作用愈強(qiáng)，流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度弱，溶質(zhì)和烷基鍵合相的締合作用愈強(qiáng)，流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度弱， 導(dǎo)致溶質(zhì)的保留值大。導(dǎo)致溶質(zhì)的保留值大。 （4）流動(dòng)相的酸堿性和鹽濃度流動(dòng)相的酸堿性和鹽濃度 酸性抑制弱酸解離，增加保留時(shí)間；堿性抑制弱堿解離，增酸性抑制弱酸解離，增加保留時(shí)

10、間；堿性抑制弱堿解離，增 加保留時(shí)間；鹽濃度增加加保留時(shí)間；鹽濃度增加不利于不利于離子化溶質(zhì)保留。離子化溶質(zhì)保留。 二、離子色譜法二、離子色譜法 1.離子色譜法離子色譜法（IC） 離子交換色譜與電導(dǎo)檢測(cè)器相結(jié)合分析各種離子的方法離子交換色譜與電導(dǎo)檢測(cè)器相結(jié)合分析各種離子的方法 2分離原理分離原理抑制型（雙柱型抑制型（雙柱型) 分離柱分離柱 交換反應(yīng)：交換反應(yīng)：R+-OH- + NaX R+-X-+ NaOH 洗脫反應(yīng)：洗脫反應(yīng)：R+-X- + NaOH R+-OH-+ NaX 抑制柱抑制柱 與組分反應(yīng)：與組分反應(yīng)：RH+ + NaX R-Na+ + HX 與洗脫劑反應(yīng)：與洗脫劑反應(yīng)：R-H+

11、+ NaOH R-Na+ + H2O 在無(wú)抑制柱的離子交換色譜中，進(jìn)入檢測(cè)器的是高電導(dǎo)的洗脫劑在無(wú)抑制柱的離子交換色譜中，進(jìn)入檢測(cè)器的是高電導(dǎo)的洗脫劑 NaOH及被洗脫的組分及被洗脫的組分NaX，后者所產(chǎn)生的電導(dǎo)的微小變化被洗脫劑的高，后者所產(chǎn)生的電導(dǎo)的微小變化被洗脫劑的高 本底所淹沒(méi)，難于檢測(cè)。而加了抑制柱后，進(jìn)入檢測(cè)器的本底是電導(dǎo)率很本底所淹沒(méi)，難于檢測(cè)。而加了抑制柱后，進(jìn)入檢測(cè)器的本底是電導(dǎo)率很 低的水，因此很容易檢測(cè)出具有較大電導(dǎo)率的低的水，因此很容易檢測(cè)出具有較大電導(dǎo)率的HX。 2固定相與流動(dòng)相固定相與流動(dòng)相 （1）固定相）固定相 基質(zhì)基質(zhì) -合成樹(shù)脂（聚苯乙烯）、纖維素和硅膠合成樹(shù)

12、脂（聚苯乙烯）、纖維素和硅膠 離子交換劑離子交換劑 -鍵合的離子交換基團(tuán)鍵合的離子交換基團(tuán) 類(lèi)型符號(hào)官能團(tuán) 強(qiáng)陽(yáng)離子交換劑SCXSO3H 弱陽(yáng)離子交換劑WCXCOOH 強(qiáng)陰離子交換劑SAXN+R3 弱陰離子交換劑WAXNH2 （2）流動(dòng)相）流動(dòng)相-水緩沖溶液水緩沖溶液 選擇規(guī)則選擇規(guī)則 (1)(1)增加流動(dòng)相中鹽的濃度，可以降低待測(cè)離子的競(jìng)爭(zhēng)親和力，增加流動(dòng)相中鹽的濃度，可以降低待測(cè)離子的競(jìng)爭(zhēng)親和力， 使其在固定相上的保留時(shí)間減少，先出色譜柱使其在固定相上的保留時(shí)間減少，先出色譜柱;反之，則保留反之，則保留 時(shí)間增大，后出色譜柱時(shí)間增大，后出色譜柱 . （2）pH增大，酸的離解度增大而值增大，

13、保留時(shí)間增加，后增大，酸的離解度增大而值增大，保留時(shí)間增加，后 出柱；但有機(jī)堿的離解度降低而分配比減小，保留時(shí)間減小，出柱；但有機(jī)堿的離解度降低而分配比減小，保留時(shí)間減小， 先出柱。先出柱。 (3)(3)緩沖溶液中緩沖劑濃度增大緩沖溶液中緩沖劑濃度增大 ;保留時(shí)間會(huì)減小。保留時(shí)間會(huì)減小。 三、反相離子對(duì)色譜法三、反相離子對(duì)色譜法 1分離機(jī)制分離機(jī)制 在反相色譜法中，將一種或多種與被測(cè)離子電荷相反的離子（稱為對(duì)離在反相色譜法中，將一種或多種與被測(cè)離子電荷相反的離子（稱為對(duì)離 子或反離子）加到極性流動(dòng)相中，使其與被測(cè)離子結(jié)合，形成疏水性（中性子或反離子）加到極性流動(dòng)相中，使其與被測(cè)離子結(jié)合，形成疏

14、水性（中性 或弱極性）的離子對(duì)締合物或弱極性）的離子對(duì)締合物 ,而被非極性固定相（有機(jī)相）萃取，進(jìn)入固定相而被非極性固定相（有機(jī)相）萃取，進(jìn)入固定相 被保留被保留 .因待測(cè)組分離子的性質(zhì)不同、反離子形成離子對(duì)的能力不同和形成離因待測(cè)組分離子的性質(zhì)不同、反離子形成離子對(duì)的能力不同和形成離 子對(duì)疏水性的不同，導(dǎo)致各組分離子在固定相中滯留時(shí)間的不同，因而出色子對(duì)疏水性的不同，導(dǎo)致各組分離子在固定相中滯留時(shí)間的不同，因而出色 譜柱先后不同，實(shí)現(xiàn)分離譜柱先后不同，實(shí)現(xiàn)分離. 生成離子對(duì)反應(yīng)生成離子對(duì)反應(yīng) A-(水 相 ）+ B+(水 相 ）A-B+(有 機(jī) 相 ） 反離子反離子被測(cè)離子被測(cè)離子 2常用常

15、用 離子對(duì)離子對(duì) 試劑試劑 陽(yáng)離子陽(yáng)離子 烷基磺酸或鹽類(lèi)烷基磺酸或鹽類(lèi) ( (十二烷基磺酸鈉十二烷基磺酸鈉 ） 分析有機(jī)堿類(lèi)和有機(jī)陽(yáng)離子分析有機(jī)堿類(lèi)和有機(jī)陽(yáng)離子 陰離子陰離子 季銨鹽類(lèi)季銨鹽類(lèi) (四丁基季銨鹽、十六烷基三甲基季銨鹽四丁基季銨鹽、十六烷基三甲基季銨鹽 ) 分析有機(jī)酸和有機(jī)陰離子分析有機(jī)酸和有機(jī)陰離子 3固定相與流動(dòng)相固定相與流動(dòng)相 (1(1）固定相）固定相 -ODS等非極性固定相等非極性固定相 (2(2）流動(dòng)相）流動(dòng)相 -甲醇甲醇-水或乙腈水或乙腈-水體系中加入適量離子對(duì)試水體系中加入適量離子對(duì)試 劑，并用緩沖液調(diào)至合適的劑，并用緩沖液調(diào)至合適的pH。分離有機(jī)堿的分離有機(jī)堿的pH

16、值一般為值一般為 33.5；分離有機(jī)酸的；分離有機(jī)酸的pH值一般在值一般在7.5左右。左右。 第第2節(jié)節(jié) 高效液相色譜儀高效液相色譜儀 高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)及流程高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)及流程 一、輸液系統(tǒng)一、輸液系統(tǒng) 單柱塞往復(fù)泵結(jié)構(gòu)示意圖單柱塞往復(fù)泵結(jié)構(gòu)示意圖 1高壓輸液泵高壓輸液泵 單柱塞往復(fù)泵單柱塞往復(fù)泵 雙柱塞往復(fù)泵雙柱塞往復(fù)泵(串或并聯(lián)串或并聯(lián)） 恒壓泵恒壓泵(淘汰淘汰) 恒流泵恒流泵 2梯度洗脫裝置梯度洗脫裝置 內(nèi)梯度內(nèi)梯度-高壓泵將溶劑按程序壓入混合室，高壓泵將溶劑按程序壓入混合室， 混合后再注入色譜柱混合后再注入色譜柱 外梯度外梯度-多元溶劑通過(guò)比例閥再由泵注入色譜柱多元溶劑通過(guò)比例

17、閥再由泵注入色譜柱 二元二元內(nèi)梯度洗脫內(nèi)梯度洗脫裝置示意圖裝置示意圖 四元四元外梯度洗脫外梯度洗脫裝置雙泵裝置雙泵(串聯(lián)串聯(lián))工作原理示意圖工作原理示意圖 3洗脫方式洗脫方式 等度洗脫等度洗脫 梯度洗脫梯度洗脫 想一想想一想 分別在何種情況下選擇等度或梯度洗脫分別在何種情況下選擇等度或梯度洗脫? 二、進(jìn)樣系統(tǒng)二、進(jìn)樣系統(tǒng) 1六通閥進(jìn)樣器六通閥進(jìn)樣器 2自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器 三、分離系統(tǒng)三、分離系統(tǒng) 1色譜柱類(lèi)型色譜柱類(lèi)型 常量柱內(nèi)徑24.6mm，柱長(zhǎng)1025cm 半微量柱：內(nèi)徑11.5mm，柱長(zhǎng)1020cm 毛細(xì)管柱：內(nèi)徑0.51mm，柱長(zhǎng)3075mm 分析型柱 制備型柱制備型柱 內(nèi)徑內(nèi)徑20

18、40mm，柱長(zhǎng)，柱長(zhǎng)1030cm 分析型分析型 制備型制備型 2填充劑填充劑-最最常用填充劑為化學(xué)鍵合硅膠常用填充劑為化學(xué)鍵合硅膠 四、檢測(cè)系統(tǒng)四、檢測(cè)系統(tǒng) 1.紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器 可變波長(zhǎng)檢測(cè)器可變波長(zhǎng)檢測(cè)器 光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器 光電二極管陣列檢測(cè)器結(jié)構(gòu)與光路示意圖光電二極管陣列檢測(cè)器結(jié)構(gòu)與光路示意圖 三維色譜圖三維色譜圖 2電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器 介電型介電型 -測(cè)量?jī)呻姌O之間電容介質(zhì)的介電測(cè)量?jī)呻姌O之間電容介質(zhì)的介電 常數(shù)變化測(cè)得組分濃度常數(shù)變化測(cè)得組分濃度 電導(dǎo)型電導(dǎo)型 -測(cè)電導(dǎo)率變化來(lái)測(cè)量電離物質(zhì)含量測(cè)電導(dǎo)率變化來(lái)測(cè)量電離物質(zhì)含量 電位型電位型 -測(cè)定電流為

19、零時(shí)電極間的電位差值測(cè)定電流為零時(shí)電極間的電位差值 安培型安培型 -測(cè)定電極間的電流變化而測(cè)定樣品測(cè)定電極間的電流變化而測(cè)定樣品 濃度濃度 典型電化學(xué)檢測(cè)器示意圖典型電化學(xué)檢測(cè)器示意圖 3蒸發(fā)光散射檢測(cè)蒸發(fā)光散射檢測(cè) ELSD是基于是基于 光線通過(guò)微小光線通過(guò)微小 粒子時(shí)會(huì)產(chǎn)生粒子時(shí)會(huì)產(chǎn)生 光散射的現(xiàn)象光散射的現(xiàn)象 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器工作原理示意圖蒸發(fā)光散射檢測(cè)器工作原理示意圖 五、數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng)（五、數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng)（類(lèi)似于類(lèi)似于GC)GC) 第第3節(jié)節(jié) 定性與定量分析技術(shù)定性與定量分析技術(shù) 一、定性分析技術(shù)一、定性分析技術(shù) 1色譜鑒定法色譜鑒定法 2兩譜聯(lián)用鑒定法兩譜聯(lián)用鑒定法 LC-

20、UV LC-MS 二、定量測(cè)定分析二、定量測(cè)定分析(外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法）外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法） 1.加校正因子的主成分自身對(duì)照法加校正因子的主成分自身對(duì)照法 (1)校正因子測(cè)定與計(jì)算校正因子測(cè)定與計(jì)算 主主 雜雜 cA cA f / / (2(2）測(cè)定）測(cè)定 測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，按供試品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，按供試品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì) 限度，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)娜芤鹤鳛閷?duì)限度，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)娜芤鹤鳛閷?duì) 照液，進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度（以噪音水平可接受為限）照液，進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度（以噪音水平可接受為限） 或進(jìn)樣量（以柱子不過(guò)載為限），使對(duì)照溶液的主成分色或

21、進(jìn)樣量（以柱子不過(guò)載為限），使對(duì)照溶液的主成分色 譜峰的峰高約達(dá)滿量程的譜峰的峰高約達(dá)滿量程的10%25%或其峰面積能準(zhǔn)確積或其峰面積能準(zhǔn)確積 分。取供試品溶液和對(duì)照品溶液適量，分別進(jìn)樣。除有特分。取供試品溶液和對(duì)照品溶液適量，分別進(jìn)樣。除有特 殊規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間應(yīng)記錄到主成分色譜峰殊規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間應(yīng)記錄到主成分色譜峰 保留時(shí)間的保留時(shí)間的2倍，測(cè)量供試品溶液色譜釁上各雜質(zhì)的峰面倍，測(cè)量供試品溶液色譜釁上各雜質(zhì)的峰面 積，分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對(duì)照溶液主成分的峰面積，分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對(duì)照溶液主成分的峰面 積比較，依法計(jì)算各雜質(zhì)含量。積比較，依法計(jì)算各雜質(zhì)

22、含量。 2不加校正因子的主成分自身對(duì)照法不加校正因子的主成分自身對(duì)照法 按上述（按上述（1）法配制對(duì)照溶液并調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度后，）法配制對(duì)照溶液并調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度后， 取供試品溶液和對(duì)照溶液適量，分別進(jìn)樣。除供試品質(zhì)量取供試品溶液和對(duì)照溶液適量，分別進(jìn)樣。除供試品質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下有特別規(guī)定外，供試品溶液色譜圖記錄的時(shí)間應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下有特別規(guī)定外，供試品溶液色譜圖記錄的時(shí)間應(yīng) 為主成分色譜峰保留時(shí)間的為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍，測(cè)量供試品溶液色譜圖中倍，測(cè)量供試品溶液色譜圖中 各雜質(zhì)的峰面積并與對(duì)照溶液的主成分的峰面積比較，計(jì)各雜質(zhì)的峰面積并與對(duì)照溶液的主成分的峰面積比較，計(jì) 算雜質(zhì)的含量。算雜質(zhì)的含量

23、。 第第4節(jié)節(jié) 高效毛細(xì)管電泳簡(jiǎn)介高效毛細(xì)管電泳簡(jiǎn)介 一、毛細(xì)管電泳分離原理簡(jiǎn)介一、毛細(xì)管電泳分離原理簡(jiǎn)介 1.電泳流電泳流 (電泳電泳) -在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子在電場(chǎng)作用在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子在電場(chǎng)作用 下，以不同速度向其所帶電荷相反方向遷移下，以不同速度向其所帶電荷相反方向遷移 2.電滲流電滲流 （電滲電滲) ) -在一般性況下（在一般性況下（pH3）石英毛）石英毛 細(xì)管柱內(nèi)表面帶負(fù)電，和溶液接觸時(shí)形成雙電層細(xì)管柱內(nèi)表面帶負(fù)電，和溶液接觸時(shí)形成雙電層;在高在高 壓電場(chǎng)作用下，雙電層中的水合陽(yáng)離子整體朝負(fù)極方壓電場(chǎng)作用下，雙電層中的水合陽(yáng)離子整體朝負(fù)極方 向移動(dòng)向移動(dòng) 3.粒子遷移速度

24、粒子遷移速度 電滲流的速度電滲流的速度= 57倍電泳流速度倍電泳流速度 陽(yáng)離子遷移速度陽(yáng)離子遷移速度電滲速度電滲速度電泳速度電泳速度 陰離子遷移速度陰離子遷移速度電滲速度電滲速度電泳速度電泳速度 中性粒子遷移速度中性粒子遷移速度電滲速度電滲速度 4.分離原理分離原理 在一定電場(chǎng)作用下在一定電場(chǎng)作用下,在毛細(xì)管中的各種不同的粒子在毛細(xì)管中的各種不同的粒子 電泳速度和電滲速度也各不相同，電滲流可以帶動(dòng)陽(yáng)離電泳速度和電滲速度也各不相同，電滲流可以帶動(dòng)陽(yáng)離 子、陰離子和中性物質(zhì)以不同的速度從陰極端流出而實(shí)子、陰離子和中性物質(zhì)以不同的速度從陰極端流出而實(shí) 現(xiàn)分離?，F(xiàn)分離。 二、毛細(xì)管電泳儀的基本裝置二、

25、毛細(xì)管電泳儀的基本裝置 毛細(xì)管柱、柱恒溫毛細(xì)管柱、柱恒溫 系統(tǒng)、電解液槽、系統(tǒng)、電解液槽、 進(jìn)樣器、高壓電源、進(jìn)樣器、高壓電源、 檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理 器器 毛細(xì)管電泳裝置示意圖毛細(xì)管電泳裝置示意圖 1毛細(xì)管柱及溫度控制毛細(xì)管柱及溫度控制 （1）毛細(xì)管柱）毛細(xì)管柱 空心柱空心柱 -區(qū)帶電泳、膠束電泳及環(huán)糊精電泳區(qū)帶電泳、膠束電泳及環(huán)糊精電泳 填充毛細(xì)管柱填充毛細(xì)管柱 -電色譜電色譜 壁處理柱壁處理柱 -蛋白質(zhì)電泳蛋白質(zhì)電泳 （2）毛細(xì)管恒溫裝置）毛細(xì)管恒溫裝置 作用作用-消除電泳產(chǎn)生的焦耳熱消除電泳產(chǎn)生的焦耳熱 精度精度-0.1 恒溫方式恒溫方式 高速氣流恒溫高速氣流恒溫 液體恒溫

26、液體恒溫 2高壓電源高壓電源 直流電源直流電源 電壓電壓:030kV 穩(wěn)定性穩(wěn)定性:0.1% 電流強(qiáng)度電流強(qiáng)度:200300mA 電源極性切換裝置電源極性切換裝置 (雙極性電源雙極性電源) 3毛細(xì)管電泳進(jìn)樣方法毛細(xì)管電泳進(jìn)樣方法 流體進(jìn)樣流體進(jìn)樣 進(jìn)樣端加壓進(jìn)樣進(jìn)樣端加壓進(jìn)樣 出口端真空進(jìn)樣出口端真空進(jìn)樣 高差進(jìn)樣高差進(jìn)樣 電動(dòng)進(jìn)樣電動(dòng)進(jìn)樣 （瞬間高壓脈沖進(jìn)樣（瞬間高壓脈沖進(jìn)樣) 4電極和溶液控制系統(tǒng)電極和溶液控制系統(tǒng) (1(1）電極電極-置于兩側(cè)的電泳池中鉑絲電極置于兩側(cè)的電泳池中鉑絲電極 (2(2）溶液控制系統(tǒng)溶液控制系統(tǒng) 自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器 分部收集器分部收集器 更換緩沖液裝置更換緩沖液裝置 緩沖液的水平系統(tǒng)緩沖液的水平系統(tǒng) 5檢測(cè)器檢測(cè)器 紫外紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器可見(jiàn)光檢測(cè)器 二極管陣列檢測(cè)器二極管陣列檢測(cè)器 熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器 質(zhì)譜檢測(cè)器質(zhì)譜檢測(cè)器 電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器 激光類(lèi)檢測(cè)器激光類(lèi)檢測(cè)器 三、毛細(xì)管電泳法的模式及應(yīng)用三、