免疫學(xué)技術(shù)第九講

1、免疫學(xué)技術(shù)第九講免疫學(xué)技術(shù)第九講 pptppt課件課件(9)(9)2、分類(lèi)：直接凝集反響、間接凝集反響、反向間接凝集反響、協(xié)同凝集反響等。3、用途：如血型鑒定、牛布病檢測(cè)、雞白痢診斷等。2、分類(lèi)：?jiǎn)蜗颦傊瑪U(kuò)散、雙向瓊脂擴(kuò)散、對(duì)流免疫電泳、火箭電泳等。3、用途：如炭疽、小鵝瘟診斷等。AscoliAgAb對(duì)流免疫電泳對(duì)流免疫電泳2、分類(lèi)：1免疫熒光技術(shù)2免疫酶技術(shù)3放射免疫測(cè)定法4免疫印跡法5 免疫金標(biāo)技術(shù) 6 免疫PCR小鼠脾臟免疫熒光圖像免疫酶技術(shù)免疫酶技術(shù)免疫酶組化免疫酶組化法法免疫酶測(cè)定免疫酶測(cè)定法法酶標(biāo)記抗體法酶標(biāo)記抗體法抗酶抗體法抗酶抗體法液相測(cè)定法液相測(cè)定法固相測(cè)定法固相測(cè)定法間接法

2、間接法雙抗體夾心法雙抗體夾心法競(jìng)爭(zhēng)法競(jìng)爭(zhēng)法免疫酶技術(shù)免疫酶技術(shù)4 4操作過(guò)程：操作過(guò)程：專(zhuān)題二：細(xì)胞免疫技術(shù)專(zhuān)題二：細(xì)胞免疫技術(shù) 1、概述：細(xì)胞免疫檢測(cè)主要包括T細(xì)胞及亞群的計(jì)數(shù)、T細(xì)胞活性測(cè)定、各種淋巴因子的檢測(cè)、K細(xì)胞、NK細(xì)胞活性試驗(yàn)，以及皮膚過(guò)敏試驗(yàn)等。 2、用途： 1測(cè)定疾病個(gè)體的細(xì)胞免疫狀態(tài)及水平； 2篩選免疫增強(qiáng)劑或免疫抑制藥物； 3測(cè)定淋巴因子活性等細(xì)胞免疫技術(shù)細(xì)胞免疫技術(shù) 3、分類(lèi)： E花環(huán)試驗(yàn) 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 白細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn) 白細(xì)胞介素測(cè)定 酸性醋酸萘酯酶測(cè)定主要細(xì)胞免疫技術(shù)主要細(xì)胞免疫技術(shù)28 T細(xì) 胞 的 E玫 瑰 花 環(huán) 試 驗(yàn) 一E玫瑰花環(huán)試驗(yàn) 1、原理：人、

3、豬、牛、羊等的T細(xì)胞膜上的CD2是綿羊紅細(xì)胞受體，馬、豬的T細(xì)胞膜上的CD2是豚鼠紅細(xì)胞的受體。 2、用途：區(qū)分T淋巴細(xì)胞主要細(xì)胞免疫技術(shù)主要細(xì)胞免疫技術(shù) 二淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 1、原理： PHA+T細(xì)胞有PHA受體 轉(zhuǎn)化 大的淋巴母細(xì)胞 顯微鏡觀察計(jì)算轉(zhuǎn)化率 轉(zhuǎn)化率=(過(guò)渡型細(xì)胞+母細(xì)胞)/200個(gè)淋巴細(xì)胞100% 2、用途：淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，監(jiān)測(cè)免疫機(jī)能 3、特點(diǎn)：簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性差形態(tài)學(xué)法形態(tài)學(xué)法30T細(xì) 胞 受 PHA作 用 轉(zhuǎn) 化 后 的 形 態(tài) 示 意 圖3H3H胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷3H-T3H-T摻入法摻入法原理：原理： 試驗(yàn)管試驗(yàn)管 對(duì)照管對(duì)照管 PHA+T PHA+T細(xì)胞細(xì)胞+3H

4、-TdR PHA+T+3H-TdR PHA+T細(xì)胞細(xì)胞 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 淋巴母細(xì)胞淋巴母細(xì)胞 淋巴母細(xì)胞淋巴母細(xì)胞 摻入摻入3H-TdR3H-TdR 無(wú)無(wú)3H-TdR3H-TdR摻入摻入 液體閃爍儀測(cè)摻入液體閃爍儀測(cè)摻入 測(cè)測(cè)CPMCPM 3H-T 3H-T的脈沖數(shù)的脈沖數(shù)CPMCPM 計(jì)算轉(zhuǎn)化刺激指數(shù)計(jì)算轉(zhuǎn)化刺激指數(shù)SI=SI=試驗(yàn)管試驗(yàn)管CPM/CPM/對(duì)照管對(duì)照管CPMCPM特點(diǎn)：準(zhǔn)確，需昂貴的閃爍儀特點(diǎn)：準(zhǔn)確，需昂貴的閃爍儀原理：PHA、ConA+T細(xì)胞受體 轉(zhuǎn)化 分裂、增殖 脫氫酶 甲氮唑鹽MTT 甲簪formazan 酶標(biāo)儀595nm測(cè)OD值特點(diǎn)：敏感、準(zhǔn)確 MTT比色法主要細(xì)胞免疫技術(shù)主要細(xì)胞免疫技術(shù) 三酸性醋酸萘酯酶測(cè)定 1、原理：T淋巴細(xì)胞漿內(nèi)含有的酸性醋酸萘酯酶，在弱酸性條件下，能使底物酸性醋酸萘酯水解成醋酸和萘酚，后者與六偶氮副品紅偶聯(lián)，生成不溶性的紅色沉淀物，沉積在T淋巴細(xì)胞胞漿內(nèi)酯酶所在的部位，經(jīng)甲基綠復(fù)染，反響呈現(xiàn)單一或散在的顆?；虬邏K，顯棕紅色。B淋巴細(xì)胞那么無(wú)此種反響。 2、用途：可作為鑒別T淋巴細(xì)胞的一種非特異性方法。 課堂總結(jié)課堂總