高級(jí)分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題匯總

1、 一、名詞解釋一、名詞解釋 模板鏈模板鏈： DNA 鏈中有一條是根據(jù)堿基互補(bǔ)原則指導(dǎo) mRNA 合成的，又稱反義鏈。 編碼鏈編碼鏈： 雙鏈 DNA 中不進(jìn)行轉(zhuǎn)錄的那一條，與 mRNA 序列相同（在 RNA 中是以 U 取代了 DNA 中的 T） ，又稱有義鏈。 基因組基因組： 一般的定義是單倍體細(xì)胞中的全套染色體為一個(gè)基因組，或是單倍體細(xì)胞中的全部基因?yàn)橐粋€(gè)基因組。 功能基因組功能基因組：表達(dá)一定功能的全部基因所組成的 DNA 序列，包括編碼基因和調(diào)控基因。 DNA 重組技術(shù)：按照人的意愿，在體外對(duì) DNA 分子進(jìn)行重組，再將重組分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，使其在細(xì)胞中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該 DNA 分子

2、的大量拷貝，表達(dá)相關(guān)基因的產(chǎn)物，是進(jìn)行基因功能研究的基本方法。 實(shí)時(shí)定量實(shí)時(shí)定量 PCR:所謂實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)，是指在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR 進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。 基因芯片技術(shù):又稱 DNA 微陣列（DNA microarray） ，是一種最重要的生物芯片。是將無數(shù)預(yù)先設(shè)計(jì)好的寡核苷酸或cDNA 固定于介質(zhì)上，做成一高密度的探針陣列，能與樣品中的同源核酸分子雜交。 點(diǎn)雜交點(diǎn)雜交:將用低濃度的堿性溶液變性的 DNA，或者溶于緩沖溶液的全 RNA 點(diǎn)到尼龍膜上。用特異性探針進(jìn)行雜交。 RNA 干擾技術(shù)：RNA

3、干擾是指在進(jìn)化過程中高度保守的、由雙鏈 RNA 誘發(fā)的、同源 mRNA 高效特異性降解的現(xiàn)象。借此特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達(dá)的技術(shù)就是。 RNA 編輯：泛指轉(zhuǎn)錄后 mRNA 上的修飾和加工，使得它所攜帶的遺傳信息發(fā)生改變的過程。 TaqMan 探針：是一種高度特異的定量 PCR 技術(shù)，其核心是利用 Taq 酶的 35外切核酸酶活性，切斷探針產(chǎn)生熒光信號(hào)，熒光信號(hào)的強(qiáng)弱就代表了模板的數(shù)量。 原位雜交：指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。 變位剪接：又稱選擇性剪接或可變剪接，是生物的一種基本目重要的調(diào)控機(jī)制。 由于在內(nèi)含子或

4、外顯子中也存在隱蔽的剪接位點(diǎn)（cryptic splice site） ，它們具有與剪接位點(diǎn)的共有序列相似的順序，因而可能會(huì)從真核細(xì)胞基因表達(dá)所轉(zhuǎn)錄的一個(gè) mRNA 前體中，通過不同的剪接方式產(chǎn)生不同的 mRNA 變位剪接體。稱變位剪接。 RACE 技術(shù)：即 cDNA 末端快速擴(kuò)增技術(shù)。是基于 PCR 技術(shù)基礎(chǔ)上由已知的一段 cDNA 片段，通過往兩端延伸擴(kuò)增從而獲得完整的 3端和 5端的方法。 不連續(xù)基因不連續(xù)基因：又稱斷裂基因，真核生物特有結(jié)構(gòu)基因。由若干個(gè)編碼區(qū)和非編碼區(qū)互相間隔開但又連續(xù)鑲嵌而成，去除非編碼區(qū)再連接后，可翻譯出由連續(xù)氨基酸組成的完整蛋白質(zhì)，這些基因稱為斷裂基因。 cDN

5、A：在體外以 mRNA 為模板，利用反轉(zhuǎn)錄酶和 DNA 聚合酶合成的雙鏈 DNA。 錯(cuò)配修復(fù)：在含有錯(cuò)配堿基的 DNA 分子中，使正常核苷酸序列恢復(fù)的修復(fù)方式。識(shí)別出正確的鏈，切除掉不正確的部分，然后通過 DNA 聚合酶 III 和 DNA 連接酶的作用，合成正確配對(duì)的雙鏈 DNA。 信號(hào)肽信號(hào)肽：指新合成多肽鏈中用于指導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)移（定位）的 N-末端的氨基酸序列（有時(shí)不一定在 N 端） 。 弱化子弱化子：是指原核生物的操縱子中可以明顯衰減乃至終止轉(zhuǎn)錄作用的一段核苷酸序列，位于操縱子的上游。 核小體核小體：由 DNA 和組蛋白(histone）構(gòu)成，是染色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位。由 4 種組蛋

6、白 H2A、H2B、H3 和 H4，每一種組蛋白各二個(gè)分子，形成一個(gè)組蛋白八聚體，約 200bp 的 DNA 分子盤繞在組蛋白八聚體構(gòu)成的核心結(jié)構(gòu)外面，形成了一個(gè)核小體。 回文序列：雙鏈 DNA 中的一段倒置重復(fù)序列，當(dāng)該序列的雙鏈被打開后，可形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。這段序列被 稱為回文序列。 指導(dǎo) RNA：一種小分子 RNA，約含 6080 個(gè)核苷酸，在 RNA 編輯中起模板作用。其功能是提供核苷酸插入或刪除的信息。由小環(huán) DNA 及大環(huán) DNA 編碼的指導(dǎo) RNA 均帶有編輯區(qū)的序列信息，可介導(dǎo)編輯過程。 分子伴侶：細(xì)胞核內(nèi)能與組蛋白結(jié)合并能介導(dǎo)核小體有序組裝的核質(zhì)素（ nucleoplasmin

7、）稱為分子伴侶。 融合蛋白：一種是通過 DNA 重組技術(shù)得到的兩個(gè)基因重組后的表達(dá)產(chǎn)物。另一種含義就是介導(dǎo)兩個(gè)細(xì)胞質(zhì)膜融合的一組蛋白。 探針：是一小段單鏈 DNA 或者 RNA 片段，用于檢測(cè)與其互補(bǔ)的核酸序列。 RNA 的選擇性剪接：指從一個(gè) mRNA 前體中通過不同的剪接方式（選擇不同的剪接位點(diǎn)組合）產(chǎn)生不同的 mRNA 剪接異構(gòu)體的過程。 PCR 技術(shù)：即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在生物體外擴(kuò)增特定 DNA 片段的分子生物學(xué)技術(shù)。 基因家族：真核細(xì)胞中，許多相關(guān)的基因常按功能成套組合，被稱為基因家族。 C-值：通常指一種生物單倍體基因組 DNA 的總量。 魔斑：當(dāng)細(xì)菌生長(zhǎng)過程中，遇到氨基酸全面缺乏

8、時(shí)，細(xì)菌將會(huì)產(chǎn)生一個(gè)應(yīng)急反應(yīng)，停止許多基因的表達(dá)，當(dāng)然也會(huì)打開一些合成氨基酸的基因。產(chǎn)生這一應(yīng)急反應(yīng)的信號(hào)是鳥苷四磷酸(ppGpp)和鳥苷五磷酸（pppGpp） 。PpGpp 與 pppGpp的作用不只是一個(gè)或幾個(gè)操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級(jí)調(diào)控子或稱為魔斑。 SD 序列：mRNA 中用于結(jié)合原核生物核糖體的序列。 順式作用元件：一般位于結(jié)構(gòu)基因的附近，只能對(duì)同一條 DNA 鏈上的基因表達(dá)起調(diào)控作用，這種作用在遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)上稱為順式作用，這些 DNA 序列叫順式作用元件 反式作用因子：是指能直接或間接地識(shí)別或結(jié)合在各類順式作用元件核心序列上參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)。 增強(qiáng)子：能

9、強(qiáng)化轉(zhuǎn)錄起始的一段 DNA 序列稱為增強(qiáng)子。它是通過啟動(dòng)子來增加轉(zhuǎn)錄的 核酶：核酶是具有催化活性的 RNA 分子，可降解特異的 mRNA 序列。 二、問答題 1、表達(dá)用載體應(yīng)滿足哪些條件？ 答：必須具有復(fù)制原點(diǎn)，能在宿主細(xì)胞中自主復(fù)制。 載體 DNA 上要有合適的多種限制酶的單一切點(diǎn)（且不在原點(diǎn)） 。 有容易被識(shí)別篩選的標(biāo)志（對(duì)抗菌素的抗性、基因產(chǎn)物的顯色反應(yīng)） 。 2、簡(jiǎn)述體外克隆基因的操作？ 答：（1）從復(fù)雜的生物有機(jī)體基因組中，經(jīng)過酶切消化或 PCR 擴(kuò)增等步驟，分離出帶有目的基因的 DNA 片段； （2）在體外，將帶有目的基因的外源 DNA 片段連接到能夠自我復(fù)制的并具有選擇記號(hào)的載體

10、分子上，形成重組 DNA 分子； （3）感受態(tài)細(xì)胞的制備氯化鈣法 （4）轉(zhuǎn)化（transformation） 感受態(tài)細(xì)胞與連接產(chǎn)物輕輕混勻, 冰浴 30 min， 42水浴熱激 6090 s，快速冰浴 2 min 加液體 LB 振蕩培養(yǎng)，使細(xì)胞復(fù)蘇。 （5）篩選（screening） 根據(jù)重組載體的表型【抗藥性（Ampr 、Tetr） 、其他 mark（ a-互補(bǔ)篩選） 】 根據(jù) DNA 限制酶的酶譜分析 PCR 反應(yīng) 3、簡(jiǎn)述遺傳密碼是如何破譯的？ 答：（1）以多聚單核苷酸為模板指導(dǎo)多肽的合成 用 polyU 作為模板新和成的多肽鏈?zhǔn)嵌嗑郾奖彼幔瑥亩J(rèn)定 UUU 代表苯丙氨酸；以 poly

11、C和 polyA 為模板得到多聚脯氨酸和多聚賴氨酸。 （2）以多聚二核苷酸為模板指導(dǎo)多肽的合成 以只含 A、C 的多聚核苷酸作模板，任意隨機(jī)排列時(shí)，可出現(xiàn) 8 種三聯(lián)子即CCC、CCA、CAC、ACC、CAA、ACA、AAC、AAA，獲得由Asn、His、Pro、Gln、Thr、Lys 等 6 種氨基酸組成的多肽。 （3）以多聚三核苷酸為模板指導(dǎo)多肽的合成 如以多聚（UUC）為模板，可能有 3 種起讀方式： 5UUC UUC UUC UUC UUC3或5UCU UCU UCU UCU UCU3或 5 CUU CUU CUU CUU CUU3，分別產(chǎn)生UUC（Phe） 、UCU（Ser）或 CU

12、U（Leu） 多聚三核苷酸為模板時(shí)也可能只合成 2 種多肽： 5GUA GUA GUA GUA GUA3或5UAG UAG UAG UAG UAG3或 5AGU AGU AGU AGU AGU3 由第二種讀碼方式產(chǎn)生的密碼子 UAG 是終止密碼，不編碼任何氨基酸。 因此，只產(chǎn)生 GUA（Val）或 AGU（Ser） 。 4、舉例說明一個(gè)基因編碼兩條或兩條以上多肽鏈的現(xiàn)象。 答：大腸桿菌等原核細(xì)胞的 mRNA 是多順反子，一個(gè) mRNA 上可以同時(shí)有多個(gè)核糖體同時(shí)翻譯，每個(gè)核糖體可以翻譯出一個(gè)多肽，所以一個(gè) mRNA 分子可以翻譯出好幾個(gè)多肽，而 mRNA是基因轉(zhuǎn)錄過來的，所以說一個(gè)基因編碼兩條

13、或兩條以上多肽鏈。 5、舉例說明磷酸化對(duì)真核生物基因表達(dá)的影響。 答：蛋白質(zhì)磷酸化主要影響細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)而影響基因表達(dá)。 舉例：在糖原代謝過程中，激素與其受體在肌細(xì)胞外表面相結(jié)合，誘發(fā)細(xì)胞質(zhì) cAMP 的合成并活化 A 激酶，后者再將活化磷酸基團(tuán)傳遞給無活性的磷酸化酶激酶，活化糖原磷酸化酶，最終將糖原磷酸化，進(jìn)入糖酵解途徑并提供 ATP。 （cAMP 介導(dǎo)的蛋白質(zhì)磷酸化過程） 6、簡(jiǎn)述構(gòu)建 cDNA 文庫的基本操作？ 答：（1）細(xì)胞總 RNA 的提取和 mRNA 分離 （2）第一鏈 cDNA 和第二鏈 cDNA 合成并連接產(chǎn)生重組 DNA （3）將重組 DNA 通過載體轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)乃拗?（4）篩

14、選鑒別重組克隆 （5）擴(kuò)增和保存文庫 7、請(qǐng)舉例說明構(gòu)建噬菌體 cDNA 文庫的主要操作。 答：先提取 mRNA，反轉(zhuǎn)錄成 cDNA。 再把 cDNA 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，導(dǎo)入感受態(tài)大腸桿菌。 送測(cè)把連接好的大腸桿菌，擴(kuò)大培養(yǎng)，提取好的大腸桿菌送到測(cè)序公司測(cè)序。公司 序列cdna 有大腸桿菌的序列，不符合的就是轉(zhuǎn)錄進(jìn)去的 8、簡(jiǎn)述真核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。 答：（1）真核基因組龐大，一般都大于原核生物的基因組。 （2）真核生物基因組存在大量的重復(fù)序列。 （3）真核基因組大部分為非編碼序列，占整個(gè)基因組序列的 90%以上。 （4）真核基因組的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。 （5）真核基因是斷裂基因，有內(nèi)含

15、子結(jié)構(gòu)。 （6）真核基因組內(nèi)有大量的順式作用元件。包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等。 （7）真核基因組中存在大量的 DNA 多態(tài)性。 （8）真核基因組有端粒結(jié)構(gòu)。 9、舉例說明原核生物特殊代謝物對(duì)基因活性的調(diào)節(jié)方式。 答：一.可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)：指一些基因在某些代謝物的誘導(dǎo)下使其活化，由原來的關(guān)閉狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)殚_放狀態(tài)。例如大腸桿菌的乳糖操縱子：誘導(dǎo)物通過與阻遏物結(jié)合，改變它的三維構(gòu)象，使之不能與操縱區(qū)相結(jié)合，所以啟動(dòng)子能夠順利起始 mRNA 的轉(zhuǎn)錄。 二.可阻遏調(diào)節(jié)：是指一些基因由于某些代謝物的積累，而使其由原來的開放狀態(tài)變?yōu)殛P(guān)閉狀態(tài)。例如色氨酸操縱子：當(dāng)色氨酸濃度增高時(shí)，核糖體沿 mRNA 翻譯移動(dòng)的速度加快，占

16、據(jù)到 2 段的機(jī)會(huì)增加，2、3 配對(duì)的機(jī)會(huì)減少，3、4 形成終止結(jié)構(gòu)的機(jī)會(huì)增多，轉(zhuǎn)錄減弱。 10、試簡(jiǎn)要說明真核生物 DNA 水平上的基因表達(dá)調(diào)控方式。 答：一、基因丟失：是在有些低等真核生物的個(gè)體發(fā)育過程中，細(xì)胞分化時(shí)一些不需要的基因被消除的現(xiàn)象。如馬蛔蟲：體細(xì)胞分化中，某些 DNA 片段丟失 二、基因擴(kuò)增：在某些情況下，基因組中的某些特定基因會(huì)復(fù)制產(chǎn)生許多拷貝，使得這種基因數(shù)量專一性地大量增加。 三、基因重排：基因從遠(yuǎn)離啟動(dòng)子的位置移到距離啟動(dòng)子近的位置，從而啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄?；蛑嘏攀辜?xì)胞能利用幾百個(gè)抗體基因的片段，組合變化而產(chǎn)生能編碼達(dá) 108 種不同抗體的基因。 四、基因變換：由于 DNA

17、片段缺失使調(diào)控區(qū)和新受體基因連接成新基因，使原來無活性基因轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚?。如?珠蛋白基因的調(diào)控表達(dá) 五、基因移位：轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座，產(chǎn)生突變或新的基因。 六、DNA 修飾：DNA 甲基化和去甲基化。 11、請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)試驗(yàn)，構(gòu)建理想的小鼠基因組文庫。 答：一、分離純化基因組 DNA。用小鼠的肝臟來提取 DNA： 取適量的新鮮肝臟制備組織勻漿。 加入細(xì)胞裂解液使細(xì)胞充分的裂解。 加入蛋白酶 K 消化細(xì)胞，注意混勻但是不能太劇烈以免 DNA 斷裂。 加氯仿去除蛋白質(zhì)。混勻后離心后，分三層上層是 DNA，這一步吸取上層時(shí)最好用剪過的槍頭避免吸入蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。 。RNA 酶去除 RNA 加入加入氯化鈉溶解沉淀，離

18、心去除上清液，加入異丙醇出現(xiàn)絮狀物， 乙醇洗滌 DNA 沉淀，并用 TE 緩沖液溶解。 瓊脂糖電泳檢測(cè) DNA 的質(zhì)量。 二二、切割 DNA 成合適的片段以用于克隆。將 DNA 切割成大小為 410kb 的片段。 三、載體 DNA 的制備。用 噬菌體載體。載體用 Sau3A 酶解，用氯化銫密度梯度離心。四、基因組 DNA 與載體連接。連接反應(yīng)中要考慮兩個(gè)因素，即噬菌體兩臂 DNA 插入 片段的比例和反應(yīng)混合液中 DNA 的濃度。 五、利用體外包裝系統(tǒng)將多聯(lián)體組裝成完整的顆粒。 六、重組載體轉(zhuǎn)化受體感受態(tài)細(xì)胞 七、擴(kuò)增 DNA 文庫。大腸桿菌的液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)。 八、基因組文庫的鑒定。 12、舉

19、例說明真核生物中蛋白質(zhì)磷酸化對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。、舉例說明真核生物中蛋白質(zhì)磷酸化對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。 答：答：蛋白質(zhì)磷酸化主要影響細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)而影響基因表達(dá)。 舉例：在糖原代謝過程中，激素與其受體在肌細(xì)胞外表面相結(jié)合，誘發(fā)細(xì)胞質(zhì) cAMP 的合成并活化 A 激酶。后者再將活化磷酸基團(tuán)傳遞給無活性的磷酸化酶激酶，活化糖原磷酸化酶，最終將糖原磷酸化，進(jìn)入糖酵解途徑并提供 ATP。 13、克隆用載體應(yīng)滿足哪些條件？、克隆用載體應(yīng)滿足哪些條件？ 答：答：（1）必須含有允許外源 DNA 片斷組入的合適位點(diǎn)。并且這樣的克隆位點(diǎn)應(yīng)盡可能的多。 （2）克隆載體應(yīng)能攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞，或能在受體細(xì)胞中自我復(fù)

20、制；或能整合到 受體細(xì)胞 DNA 中同步復(fù)制。 （3）克隆載體必須含有供選擇用的標(biāo)記基因。以有利于克隆子的篩選和鑒定。 （4）克隆載體必須是安全的，不應(yīng)含有對(duì)受體細(xì)胞有害的基因，并且不會(huì)任意轉(zhuǎn)入除受體細(xì)胞以外的其他生物的細(xì)胞，尤其是人的細(xì)胞。 14、簡(jiǎn)述體外表達(dá)基因的操作？、簡(jiǎn)述體外表達(dá)基因的操作？ 答：答：獲得目的基因：設(shè)計(jì)引物，利用 RT-PCR 技術(shù)體外擴(kuò)增目的基因。 構(gòu)建酵母表達(dá)載體：將具有復(fù)制起始位點(diǎn)、酶切位點(diǎn)、選擇標(biāo)記的 pBR322 質(zhì)粒載體組裝上啟動(dòng)子、終止子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)等表達(dá)元件，并在起始密碼與目的基因之間加入一個(gè)信號(hào)肽，構(gòu)建成酵母表達(dá)載體，使目的蛋白能分泌到胞外。 目的

21、基因與酵母表達(dá)載體連接：用兩種限制性內(nèi)切核酸酶消化表達(dá)載體 DNA 和生長(zhǎng)素 DNA片段，使載體和目的基因的兩端分別形成不同的黏性末端，將它們混合，在連接酶的作用下相同的黏性末端可退火連接成重組 DNA 分子，從而實(shí)現(xiàn)酵母表達(dá)載體 DNA 和目的基因 DNA 的定向連接。 轉(zhuǎn)化及陽性克隆篩選：將重組 DNA 導(dǎo)入酵母菌細(xì)胞，經(jīng)過培養(yǎng)擴(kuò)增后，利用抗藥性標(biāo)記插入失活選擇法在選擇培養(yǎng)基上篩選出陽性克隆。 陽性克隆表達(dá)鑒定：挑取陽性克隆接種于麥?zhǔn)檄傊囵B(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，沉淀收集產(chǎn)物，利用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，得到目的基因表達(dá)產(chǎn)物。 、簡(jiǎn)述基因組文庫構(gòu)建的基本操作？、簡(jiǎn)述基因組文庫構(gòu)建的基本操作？

22、15 答：答： 載體 DNA 的制備； 基因組 DNA 的提取； 基因組 DNA 的部分酶切、分離與回收； 載體與外源片段的連接與轉(zhuǎn)化或侵染宿主細(xì)胞； 重組克隆的挑選和保存。 16、什么是免疫印跡技術(shù)，并舉例說明其中的具體操作。、什么是免疫印跡技術(shù)，并舉例說明其中的具體操作。 答：答：免疫印跡又常稱 Western blot，是一綜合性的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。它利用 SDS-PAGE 技術(shù)將生物樣品中的蛋白質(zhì)分子按分子量的大小在凝膠上分離開，然后用電轉(zhuǎn)移的方法將蛋白轉(zhuǎn)移到固相膜上（NC、尼龍或 PVDF 膜） ，最后進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)。 典型的印跡實(shí)驗(yàn)包括五個(gè)步驟： 蛋白樣品的制備； 經(jīng)過 SDS-PA

23、GE 分離樣品； 將電泳后凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固體膜上，用非特異性，非反應(yīng)活性分子封閉固體膜上未吸附蛋白質(zhì)區(qū)域； 用固定在膜上的蛋白質(zhì)作為抗原，與固定的非標(biāo)記抗體結(jié)合； 洗去未結(jié)合的一抗，加入標(biāo)記的二抗，通過顯色或放射自顯影法檢測(cè)凝膠中的蛋白質(zhì)成分。 17、舉例說明磷酸化對(duì)真核生物基因表達(dá)的影響。、舉例說明磷酸化對(duì)真核生物基因表達(dá)的影響。 答：見第答：見第 12 題。題。 18、試說明真核生物、試說明真核生物 RNA 的剪接機(jī)制的剪接機(jī)制。 答：答： 類內(nèi)含子的剪接主要是轉(zhuǎn)酯反應(yīng)，即剪接反應(yīng)實(shí)際上是發(fā)生了兩次磷酸二脂鍵的轉(zhuǎn)移。在 I 類內(nèi)含子的切除體系中，第一個(gè)轉(zhuǎn)酯反應(yīng)由一個(gè)游離的鳥苷或者鳥苷

24、酸介導(dǎo)，鳥苷或鳥苷酸的 3OH 作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子 5端的磷酸二脂鍵，從上游切開 RNA 鏈。在第二個(gè)轉(zhuǎn)酯反應(yīng)中，上游外顯子的自由 3OH 作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子 3位核苷酸上的磷酸二脂鍵，使內(nèi)含子被完全切開，上下游兩個(gè)外顯子通過新的磷酸二脂鍵相連。 類內(nèi)含子主要存在于真核生物的線粒體和葉綠體 rRNA 基因中，在類內(nèi)含子切除體系中，轉(zhuǎn)酯反應(yīng)無需游離鳥苷或鳥苷酸，而是由內(nèi)含子本身的靠近 3端的腺苷酸 2OH 作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子 5端的磷酸二脂鍵，從上游切開 RNA 鏈后形成套索結(jié)構(gòu)。再由上游外顯子的自由 3OH 作為親核基團(tuán)攻擊內(nèi)含子 3位核苷酸上的磷酸二脂鍵，使得內(nèi)含子被完全切開，上

25、下游兩個(gè)內(nèi)含子通過新的磷酸二脂鍵相連。 19、原核生物、原核生物 DNA 具有哪些不同于真核生物具有哪些不同于真核生物 DNA 的特征？的特征？ 答：答：真核生物：真核基因組龐大。存在大量的重復(fù)序列。大部分為非編碼序列(90)。啟動(dòng)(轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。是斷裂基因，有內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。存在大量的順式作用元件 子、增強(qiáng)子、沉默子)。存在大量的 DNA 多態(tài)性。具有端粒(telomere)結(jié)構(gòu) 原核生物：基因組很小，大多只有一條染色體，且 DNA 含量少。 主要是單拷貝基因，只有很少數(shù)基因如 rRNA 基因以多拷貝形式存在。 整個(gè)染色體 DNA 幾乎全部由功能基因與調(diào)控序列所組成； 幾乎每個(gè)基因序列都與它所編碼的蛋白質(zhì)序列呈線性對(duì)應(yīng)狀態(tài) 20、設(shè)計(jì)試驗(yàn)，分離與特定順式作用元件結(jié)合的反式作用因子。？、設(shè)計(jì)試驗(yàn)，分離與特定順式作用元件結(jié)合的反式作用因子。？ 21、設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案，判斷鐮刀形貧血病是否由編碼血紅蛋白的基因突變引起。、設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案，判斷鐮刀形貧血病