氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)

1、青島科技大學(xué)碩士學(xué)位論文氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體/納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)姓名：李小青申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：分析化學(xué)指導(dǎo)教師：孫偉20090608青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體屋內(nèi)米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)摘要本論文主要研究目的在于構(gòu)造和發(fā)展性能優(yōu)良的以直接電化學(xué)為基礎(chǔ)的第三代生物傳感器。血紅素蛋白質(zhì)是一種氧化還原蛋白質(zhì)，研究其直接電化學(xué)對(duì)于研究生命體內(nèi)的電子轉(zhuǎn)移過程，了解生命過程的氧化還原機(jī)理及建立高靈敏的檢測方法等方面具有非常實(shí)際的意義。納米粒子由于其獨(dú)特的光學(xué)、電學(xué)、催化等性質(zhì)，在修飾電極上的應(yīng)用研究已經(jīng)引起人們極大的關(guān)注。近年來，室溫離子液體逐漸成為研究的

2、熱點(diǎn)。本論文主要開展了以下幾個(gè)方面的研究工作： 1制備了3種離子液體修飾碳糊電極。以室溫離子液體1丁基3甲基咪唑六氟磷酸鹽(BMIMPF6)、六氟磷酸正丁基吡啶(BPPF6)和1乙基一3甲基咪唑四氟硼酸鹽(EMIMBF4)等為粘合劑和修飾劑，與石墨粉相混合制備了新型的離子液體修飾碳糊電極(CILE)。 2開展了血紅蛋白(Hb)和肌紅蛋白(m)在CILE上的直接電化學(xué)行為研究。分別以上述3種CILE為基底電極，以Nation、多壁碳納米管(MWCNTs)、單壁碳納米管(SWCNTs)、聚乙烯醇(PVA)、納米Ti02、殼聚糖(CTS)等為修飾材料，采用層層涂布法、直接混合法等固定方法，將Hb和M

3、b固定到不同電極的表面制備了不同類型蛋白質(zhì)電化學(xué)生物傳感器，如DeHbCILE、CTSnanoTi02HbCILE、NafionHbSWCNTsCILE、PVAHbMWCNTsCILE、NafionMbMWCNTsCILE、NationBMIMPF6HbCILE?？疾炝薍b和Mb在不同修飾膜電極上的直接電化學(xué)和電催化行為。采用掃描電子顯微鏡(SEM)、紫外可見吸收光譜、傅立葉變換紅外光譜和多種電化學(xué)法對(duì)修飾電極的性質(zhì)進(jìn)行了研究和表征。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Hb 和Mb在不同的修飾膜內(nèi)基本保持了其生物活性，循環(huán)伏安掃描出現(xiàn)一對(duì)準(zhǔn)可逆的氧化還原峰，并且在修飾電極上lib和Mb的電子傳遞能力明顯增強(qiáng)，納米粒

4、子和離子液體的存在提供了一個(gè)合適的微環(huán)境，對(duì)電化學(xué)行為有極大的促進(jìn)作用，對(duì)Hb和Mb的直接電化學(xué)行為進(jìn)行了研究，求解了相關(guān)的電化學(xué)參數(shù)。解釋了電化學(xué)行為的機(jī)理，進(jìn)一步研究了該修飾電極對(duì)H202、三氯乙酸(TCA)和亞硝酸鈉(NAN02)等小分子的電催化性質(zhì)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所制備的脅和Mb修飾電極表現(xiàn)出良好的電催化性能，求解了相應(yīng)的表觀米氏常數(shù)(KMapp)。3開展了lib在納米Ti02中的直接電化學(xué)行為研究。以BPPF6修飾的碳糊電極氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)為基底電極，采用靜電吸附的方法將Hb固定到電極表面上，制備了Hb修飾電極(nanoTi02HbCILE)。考察

5、了Hb在電極上的直接電化學(xué)和電催化行為。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Hb在nanoTi02膜內(nèi)能夠保持其原始構(gòu)象，循環(huán)伏安掃描出現(xiàn)一對(duì)準(zhǔn)可逆的氧化還原峰。對(duì)Hb的直接電化學(xué)行為進(jìn)行了研究，求解了相關(guān)的電化學(xué)參數(shù)。關(guān)鍵詞：氧化還原蛋白質(zhì)，室溫離子液體，直接電化學(xué)，電催化，碳糊電極， 生物傳感器，納米粒子II青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文DIRECT ELECTROCHEMISTRY OF REDOX PROTEINS IN IONIC LIQUID AND NANOPARTICLES MATERIAL COMPOSITE FILMS AB STRACT In this dissertation，the third

6、-generation electrochemical biosensors based on direct electron transfer between the proteins and the underlying electrodes were fabricated and developedHeme proteins are a kind of redox proteinsStudies on the direct electrochemistry of redox proteins can be used for the understanding of the mechani

7、sms of electron transfer reactions and oxidationreduction in life processe， which call also be proposed as a sensitive method for proteins determinationDue to the unique optical，electrical and catalytic characters of nanoparicles，nanoparticles have attracted much attention for their novel applicatio

8、ns in the modified electrodes Room temperature ionic liquids(RTILs)have excellent physical and chemical propertiesThe main points of the thesis are summarized as follows： 1Three room temperature ionic liquids(RTILs)modified carbon paste electrodes (CPE) were constructed based on the substitute of pa

9、raffin with 1-butyl-3-methylimidazolium hexatiuorophate(BMIMPF6)， N-butylpyrifinium hexafluorophosphate(BPPF6)or 1-ethyl-3methylimidazolium tetrafluoroborate (EMIMBF4)to mix with graphite power 2The direct electrochemistry of hemoglobin(wo)and myoglobin(Mb)on the carbon ionic liquid electrode(CILE)w

10、ere carefully studiedHb and Mb were immobilized on the surface of CILE with Nation and polyvinyl alcohol(PVA)film or NafionMWCNTs film by stepby-step methodThe characteristics of Hb and Mb in these modified films were investigated by scan electron microscopy,UV-Vis spectrum， FTIR spectrum and electr

11、ochemical methodsThe results showed that Hb and Mb in Ili氧化還原蛋向質(zhì)在離子液體納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)these films retained its native s咖cnlreA pair of well，defined and quasireversible cyclic voltammetric peaks appearedNanoparticles and room temperature ionic liuqids could provide a favorable microenvironrnent and enh

12、ance direct electron transfer rate The electrochemical behaviors of Hb and Mb in the modifled electrode were carefully investigated with the electrochemical parameters calculatedThe Hb and Mb modifled electrode showed excellent electrocatalytic behaviors to the reduction of hydrogen peroxide(H202)，t

13、richloroacetic acid(TCA)and sodium nitrite(NaN02)，The apparent MichaelisMenten constants(KM8pp)ofthe sensors were calculated 3The direct electrochemistry of Hb with Ti02 nanoparticle was carefully studied on the carbon ionic liquid electrode(CILE)，which was fabricated by using Nbutylpyridinium hexaf

14、luorophosphate(BPPF6)Hb was immobilized on the surface of CILE with Ti02 nanoparticle by adsorption methodThe direct electrochemistry and electrocatalysis ofHb in modified film was investigatedThe results showed that Hb in the film retained its native structureA pair of welldefined and quasi-reversi

15、ble cyclic voltammetric peaks appeared and the electrochemical parameters were furthur calculated KEY WORDS： redox proteins，room temperature ionic liquids，direct elelctrochemistry,electrocatalysis，carbon ionic liquid electrode，biosensor, nanoparticles W青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及

16、取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。本人簽名：套小南簽字日期：刃呵年月擴(kuò)日關(guān)于論文使用授權(quán)的說明本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)學(xué)校可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論

17、文。本人離校后發(fā)表或使用學(xué)位論文或與該論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，署名單位仍然為青島科技大學(xué)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書) 本學(xué)位論文屬于： 保密口，在年解密后適用于本聲明。不保密口。本人簽名： 導(dǎo)師簽名： 考j禹汐唧1 日期：幻口7年石月8-E1 日期：二秒口7年石月莎日青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文帚第一早章義文獻(xiàn)陬琢綜慫述11血紅素蛋白質(zhì)簡介氧化還原蛋白質(zhì)是一類具有氧化還原性質(zhì)的蛋白質(zhì)，可以接受或給出電子， 在其氧化態(tài)和還原態(tài)之間轉(zhuǎn)換。血紅素蛋白質(zhì)是一類含有血紅素輔基的蛋白質(zhì)。血紅素(heme)又叫鐵卟啉，是由原卟啉(protoporphyrin)與鐵(II)組成，又稱鐵一原卟

18、啉IX(FeprotoporphyriniX)，是一種以多種氧化態(tài)或還原態(tài)存在的分子，其結(jié)構(gòu)如圖1-1所示【l】。血紅素輔基通常都是血紅素蛋白質(zhì)電活性基團(tuán)。血紅素蛋白質(zhì)在電極上的直接電化學(xué)實(shí)質(zhì)上就是其中的血紅素輔基與電極間的電子轉(zhuǎn)移反應(yīng)。常見的氧化還原蛋白質(zhì)主要有：肌紅蛋白(Mb)、血紅蛋白(Hb)、辣根過氧化物酶(HI心)、細(xì)胞色素C(Cyt C)等。C 圖11血紅素的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig1-1 Chemical s缸u(yù)cnof heme 111血紅蛋白血紅蛋(Hemoglobin，Hb)是高等生物體內(nèi)負(fù)責(zé)運(yùn)載氧的一種氧化還原蛋白質(zhì)。分子量約為64，500，等電點(diǎn)為74【2】，分子尺寸為65x55

19、x50 nm【3】。人體內(nèi)I-Ib是由四個(gè)亞基構(gòu)成，分別為兩個(gè)a和兩個(gè)p亞基。Hb的每個(gè)亞基由一條肽鏈和一個(gè)血紅素分子構(gòu)成，肽鏈在生理?xiàng)l件下會(huì)盤繞折疊成球形，把血紅素分子圍繞在里面，這條肽鏈盤繞成的球形結(jié)構(gòu)稱為珠蛋白。血紅素分子中有一個(gè)具有卟啉結(jié)構(gòu)的小分子，在卟啉分子中心，由卟啉中四個(gè)吡咯環(huán)上大的氮氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)原子與一個(gè)亞鐵離子配位結(jié)合，珠蛋白肽鏈中第8位的一個(gè)組氨酸殘基中的吲哚側(cè)鏈上的氮原子從卟啉分子平面的上方與亞鐵離子配位結(jié)合，當(dāng)Hb不與氧結(jié)合的時(shí)候，有一個(gè)水分子從卟啉環(huán)下方與亞鐵離子配位結(jié)合，而當(dāng)Hb載氧的時(shí)候，就由氧分子頂替水的位置。112肌紅

20、蛋白肌紅蛋I蘭t(Myoglobin， Mb)位于肌肉的肌細(xì)胞中，其功能主要是儲(chǔ)氧和載氧。Mb是由一條多肽鏈和一個(gè)血紅素輔基構(gòu)成的中等大小的單鏈蛋白質(zhì)，其分子量約17，800，等電點(diǎn)為68E41。Mb的多肽鏈由153個(gè)氨基酸殘基組成，X 射線衍射研究表明，Mb中的多肽鏈70是以0【螺旋形式存在的。鏈中的極性的氨基酸殘基幾乎全部分布在分子表面，使Mb具有水溶性；而非極性的氨基酸殘基分布在分子的內(nèi)部，使得內(nèi)部成一個(gè)疏水空腔，血紅素幾乎整個(gè)包埋在這個(gè)空穴中。血紅素卟啉環(huán)中心的鐵原子有6個(gè)配位鍵，其中4個(gè)鍵與卟啉環(huán)上的N配位，形成一個(gè)平面，第5軸向配位鍵與肽鏈的組氨酸咪唑相聯(lián)，第6 軸向配位鍵或者空著

21、，或者結(jié)合氧。故Mb的重要生理功能之一是儲(chǔ)存和運(yùn)載氧分子。12蛋白質(zhì)的直接電化學(xué)研究進(jìn)展及研究意義生命過程離不開電子傳遞，無論是能量轉(zhuǎn)換，還是神經(jīng)傳導(dǎo)；無論是光合作用，還是呼吸過程甚至是生命的起源、大腦的思維、基因的傳遞都與電子傳遞密切相關(guān)。研究生命過程很重要的一個(gè)方面就是研究生物體內(nèi)的電子傳遞過程【5J。蛋白質(zhì)是類重要的生物大分子，研究氧化還原蛋白質(zhì)在電極表面的電子傳輸過程對(duì)于了解生命體內(nèi)的物質(zhì)代謝和能量轉(zhuǎn)換、了解生物分子的結(jié)構(gòu)和各種物理化學(xué)性質(zhì)、探索其在生命體內(nèi)的生理作用及作用機(jī)制、開發(fā)新型第三代生物傳感器和生物燃料電池以及生物電子學(xué)等均具有重要意義。由于多數(shù)蛋白質(zhì)的分子量較大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，

22、其電活性基團(tuán)或氧化還原中心深埋在多肽鏈內(nèi)部，與電極表面距離較遠(yuǎn)，因此，溶液中的氧化還原蛋白質(zhì)與電極直接交換電子非常困難，并且直接電子傳輸?shù)臋C(jī)理也非常復(fù)雜，同時(shí)與蛋白質(zhì)在電極表面的構(gòu)象和定位等很多因素有關(guān)，同時(shí)溶液中的大分子雜質(zhì)在電極表面的吸附和蛋白質(zhì)本身的吸附變性也會(huì)阻礙蛋白質(zhì)與電極間的直接電子轉(zhuǎn)移【61。20世紀(jì)90年代以來，為了實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)和電極之間有效的直接電子傳遞， 人們進(jìn)行了大量研究，一個(gè)比較有效的方式是將蛋白質(zhì)通過薄膜修飾電極固定2青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文在電極表面，因此薄膜修飾電極為蛋白質(zhì)的直接電化學(xué)研究提供了一個(gè)新的思路。121蛋白質(zhì)的固定方法為了研制價(jià)格低，靈敏度高，選擇性好

23、和壽命長的生物傳感器，蛋白質(zhì)固定化技術(shù)顯得非常重要。主要包括物理吸附法，共價(jià)鍵合法，化學(xué)交聯(lián)法，包埋法， 夾心法等。現(xiàn)己報(bào)道的較為成熟的固定方法可歸納如下【7】。1211物理吸附法此法是通過蛋白質(zhì)的極性鍵、氫鍵、疏水鍵的作用將生物組分吸附于不溶性的惰性載體上，常用的惰性載體如石墨粉、活性碳、分子篩等。物理吸附法的特點(diǎn)是方法簡便、操作條件溫和，對(duì)生物活性影響小，缺點(diǎn)是蛋白質(zhì)與固體表面結(jié)合力比較弱，容易導(dǎo)致蛋白質(zhì)的泄露或脫附，從而造成傳感器的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性差，而且蛋白質(zhì)暴露在外，容易受溫度、pH、離子強(qiáng)度等環(huán)境因素的影響，因此使用壽命無法滿足實(shí)際要求。1212共價(jià)鍵合法將蛋白質(zhì)通過共價(jià)鍵與載體表面

24、結(jié)合而固定的方法稱為共價(jià)鍵合法。該方法是將基體表面進(jìn)行活化處理，然后與蛋白質(zhì)偶聯(lián)，從而使生物組分結(jié)合到基體表面。該法的優(yōu)點(diǎn)是通過形成共價(jià)鍵將蛋白質(zhì)固定，相對(duì)比較穩(wěn)定， 不易發(fā)生脫附。但是容易導(dǎo)致靈敏度降低或蛋白質(zhì)失活，操作復(fù)雜，耗時(shí)，成本高。1213化學(xué)交聯(lián)法使用戊二醛等雙功能團(tuán)試劑，使蛋白質(zhì)以共價(jià)鍵交聯(lián)在固體表面。該法的優(yōu)點(diǎn)是蛋白質(zhì)的固定比較牢固，不易脫落。其缺點(diǎn)是難以控制，形成的蛋白質(zhì)比較膨松，導(dǎo)致擴(kuò)散阻力大，且需要的試劑量比較大，容易引起蛋白質(zhì)活性降低。1214包埋法包埋法將生物功能物質(zhì)與生物高分子或者聚合物等溶劑混合而使生物功能物質(zhì)包埋于其中，經(jīng)溶劑揮發(fā)后制成敏感膜的方法稱為包埋法。常

25、用的聚合物如殼聚糖、瓊脂糖等，由于包埋法優(yōu)點(diǎn)較多，而且方法簡單，操作簡便， 因而在生物傳感器的構(gòu)造中得到了廣泛應(yīng)用。1215夾心法此法是將蛋白質(zhì)封閉在雙層濾膜或電極濾膜之間，這種方法可以為蛋白質(zhì)分子提供一個(gè)相對(duì)封閉的微環(huán)境，對(duì)提高蛋白質(zhì)分子的穩(wěn)定性能發(fā)揮比較積極的作用，這種方法主要用于蛋白質(zhì)反應(yīng)器和早期的傳感器中。3氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)13蛋白質(zhì)修飾電極的類型利用薄膜修飾電極來研究氧化還原蛋白質(zhì)，為蛋白質(zhì)的直接電化學(xué)研究開辟了新的方向【89】。這里被研究的蛋白質(zhì)不是處于溶液相中，而是處于修飾電極的表面的薄膜中。在薄膜所提供的不同于水溶液的獨(dú)特而有利的微環(huán)境中，

26、氧化還原蛋白質(zhì)往往可以與電極進(jìn)行直接快速的電子交換，從而表現(xiàn)出良好的電化學(xué)行為，避免了由于引入外界媒介體而給電極反應(yīng)帶來的復(fù)雜性與局限性。同時(shí)，薄膜修飾電極中，蛋白質(zhì)和酶的用量極微，這為蛋白質(zhì)的直接電化學(xué)研究提供了極大的便利。按照薄膜材料不同，可將蛋白質(zhì)薄膜電極分為雙層類脂膜【8】，表面活性劑薄膜101，聚合物水凝膠薄膜121，復(fù)合物薄膜【13】，天然高分子薄膜141，納米粒子薄膜【1 5】等不同類型。按照對(duì)電極修飾方式不同，薄膜電極可以分為涂布型薄膜、溶膠一凝膠薄膜、LangmuirBlodgett(LB)膜、自組裝膜(SAMs)、雙層類脂膜(BLMs)、層層組裝(Layerby-Layer

27、 Assembly)薄膜等。14納米材料及其在生物傳感器中的應(yīng)用納米材料可以廣泛地應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，如進(jìn)行細(xì)胞分離、細(xì)胞染色等， 正是由于納米材料具有上述一系列優(yōu)異特性及廣闊的應(yīng)用前景，系統(tǒng)地研究和開發(fā)新型納米材料具有重要的實(shí)際意義，同時(shí)深入研究納米材料的各種物性及其微觀結(jié)構(gòu)的內(nèi)在聯(lián)系對(duì)于進(jìn)一步促進(jìn)低維固體物理的發(fā)展也具有深刻的理論意義。要實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)和電極之間比較有效的直接電子傳遞，就要構(gòu)造一個(gè)合適的薄膜電極界面，因此構(gòu)建膜的物質(zhì)的選擇非常重要，各種新型成膜材料和物質(zhì)也不斷被應(yīng)用于蛋白質(zhì)薄膜電極的制備。由于本論文采用了納米材料和室溫離子液體兩類物質(zhì)，因此將兩種類型的材料及其在蛋白質(zhì)的直接電化

28、學(xué)和生物傳感器方面的應(yīng)用進(jìn)行簡單的介紹。141納米材料簡介廣義地講，納米材料是指在三維空間中至少有一維處于納米尺度范圍(1100 nm)或由它們作為基本單元構(gòu)成的具有特殊性能的材料【16】。由于納米結(jié)構(gòu)單元的尺度與物質(zhì)中的許多特征長度，如電子的德布洛意波長、超導(dǎo)相干長度、隧穿勢壘厚度、鐵磁性臨界尺寸相當(dāng)，從而導(dǎo)致納米材料的物理、化學(xué)特性既不同于微觀的原子、分子，也不同于宏觀物體，從而把人們探索自然、創(chuàng)4青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文造知識(shí)的能力延伸到介于宏觀和微觀物體之間的中間領(lǐng)域。142納米材料的特性一般來說，納米材料有以下幾個(gè)特征【17】： (1)小尺寸效應(yīng)。當(dāng)超微粒子的尺寸與光波波長、德布羅

29、意波長以及超導(dǎo)態(tài)的相干長度或透射深度等特征尺寸相當(dāng)或更小時(shí)，周期性的邊界條件將破壞聲、光、電磁、熱力學(xué)等特性均會(huì)呈現(xiàn)新的效應(yīng)IiPd,尺寸效應(yīng)。這就是納米粒子的小尺寸效應(yīng)(也稱體積效應(yīng))，是其它效應(yīng)的基礎(chǔ)，這種效應(yīng)為納米材料的具體應(yīng)用開拓了廣闊的新領(lǐng)域。(2)表面與界面效應(yīng)。納米微粒由于尺寸小，表面積大，表面能高，位于表面的原子占相當(dāng)大的比例。這些表面原子處于嚴(yán)重的缺位狀態(tài)，因此其活性極高， 極不穩(wěn)定，遇見其它原子時(shí)很快結(jié)合，使其穩(wěn)定化，這種活性就是表面效應(yīng)。(3)量子尺寸效應(yīng)。當(dāng)粒子尺寸下降到某一值時(shí)，金屬費(fèi)米能級(jí)附近的電子能級(jí)由準(zhǔn)連續(xù)變?yōu)殡x散能級(jí)的現(xiàn)象以及納米半導(dǎo)體微粒存在不連續(xù)的最高被占

30、據(jù)分子軌道和最低軌道能級(jí)而使能隙變寬現(xiàn)象均稱為量子尺寸效應(yīng)。(4)介點(diǎn)限域效應(yīng)。隨著納米晶粒粒徑的不斷減小和比表面積不斷增加，其表面狀態(tài)的改變將會(huì)引起微粒性質(zhì)的顯著變化，從而導(dǎo)致它比裸露納米材料的光學(xué)性質(zhì)發(fā)生了較大的變化，這就是介電限域效應(yīng)。(5)宏觀量子隧道效應(yīng)。當(dāng)微觀粒子的總能量小于勢壘高度時(shí)，該粒子仍能穿越這一勢壘的能力，后來人們發(fā)現(xiàn)一些宏觀量，如磁化強(qiáng)度、量子相干器件中的磁通量等也具有隧道效應(yīng)，稱之為宏觀量子隧道效應(yīng)。143納米材料的分類納米微粒的特異效應(yīng)，尤其是其小的尺寸和大的比表面積，使得納米材料具有與常規(guī)材料不同的物理的、化學(xué)的和電學(xué)的性質(zhì)。納米材料尺寸、結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的可控性為設(shè)計(jì)

31、新穎的傳感體系和提高生物分析裝置的性能提供了極好的前景。納米材料種類繁多，在酶或蛋白質(zhì)的直接電化學(xué)和生物傳感器構(gòu)造方面用的比較多的納米材料包括導(dǎo)電的納米材料，如貴金屬、碳材料和導(dǎo)電聚合物和半導(dǎo)體納米材料等，這些納米材料，不論是納米管、納米線、納米球還是多孔的納米材料，常常可以作為電極表面的修飾材料，提高對(duì)生物分子的固定量，氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)進(jìn)而起到提高傳感器性能的作用。下面就這幾種納米材料在酶或蛋白質(zhì)的直接電化學(xué)和生物傳感器方面的應(yīng)用作一簡單的介紹。(1)金屬納米材料這類材料中用的比較多的主要是貴金屬納米粒子，如Pt，Pd，Au，Ag等， 因?yàn)槠浜芎玫膶?dǎo)電性

32、可以應(yīng)用在生物傳感器中，同時(shí)這些材料本身又有較寬的電位窗口和很好的化學(xué)穩(wěn)定性，所以對(duì)生物傳感器的發(fā)展有著重要意義。Ding 等【l 8J以離子液體和Au納米粒子作為修飾膜研究了0L一甲胎蛋白質(zhì)的直接電化學(xué)行為。Xu等【l 9J將Au納米粒子和離子液體EMIMBF4混合涂布到熱解石墨電極表面上，然后將Cty C固定到該修飾電極的表面上，研究其直接電化學(xué)行為， 并且該修飾電極對(duì)02具有較好的電催化行為。(2)碳材料碳材料是生物傳感裝置中用的最普遍的一類材料，因?yàn)槠錁O好的電子導(dǎo)電性、化學(xué)和電化學(xué)穩(wěn)定性以及機(jī)械強(qiáng)度等而在生物傳感裝置中具有不可替代的地位，這類材料包括碳納米管、碳納米纖維、介孔碳微球等，

33、其中碳納米管有單壁碳納米管(SWCNTs)和多壁碳納米管(MWCNTs)兩種形式。Yang等【20】利用C60來修飾MWCNTs，并用于Fib的固定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，c60修飾MWCNTs 更有助于提高Fib的電化學(xué)活性和穩(wěn)定性，C60起到了電子媒介體的作用。Li等瞄lJ報(bào)道了C夠C在SWCNTs修飾的玻碳電極上的直接電化學(xué)及其對(duì)H202的電催化行為。Zhou等【22】觀察到過氧化氫酶在SWCNTs薄膜修飾的Au電極上有一對(duì)可逆的循環(huán)伏安峰，并研究了其對(duì)H202的電催化行為。(3)半導(dǎo)體納米材料半導(dǎo)體納米材料，由于其通常具有高的比表面積、非毒性、生物相容性和光學(xué)透明性較好、化學(xué)和光化學(xué)穩(wěn)定性高等

34、優(yōu)點(diǎn)而在生物分析領(lǐng)域吸引了越來越多研究者的興趣。Ju等怛副將肌紅蛋白(Mb)固定到介孔硅納米材料上實(shí)現(xiàn)了Mb在電極表面的直接電化學(xué)。Li等【24】將肌紅蛋白固定在AuTi02GCE表面上， 研究了其電化學(xué)和對(duì)三氯乙酸具有較好的電催化行為。Luo等【25】研究了Hb、Mb與Cyt C在納米Ti02膜中的直接電化學(xué)行為，提出了這三種蛋白質(zhì)能夠表現(xiàn)出較好的電化學(xué)行為的原因可能為：納米Ti02具有較強(qiáng)的生物相容性、較大的比表面積而且能夠與蛋白質(zhì)分子發(fā)生特殊的鍵合作用。Lu掣261采用多孔片狀的C0304納米粒子和Nation將Hb固定到玻碳電極表面上，研究了直接電化學(xué)行為，同時(shí)制備了一種新型的過氧化氫

35、傳感器，最低檢測限為019molL。6青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文(4)納米復(fù)合材料納米復(fù)合材料近年來的研究和應(yīng)用越來越廣泛，復(fù)合材料的種類也越來越多，像無機(jī)無機(jī)復(fù)合材料、無機(jī)有機(jī)復(fù)合材料、有機(jī)一有機(jī)復(fù)合材料等。復(fù)合材料最大的優(yōu)勢是能夠利用兩種材料各自的優(yōu)點(diǎn)而帶來單種材料所不具備的一些性能，或者利用材料之間的協(xié)同作用達(dá)到意想不到的奇特效應(yīng)，在酶和蛋白質(zhì)的直接電化學(xué)和生物傳感器研究方面的應(yīng)用越來越廣。144納米材料在電化學(xué)生物傳感器中的應(yīng)用目前納米材料在電化學(xué)傳感器中的應(yīng)用主要有貴金屬納米材料、碳納米管、半導(dǎo)體納米材料等。Gimen等【2刀發(fā)現(xiàn)在熱解石墨電極上形成的Pd納米島能高效的催化氫原子的吸

36、附和脫附反應(yīng)。董紹俊等【128,29】1報(bào)道納米Pd單層膜修飾的玻碳電極和HOPG電極都對(duì)肼的氧化呈現(xiàn)出較高的催化活性，可用于檢測微量的甲肼化合物。聚合物一納米Pd多層膜修飾碳電極可以改善對(duì)肼類化合物氧化的催化響應(yīng)， 也能催化氧的還原，該修飾多層膜相當(dāng)穩(wěn)定【301。經(jīng)層層組裝形成的納米Pt金屬卟啉多層膜修飾玻碳電極，對(duì)氧通過4e還原生成水，具有很高的催化活性和高穩(wěn)定性，可望用于燃料電池氧陰極材料的研制【311。碳納米管(CNT)的發(fā)現(xiàn)為低維納米結(jié)構(gòu)在電化學(xué)和生物傳感方面的應(yīng)用開辟了嶄新的方向，CNT特殊的結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出優(yōu)異的催化性能。Lin等【32J用CNT偉IJ備了葡萄糖生物傳感器，可以在對(duì)乙酞

37、氨基酚、尿酸和抗壞血酸共存下選擇性檢測葡萄糖。WaIlg等p3J制備了CNT纖維微電極，對(duì)NADH、I-12,02和多巴胺都有很好的催化活性，他們將CNT和聚四氟乙烯混合修飾電極，同樣對(duì)NADH表現(xiàn)出強(qiáng)的電催化活性【341，將CNT修飾在玻碳電極上， 可以實(shí)現(xiàn)Hb的直接電化學(xué)【351。Sun等【36】用SWCNTs和Nation將Hb固定到離子液體修飾電極表面上，研究了m的直接電化學(xué)和電催化行為。Zheng等【3 7】將MWCNTs 固定到玻碳電極(GCE)上，然后將肌紅蛋白和納米Ti02混合修飾到MWCNTsGCE 表面以研究其電化學(xué)行為。由于納米粒子高的比表面和其本身的生物兼容性，在生物電

38、催化反應(yīng)中起著重要作用。與小尺寸納米粒子結(jié)合組裝的酶，其活性中心可更接近電極表面，易于進(jìn)行電子轉(zhuǎn)移，提高了生物電催化活性。導(dǎo)電的納米粒子與氧化還原蛋白質(zhì)和酶之間可以發(fā)生直接的電子轉(zhuǎn)移，不需要電子媒介體，可作為理想的第三代生物傳感器，如辣根過氧化物酶(HRP)與納米Au【38，391、納米Ti02【251、鉑黑【40】的混合組裝膜對(duì)H202的直接電催化還原。Kenneth等【41】人在Sn02電極上修飾納米金后，對(duì)細(xì)胞色素C的直接電化學(xué)行為進(jìn)行了研究。Mn02納米粒子與肌紅蛋白(Mb)的多層組裝可形成穩(wěn)定、多孔和高表面積的多層膜【421，在約30 am厚的膜層中，仍可實(shí)7氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體

39、納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)現(xiàn)Mb的直接電化學(xué)。將溶膠一凝膠和納米自組裝技術(shù)相結(jié)合來固載HRP，也實(shí)現(xiàn)了酶的直接電化學(xué)，對(duì)H202的還原顯示出很高的催化活性【431。Fe304納米粒子因兼具磁性和小尺寸效應(yīng)，在生物領(lǐng)域內(nèi)得到廣泛應(yīng)用。Hu等【l5】采用層層組裝的方法將Hb固定在在納米Fe304薄膜電極上進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Fe304納米粒子薄膜為蛋白質(zhì)與電極間的直接電子轉(zhuǎn)移提供了一個(gè)適宜的微環(huán)境，使Hb能夠很好地實(shí)現(xiàn)其直接電化學(xué)行為，同時(shí)，該電極對(duì)亞硝酸鹽、三氯乙酸和H202有較好的電催化行為。15室溫離子液體在生物電化學(xué)中的應(yīng)用151離子液體簡介離子液體(IL)是在室溫及相鄰溫度下完全

40、由離子組成的有機(jī)液體物質(zhì)，簡稱離子液體【44,45】。許多離子液體都是有很寬的液態(tài)溫度范圍，從70到高達(dá)300400，在這些溫度下都可以作為液體使用。從結(jié)構(gòu)上說，離子液體一般是由特定的體積相對(duì)較大的有機(jī)陽離子和體積相對(duì)較小的無機(jī)陰離子構(gòu)成，大體可以分為A1C13型離子液體、非A1C13型離子液體和其它特殊離子液體。最常見的陽離子又烷基銨鹽、烷基磷酸鹽、吡啶離子、咪唑離子等，常見的陰離子有鹵素離子、含F(xiàn)，P，S的離子等。由于離子液體可以根據(jù)需要設(shè)計(jì)其陰陽離子的組成并改變其取代基，進(jìn)而改變其性能，在一定程度上可以實(shí)現(xiàn)人為設(shè)計(jì)， 使其能夠符合化學(xué)學(xué)科各個(gè)方向的研究需要，在有機(jī)化學(xué)、催化化學(xué)、電化學(xué)、

41、萃取分離等領(lǐng)域有了廣泛的應(yīng)用【46,47】，并且已經(jīng)滲透到功能材料、能源環(huán)境和生命科學(xué)等其它學(xué)科。152離子液體的物化性質(zhì)作為一類新型溶劑，室溫離子液體具有傳統(tǒng)溶劑所不具備的特點(diǎn)：(1)液態(tài)溫度范圍寬；(2)溶解能力強(qiáng)，且具有溶劑和催化劑的雙重功能，可作為許多化學(xué)反應(yīng)的溶劑或催化活性載體；(3)無顯著的蒸汽壓，不易揮發(fā)，不可燃性，在使用、貯藏中不會(huì)蒸發(fā)散失，可循環(huán)使用，不會(huì)造成環(huán)境污染；(4)熱穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性高；(5)粘度大，受02、pH等的影響小，可簡化實(shí)驗(yàn)條件；(6)較高的離子導(dǎo)電性，因此無需另外加入電解質(zhì)；(7)電位窗口寬；(8)低的毒性和環(huán)境影響；(9)種類繁多，并可通過選擇合適的

42、陰陽離子對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行調(diào)節(jié)；(10)具有良好的化學(xué)和熱力學(xué)穩(wěn)定性。而且，離子液體中蛋白質(zhì)、酶的穩(wěn)定性好，有利于進(jìn)行生物化學(xué)和生物催化反應(yīng)。8青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文綜上所述，作為新穎的綠色溶劑，室溫離子液體與常規(guī)的分子溶劑有很大不同，具有更低的環(huán)境毒性，更易被回收利用，這些性質(zhì)使得室溫離子液體在化學(xué)、材料學(xué)和生命科學(xué)等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。153室溫離子液體在生物電化學(xué)方面的研究進(jìn)展由于離子液體具有導(dǎo)電率高、電化學(xué)窗口寬等特點(diǎn)，使其在電化學(xué)和電分析化學(xué)領(lǐng)域中具有較明顯的優(yōu)點(diǎn)，而且其揮發(fā)性小、溶解性好、酸堿性可調(diào)， 使其在電化學(xué)的多方面都有巨大的應(yīng)用前景。孫偉【48】就室溫離子液體在分析化學(xué)中的

43、應(yīng)用進(jìn)行了綜述。同時(shí)，Endres【49】和Buzzeo50】詳細(xì)地介紹了室溫離子液體在各種電化學(xué)過程的應(yīng)用，主要有以下幾個(gè)方面： (1)離子液體可以作為粘合劑和修飾劑。孫偉等【51-53利用1丁基3甲基咪唑六氟磷酸鹽(BMIMPF6)為粘合劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)石蠟制備了BMIMPF6離子液體修飾電極(CILE)，并以其為基底電極，用海藻酸鈉、Nation和納米CaC03將Hb 固定到該修飾電極表面上，研究了Hb在該電極上的直接電化學(xué)和電催化行為。同時(shí)，也利用六氟磷酸正丁基吡啶(BPPF6)代替?zhèn)鹘y(tǒng)石蠟制備了BPPF6修飾電極，并以其為基底電極，用納米CaC03和Nation將I-Ib固定到該離子液體修

44、飾電極表面上，研究了Hb的直接電化學(xué)和電催化行為。Maleki等154J人以正辛基吡啶六氟磷酸鹽(OPPF6)為粘合劑制備了高性能的碳糊組合電極，研究結(jié)果表明該離子液體修飾電極具有良好的電化學(xué)性能，有效地提高了各種有機(jī)無機(jī)電活性物質(zhì)的電子轉(zhuǎn)移速率，并且降低了生物分子的過電位值。同時(shí)，也采用離子液體OpyPF6為粘合劑制備了離子液體電極(CILE)，并以其為基底將Pd采用電沉積的方法固定到該修飾電極表面制備了PdCILE，研究了肼的電催化行15引。Zheng等【56】采用1丁基吡啶六氟磷酸鹽(BuPyPF6】)作粘合劑代替液體石蠟制備了離子液體修飾電極，研究了葡萄糖氧化酶(GOx)在該修飾電極上

45、的電化學(xué)， 循環(huán)伏安掃描可以得到一對(duì)準(zhǔn)可逆的氧化還原峰，并且進(jìn)一步研究T(GOx)對(duì)H202的催化行為。各種類型碳納米材料與離子液體復(fù)合物修飾電極被廣泛應(yīng)用于研究生物大分子。董紹俊等【57】對(duì)基于室溫離子液體和碳材料的復(fù)合材料進(jìn)行了電化學(xué)和生物電化學(xué)方面的研究，他們分別將HRP和微過氧化物酶(MP11)包埋在BMIMPF6多壁碳納米管(MWCNTs)或者BMIMPF6空心碳微球復(fù)合材料中，發(fā)現(xiàn)這兩種基于室溫離子液體和碳復(fù)合材料修飾的酶電極能夠在磷酸緩沖液中發(fā)生直接電子傳輸，并且酶電極能夠促進(jìn)氧氣和過氧化氫的還原。由于碳納米管和離子液體之間存在著特殊的相互作用，它們的復(fù)合材料表現(xiàn)出優(yōu)良的性質(zhì)，

46、被廣泛應(yīng)用于構(gòu)建各種生物傳感器【5蹦o】。Zhang等6l】人將大量的單壁碳納米管9氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)溶解在離子液體中制備了碳納米管離子液體膜修飾電極，并將葡萄糖氧化酶固定于膜中用于葡萄糖的測定?！暗取?2】入將單壁碳納米管與離子液體組成的凝膠用于微電極的制備并且研究了其對(duì)NO的電催化氧化，檢測線性范圍為100 nmolL到100 I_tmolL。Xiang等【63】人用金納米粒子離子液體BMIMBFd多壁碳納米管復(fù)合膜將cyt C固定到玻碳電極表面上，研究了其直接電子轉(zhuǎn)移和對(duì)H202的電催化行為。Zhang等【叫用室溫離子液體(RTILs)、殼聚糖(CTS

47、)、多壁碳納米管(MWCNTs)復(fù)合膜將細(xì)胞色素C(Cyt C)固定到玻碳電極表面上，研究了Cyt C的直接電化學(xué)，同時(shí)該修飾電極對(duì)H202也具有良好的電催化作用， 檢測限為8O107 molL，這為第三代生物傳感器的研制奠定了基礎(chǔ)。由于離子液體具有高的導(dǎo)電性和穩(wěn)定性，因此可以作為一種膜材料固定于電極表面上。Sun等65】將離子液體BMIMPF6、皂土和血紅蛋白混合均勻后涂布于熱解石墨電極表面制備了修飾電極并研究了Hb的直接電化學(xué)與電催化行為。Yu等【66】人將親水性離子液體修飾于玻碳電極表面后形成單分子膜，該膜的存在對(duì)尿酸有電催化作用，并能夠促進(jìn)HRP的直接電子轉(zhuǎn)移過程。Zheng課題組【6

48、7】采用離子液體HMIMPF6制備了離子液體修飾碳糊電極(CILE)，應(yīng)用該修飾電極考察了對(duì)苯二酚的電催化行為，并和該離子液體作為膜材料制備的(ILCPE)進(jìn)行了比較?！俺?8】人采用離子液體BMIMBF4和硅溶膠一凝膠混合制備出HRP 修飾電極，與傳統(tǒng)的硅溶膠一凝膠修飾HRP電極相比，這種新型修飾電極具有更好的穩(wěn)定性和反應(yīng)活性。(2)離子液體可以作為電化學(xué)研究過程中的溶劑和支持電解質(zhì)。王歡等【69】采用循環(huán)伏安和計(jì)時(shí)庫侖等電化學(xué)方法研究了間硝基苯酚在離子液體1乙基3 甲基咪唑溴化物(EMIMBr)中的電化學(xué)還原行為，考察了掃描速度、溫度和底物濃度等因素對(duì)其電化學(xué)行為的影響，求得擴(kuò)散系數(shù)D為9

49、18xlOcm2s，電子轉(zhuǎn)移系數(shù)a為037，證明了在EMIMBr體系中，其反應(yīng)是受擴(kuò)散控制的不可逆反應(yīng)。楊家振等【_70，”】在室溫離子液體四氟硼酸正丁基吡啶(BPBF4)中研究了Fe”的電化學(xué)行為，求解了在不同濃度和溫度下Fe3+的擴(kuò)散系數(shù)和擴(kuò)散活化能， 結(jié)果表明擴(kuò)散活化能隨濃度增加而增大。Wang等【72】人用瓊脂糖水凝膠將亞鐵血紅素蛋白固定在玻碳電極上后在離子液體BMIMPF6中研究了它的電化學(xué)行為。(3)離子液體還可以做電化學(xué)氣體傳感器。由于離子液體具有較強(qiáng)的溶解能力，它還可用于制備各種類型如02、S02、C02和NH3的氣體傳感器。Buzzeo 等【73J人利用離子液體制備出修飾膜用

50、于氣體傳感器，可以將待測氣體溶解于膜中進(jìn)而產(chǎn)生響應(yīng)，使這種傳感器的響應(yīng)速度非?？臁＿@種傳感器不需要再加入任何支持電解質(zhì)，而且由于離子液體的熱穩(wěn)定性和低蒸汽壓的特點(diǎn)，可以使該10青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文種氣體傳感器用于高溫高壓的特殊環(huán)境中。Wang等【74751人分別以【BMIMPF6 和1乙基3甲基咪唑四氟硼酸鹽(EMIMBF4)為固體電解質(zhì)制備了安培氧氣傳感器，采用計(jì)時(shí)安培法可得到02產(chǎn)生瞬間的氧化還原電流，且可對(duì)氣體混合物中的02進(jìn)行定量檢測。16本論文的立題思想和研究內(nèi)容161立題思想氧化還原蛋白質(zhì)和酶的直接電化學(xué)研究不僅對(duì)于了解生命體內(nèi)的物質(zhì)代謝和能量轉(zhuǎn)換、了解生物分子的結(jié)構(gòu)和各種物

51、理化學(xué)性質(zhì)、探索其在生命體內(nèi)的生理作用及作用機(jī)制具有重要的意義，同時(shí)它為開發(fā)新型無媒介體的第三代生物傳感器以及生物燃料電池、生物醫(yī)療器件生物電子學(xué)等奠定基礎(chǔ)。162研究內(nèi)容利用室溫離子液體和納米材料等，通過與殼聚糖、Nation等生物相容性聚合物優(yōu)化組合，設(shè)計(jì)多種新的生物相容性復(fù)合體系，如聚合物室溫離子液體的復(fù)合體系，聚合物納米材料的復(fù)合體系，將這種基于室溫離子液體或者納米材料的復(fù)合體系用于構(gòu)造性能優(yōu)良的酶電極，為酶和蛋白質(zhì)直接電化學(xué)的研究和第三代生物傳感器的發(fā)展提供新的機(jī)遇。(1)制備了3種離子液體修飾碳糊電極。以室溫離子液體1丁基一3甲基咪唑六氟磷酸鹽、六氟磷酸正丁基吡啶和1乙基一3甲基咪

52、唑四氟硼酸鹽等為粘合劑和修飾劑，與石墨粉相混合制備了新型的離子液體修飾碳糊電極(CILE)。(2)構(gòu)建了基于氧化還原蛋白質(zhì)的電化學(xué)生物傳感器。以制備的多種新型的離子液體修飾碳糊電極為工作電極，以血紅蛋白(Hb)、肌紅蛋白(Mb)等為模擬酶，以Nation、多壁碳納米管(MWCNTs)、單壁碳納米管(SWCNTs)、納米Ti02、皂土(Clay)、聚乙烯醇(PVA)、殼聚糖(CTS)等為修飾材料，采用層層涂布法、直接吸附、直接混合等固定方法，將蛋白質(zhì)固定在電極的表面制各了不同類型的氧化還原蛋白質(zhì)電化學(xué)生物傳感器如NafioMmMWCNTsCILE、NafioIl】酏SWCNTsCILE、Nati

53、on一BMIMPFdHbCILE等。采用掃描電子顯微鏡(SEM)、紫外可見吸收光譜、傅立葉變換紅外光譜和多種電化學(xué)法對(duì)修飾電極的性質(zhì)進(jìn)行了研究和表征。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蛋白質(zhì)在不同的修飾膜內(nèi)基本保持了其生物活性，循環(huán)伏安掃描出現(xiàn)一對(duì)準(zhǔn)可逆的氧化還原峰，并且在修飾電極上其電氧化還原蛋白質(zhì)在離子液體納米材料復(fù)合體系中的直接電化學(xué)子傳遞能力明顯增強(qiáng)，納米粒子和離子液體的存在對(duì)電化學(xué)行為有極大的促進(jìn)作用，對(duì)Hb和Mb的直接電化學(xué)行為進(jìn)行了研究，求解了相關(guān)的電化學(xué)參數(shù)，解釋了電化學(xué)行為的機(jī)理，構(gòu)建了多種新型的電化學(xué)生物傳感器。(3)利用所制備的電化學(xué)生物傳感器進(jìn)行多種樣品的測定。該電化學(xué)生物傳感器對(duì)H202

54、、三氯乙酸(TCA)、亞硝酸鈉(NaN02)等多種重要的小分子具有良好的電催化效果，催化還原峰電流與測定對(duì)象的濃度成正比，進(jìn)而構(gòu)建了用于檢測微量分析對(duì)象的電化學(xué)傳感分析的新方法，對(duì)電催化機(jī)理和反應(yīng)動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究，求解了相應(yīng)的米氏常數(shù)。12青島科技大學(xué)研究生學(xué)位論文參考文獻(xiàn)1】賀平麗，血紅素蛋白質(zhì)在層層組裝薄膜電極上的直接電化學(xué)和層層組裝驅(qū)動(dòng)力的研究【D】，北京：北京師范大學(xué)，2004 2Matthew JB，Hanania GIH，Gurd,FRNCoordination complexes and catalytic properties of proteins and related s

55、ubstances1 04Electrostatic effects in hemoglobin： hydrogen ion equilibriums in human deoxy-and oxyhemoglobin A【J】，Biochemistry，1979， 18(10)：19191928 3】Weissbluth M，Molecular Biology：Biochemistry and Biophysics SpringerVerlag：New York，1974，V0115 4Bellelli A，Antonini G，Brunori M，etal，Transient spectroscopy of the reaction of cyanide witll ferrous myoglobin effect of distal side residuesJ，JBi01Chem，1 990，265： 1889818901 5】Milazzo，G，Blank，M，合編，肖科、唐寶璋、史爾綱譯，生物電化學(xué)生物氧化還原反應(yīng)M，天津科學(xué)出版社，天