第四章蛋白質(zhì)化學第六節(jié)蛋白質(zhì)及氨基酸的分離純化與測定

1、1一、一般原則及基本步驟一、一般原則及基本步驟 第六節(jié)第六節(jié) 蛋白質(zhì)的分離純化與測定蛋白質(zhì)的分離純化與測定2二、蛋白質(zhì)的分離純化方法二、蛋白質(zhì)的分離純化方法（一）根據(jù)（一）根據(jù)分子大小分子大小不同的純化方法不同的純化方法 （二）利用（二）利用溶解度溶解度差別的純化方法差別的純化方法 （三）根據(jù)（三）根據(jù)電荷電荷不同的純化方法不同的純化方法 （四）利用（四）利用選擇性吸附選擇性吸附的純化方法的純化方法 （五）利用（五）利用配體配體的特異性親和力的純化方法的特異性親和力的純化方法 3（一）根據(jù)分子大小不同的純化方法（一）根據(jù)分子大小不同的純化方法 1.1.透析和超濾透析和超濾 2. 2.密度梯度離

2、心密度梯度離心 3. 3.凝膠過濾凝膠過濾1.1.透析和超濾透析和超濾半透膜袋半透膜袋蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液透析液透析液磁棒磁棒 磁力攪拌器磁力攪拌器 透析是利用蛋白質(zhì)等透析是利用蛋白質(zhì)等大分子不能通過半透膜的大分子不能通過半透膜的性質(zhì)，使蛋白質(zhì)和其它小性質(zhì)，使蛋白質(zhì)和其它小分子物質(zhì)如無機鹽單糖等分子物質(zhì)如無機鹽單糖等分開。常用的半透膜：分開。常用的半透膜： 玻璃紙（賽璐玢紙，玻璃紙（賽璐玢紙，cellophane paper） 火綿紙（賽璐玎紙火綿紙（賽璐玎紙, celloidin paper） 其他改型纖維材料其他改型纖維材料超過濾（超過濾（ultrafiltration） 利用壓力、抽濾（

3、利用壓力、抽濾（A）或離）或離心力（心力（B）等多種形式，強行使）等多種形式，強行使水和其它小分子溶質(zhì)通過半透水和其它小分子溶質(zhì)通過半透膜，而蛋白質(zhì)被截留在膜上，膜，而蛋白質(zhì)被截留在膜上，以達到濃縮和脫鹽目的。濾膜以達到濃縮和脫鹽目的。濾膜有多種規(guī)格，可選擇性的截留有多種規(guī)格，可選擇性的截留相對分子量不同的蛋白質(zhì)。相對分子量不同的蛋白質(zhì)。 為了避免被膜截留的蛋白質(zhì)為了避免被膜截留的蛋白質(zhì)在膜表面上堆積，現(xiàn)常用在膜表面上堆積，現(xiàn)常用截向截向流過濾流過濾的方法，即液體在泵驅(qū)的方法，即液體在泵驅(qū)動下沿著與膜表面相切方向流動下沿著與膜表面相切方向流動，在膜上形成壓力，使部分動，在膜上形成壓力，使部分液

4、體透過膜，而另一部分液體液體透過膜，而另一部分液體切向地流過表面將被膜截留的切向地流過表面將被膜截留的蛋白質(zhì)分子沖走。蛋白質(zhì)分子沖走。濾膜濾膜抽氣抽氣濾膜濾膜離心離心AB2.密度梯度離心法（密度梯度離心法（density gradient） 生物大分子及顆粒的沉降不僅生物大分子及顆粒的沉降不僅決定于它的大小，而且也取決于決定于它的大小，而且也取決于它的密度。顆粒在具有密度梯度它的密度。顆粒在具有密度梯度的介質(zhì)中離心時，質(zhì)量和密度大的介質(zhì)中離心時，質(zhì)量和密度大的顆粒沉降的快，并且每種蛋白的顆粒沉降的快，并且每種蛋白質(zhì)顆粒沉降到與自身密度相等的質(zhì)顆粒沉降到與自身密度相等的介質(zhì)密度梯度時，即停止不前

5、，介質(zhì)密度梯度時，即停止不前，最后各自在離心管中被分離成獨最后各自在離心管中被分離成獨立的區(qū)帶。分成區(qū)帶的樣品可以立的區(qū)帶。分成區(qū)帶的樣品可以在管底刺一個小孔逐滴放出，分在管底刺一個小孔逐滴放出，分步收集。常用的介質(zhì)有步收集。常用的介質(zhì)有蔗糖蔗糖、氯氯化銫等。化銫等。滴加樣品滴加樣品離離心心管管蔗糖密度梯度蔗糖密度梯度蔗糖濃度蔗糖濃度73.3.凝膠過濾凝膠過濾 原理：原理： 凝膠層析也稱為排阻凝膠層析、凝膠過濾和分子凝膠層析也稱為排阻凝膠層析、凝膠過濾和分子篩層析。它是篩層析。它是60 60 年代發(fā)展起來的，利用凝膠把物質(zhì)按分子大年代發(fā)展起來的，利用凝膠把物質(zhì)按分子大小不同進行分離的一種方法。

6、由于被小不同進行分離的一種方法。由于被分離物質(zhì)的分子大小分離物質(zhì)的分子大?。ㄖ睆剑┖托螤畈煌ㄖ睆剑┖托螤畈煌?，洗脫時，大分子物質(zhì)由于直徑大于凝，洗脫時，大分子物質(zhì)由于直徑大于凝膠網(wǎng)孔不能進入凝膠內(nèi)部，只能沿著凝膠顆粒間的孔隙，隨膠網(wǎng)孔不能進入凝膠內(nèi)部，只能沿著凝膠顆粒間的孔隙，隨溶劑向下移動，因此流程短，首先流出層析柱，而小分子物溶劑向下移動，因此流程短，首先流出層析柱，而小分子物質(zhì)，由于直徑小于凝膠網(wǎng)孔，能自由進出膠粒網(wǎng)孔，使之洗質(zhì)，由于直徑小于凝膠網(wǎng)孔，能自由進出膠粒網(wǎng)孔，使之洗脫時流程增長，移動速度慢而后流出層析柱。脫時流程增長，移動速度慢而后流出層析柱。 應用應用 測定分子量測定分子

7、量8分子篩層析原理示意圖分子篩層析原理示意圖分分子子篩篩層層析析與與洗洗脫脫曲曲線線凝膠顆粒凝膠顆粒收收集集蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)管管蛋白質(zhì)混合物蛋白質(zhì)混合物大分子大分子從柱上面加緩沖溶液從柱上面加緩沖溶液小分子小分子洗脫體積（洗脫體積（Ve）凝膠柱凝膠柱大分子大分子小分子小分子Ve1Ve2V0蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)Mr=49,000洗出洗出液中液中的蛋的蛋白質(zhì)白質(zhì)濃度濃度洗脫體積（洗脫體積（mL）未知未知logMr洗脫體積與相對分子質(zhì)量的關系洗脫體積與相對分子質(zhì)量的關系Andrews的經(jīng)驗公式：的經(jīng)驗公式：logMr=K1-K2(Ve/Vo)G-200G-100logMrKav11（二）利用溶解度差別的（二）利

8、用溶解度差別的純化方法純化方法 1.1.等電沉淀和等電沉淀和PHPH控制控制 2. 2.蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析 3. 3.有機溶劑分級分離有機溶劑分級分離 4. 4.溫度對蛋白質(zhì)溶解度的影響溫度對蛋白質(zhì)溶解度的影響1213防止蛋白質(zhì)凝聚沉淀的屏障防止蛋白質(zhì)凝聚沉淀的屏障蛋白質(zhì)周圍的水化層（蛋白質(zhì)周圍的水化層（hydration shell)hydration shell)，使蛋白質(zhì)形成穩(wěn)定使蛋白質(zhì)形成穩(wěn)定的膠體溶液。的膠體溶液。蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)分子間靜電排斥作用。分子間靜電排斥作用。（存在（存在雙電層）蛋白質(zhì)粒子在水溶液中是帶電的，帶電的雙電層）蛋白質(zhì)粒子在水溶液中是帶電的，帶電的原

9、因主要是吸附溶液中的離子或自身基團的電離。原因主要是吸附溶液中的離子或自身基團的電離。蛋白質(zhì)表面的電荷與溶液中反離子的電荷構(gòu)成雙電蛋白質(zhì)表面的電荷與溶液中反離子的電荷構(gòu)成雙電層。層。141.1.等電沉淀和等電沉淀和PHPH控制控制 蛋白質(zhì)處于等電點，其他條件相同時，它的溶解度達蛋白質(zhì)處于等電點，其他條件相同時，它的溶解度達到最低點。到最低點。 在等電點以上或以下的在等電點以上或以下的pHpH時，蛋白質(zhì)分子攜帶同種符時，蛋白質(zhì)分子攜帶同種符號的凈電荷而相互排斥，阻止了單個分子聚集成沉淀，號的凈電荷而相互排斥，阻止了單個分子聚集成沉淀，因此溶解度較大。因此溶解度較大。 不同的蛋白質(zhì)具有不同的等電點

10、不同的蛋白質(zhì)具有不同的等電點15 當中性鹽加入蛋白質(zhì)分散體系時可能出當中性鹽加入蛋白質(zhì)分散體系時可能出現(xiàn)以下兩種情況：現(xiàn)以下兩種情況：（1 1）“鹽溶鹽溶”現(xiàn)象現(xiàn)象(salt-in)(salt-in)低鹽低鹽濃度濃度下，增加蛋白質(zhì)分子間靜電斥力，蛋白下，增加蛋白質(zhì)分子間靜電斥力，蛋白質(zhì)溶解度增大質(zhì)溶解度增大 。（2 2）“鹽析鹽析”現(xiàn)象現(xiàn)象(salt-out)(salt-out)高鹽高鹽濃度濃度下，中和電荷、破壞水化膜，蛋白質(zhì)溶下，中和電荷、破壞水化膜，蛋白質(zhì)溶解度隨之下降解度隨之下降 。2.2.蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析163.3.有機溶劑分級分離有機溶劑分級分離（1 1）有機溶劑

11、可以使蛋白質(zhì)沉淀）有機溶劑可以使蛋白質(zhì)沉淀 主要有乙醇、主要有乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。丙酮、乙酸乙酯等。（2 2）有機溶劑可以破壞水化膜、造成一個低介）有機溶劑可以破壞水化膜、造成一個低介電區(qū)。電區(qū)。（3 3）有分級分離現(xiàn)象）有分級分離現(xiàn)象（4 4）要求對有機溶劑低溫預冷。）要求對有機溶劑低溫預冷。174.4.溫度對蛋白質(zhì)溶解度的影響溫度對蛋白質(zhì)溶解度的影響 在一定溫度范圍內(nèi)，約在一定溫度范圍內(nèi)，約0-400-40之間之間，大部分球狀，大部分球狀蛋白質(zhì)的溶解度隨溫度升高而增加，但也有例外，蛋白質(zhì)的溶解度隨溫度升高而增加，但也有例外，例如人的血紅蛋白從例如人的血紅蛋白從0 0到到2525，溶解度

12、隨溫度上升，溶解度隨溫度上升而降低。而降低。 在在40-5040-50以上開始以上開始變性變性，一般在中性，一般在中性pHpH介質(zhì)中即介質(zhì)中即失去溶解力。失去溶解力。 大多數(shù)蛋白質(zhì)在低溫下比較穩(wěn)定，因此蛋白質(zhì)的大多數(shù)蛋白質(zhì)在低溫下比較穩(wěn)定，因此蛋白質(zhì)的分級分離操作一般都在分級分離操作一般都在0 0 或更低的溫度或更低的溫度下進行。下進行。18（三）根據(jù)電荷不同的純化方法（三）根據(jù)電荷不同的純化方法 1.1.電泳電泳 2. 2.聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳 3. 3.毛細管電泳毛細管電泳 4. 4.等電聚焦等電聚焦 5. 5.層析聚焦層析聚焦 6. 6.離子交換層析離子交換層析191.1

13、.電泳電泳 電泳分離蛋白質(zhì)是根據(jù)蛋白質(zhì)在電泳分離蛋白質(zhì)是根據(jù)蛋白質(zhì)在電場中的遷移的差別電場中的遷移的差別達到分離達到分離目的的。目的的。 蛋白質(zhì)樣品加到一塊預先制好的凝膠介質(zhì)上，只要在凝膠的兩蛋白質(zhì)樣品加到一塊預先制好的凝膠介質(zhì)上，只要在凝膠的兩端加上電場，就可以達到分離蛋白質(zhì)的目的，這樣的電泳稱之端加上電場，就可以達到分離蛋白質(zhì)的目的，這樣的電泳稱之凝膠電泳（凝膠電泳（gel electrophoresisgel electrophoresis）。）。 一般凝膠介質(zhì)中的一般凝膠介質(zhì)中的pHpH被維持在被維持在堿性區(qū)堿性區(qū)，目的是使大多數(shù)蛋白質(zhì)，目的是使大多數(shù)蛋白質(zhì)都帶有負電荷，這樣它們可以向

14、陽極遷移。蛋白質(zhì)的遷移與蛋都帶有負電荷，這樣它們可以向陽極遷移。蛋白質(zhì)的遷移與蛋白質(zhì)的質(zhì)量和帶電荷的多少有關。白質(zhì)的質(zhì)量和帶電荷的多少有關。電電泳泳技技術(shù)術(shù)分分類類垂直板電泳垂直板電泳毛細管電泳毛細管電泳水平板電泳水平板電泳電電泳泳支支持持物物濾紙濾紙凝膠凝膠薄膜薄膜圓盤電泳圓盤電泳212.2.聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳 聚丙烯酰胺凝膠電泳（聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel polyacrylamide gel electrophoresis,electrophoresis,簡稱簡稱PAGEPAGE) )， 它以聚丙烯它以聚丙烯IftIft胺凝膠為支持物，一般

15、制成凝膠柱胺凝膠為支持物，一般制成凝膠柱或凝膠板，凝膠是由相連的二部分組成（小的部或凝膠板，凝膠是由相連的二部分組成（小的部分是分是濃縮膠濃縮膠，大的部分是，大的部分是分離膠分離膠） 這樣這樣, ,電泳時樣品首先在不連續(xù)的兩相間積聚濃縮電泳時樣品首先在不連續(xù)的兩相間積聚濃縮而成很薄的而成很薄的起始區(qū)帶起始區(qū)帶（厚度約為（厚度約為0.1 mm0.1 mm），然后），然后再進行電泳分離。再進行電泳分離。223.3.毛細管電泳毛細管電泳 毛細管電泳又稱毛細管區(qū)帶電泳，它是在毛細毛細管電泳又稱毛細管區(qū)帶電泳，它是在毛細管（管（ 2-75m2-75m）中裝入緩沖液，從其一端注入樣品，）中裝入緩沖液，從其

16、一端注入樣品，在毛細管兩端加高壓直流電實現(xiàn)對樣品的分離，分離在毛細管兩端加高壓直流電實現(xiàn)對樣品的分離，分離后的樣品依次通過設在毛細管一端的檢測器檢出。該后的樣品依次通過設在毛細管一端的檢測器檢出。該法克服了傳統(tǒng)區(qū)帶電泳的熱擴散和樣品擴散的問題，法克服了傳統(tǒng)區(qū)帶電泳的熱擴散和樣品擴散的問題，實現(xiàn)了快速和高效分離。實現(xiàn)了快速和高效分離。 4.4.等電聚焦等電聚焦（isoelectric focusingisoelectric focusing）在一定抗對流介質(zhì)（如凝膠）在一定抗對流介質(zhì)（如凝膠）中加入兩性電解質(zhì)載體，當直中加入兩性電解質(zhì)載體，當直流電通過時，便形成一個由陽流電通過時，便形成一個由陽

17、極到陰極極到陰極pHpH值逐步上升的梯度值逐步上升的梯度。兩性化合物在此電泳過程中。兩性化合物在此電泳過程中，就被濃集在與其，就被濃集在與其pIpI相等的相等的pHpH區(qū)域，從而使不同化合物能按區(qū)域，從而使不同化合物能按其各自等電點得到分離。其各自等電點得到分離。pH10pH3pI1= pH8pI2= pH7pI3= pH5-+線線性性梯梯度度5.5.聚焦層析（聚焦層析（ChromatofocusingChromatofocusing） 該法是在等電點聚焦方法基礎上發(fā)展起來的，其分離純化蛋白質(zhì)的依據(jù)該法是在等電點聚焦方法基礎上發(fā)展起來的，其分離純化蛋白質(zhì)的依據(jù)是等電點的差異和離子交換行為。蛋白

18、質(zhì)按其等電點在是等電點的差異和離子交換行為。蛋白質(zhì)按其等電點在pH梯度環(huán)境中進行排梯度環(huán)境中進行排列的過程叫做聚焦效應。列的過程叫做聚焦效應。 pH梯度的形成梯度的形成(由多緩沖劑和多緩沖交換劑形成由多緩沖劑和多緩沖交換劑形成)是是聚焦效應的先決條件，如果一種蛋白質(zhì)加到已形成聚焦效應的先決條件，如果一種蛋白質(zhì)加到已形成pH梯度的層析柱上時梯度的層析柱上時,由于由于洗脫液的連續(xù)流動，蛋白質(zhì)將迅速地洗脫液的連續(xù)流動，蛋白質(zhì)將迅速地 遷移到與它等電點相同的遷移到與它等電點相同的pH處。從此位處。從此位置開始，該蛋白質(zhì)將以緩慢的速度進行吸附、解吸附，直到在等電點置開始，該蛋白質(zhì)將以緩慢的速度進行吸附、

19、解吸附，直到在等電點pH時被時被洗出。在聚焦層析過程中洗出。在聚焦層析過程中,一種樣品分次加入時，只要先加入者尚未洗出一種樣品分次加入時，只要先加入者尚未洗出,并且并且有一定的時間進行聚焦有一定的時間進行聚焦,剩余樣品還可以加到柱上剩余樣品還可以加到柱上,其聚焦過程都能順利完成。其聚焦過程都能順利完成。pH梯度溶液的形成示意圖梯度溶液的形成示意圖蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)1（pI=7）蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)2（pI=8）流速流速移動速率移動速率層析時的聚焦效應示意圖層析時的聚焦效應示意圖25 離子交換法是離子交換法是通過帶電的溶通過帶電的溶質(zhì)分子與離子質(zhì)分子與離子交換劑中可交交換劑中可交換的離子進行換的離子進行交換而

20、達到分交換而達到分離純化的方法。離純化的方法。6 6 離子交換層析原理離子交換層析原理26開始開始吸附吸附解吸解吸解吸結(jié)束解吸結(jié)束再生再生樣樣品品解解吸吸劑劑再再生生劑劑-+-常用的陽離子交換劑常用的陽離子交換劑離子交換劑離子交換劑 可電離基團可電離基團 可電離基團結(jié)構(gòu)可電離基團結(jié)構(gòu)CM-纖維素（弱酸型）纖維素（弱酸型） 羧甲基羧甲基P-纖維素（中強弱酸型）纖維素（中強弱酸型） 磷酸基磷酸基SE-纖維素（強弱酸型）纖維素（強弱酸型） 磺乙基磺乙基SP-纖維素（強弱酸型）纖維素（強弱酸型） 磺丙基磺丙基常用的陰離子交換劑常用的陰離子交換劑AE-纖維素（弱減型）纖維素（弱減型） 氨基乙基氨基乙基離

21、子交換劑離子交換劑 可電離基團可電離基團 可電離基團結(jié)構(gòu)可電離基團結(jié)構(gòu)PAB-纖維素（弱減型）纖維素（弱減型） 對氨基苯甲酸對氨基苯甲酸DEAE-纖維素纖維素 二乙基氨基乙基二乙基氨基乙基DEAE -Sephadex 二乙基氨基乙基二乙基氨基乙基DEAE -纖維素（強減型）纖維素（強減型） 二乙基氨基乙基二乙基氨基乙基QAE-纖維素（強減型）纖維素（強減型）二乙基（二乙基（2-羥丙羥丙基）基） -氨基乙基氨基乙基（中弱減型）（中弱減型）（中弱減型）（中弱減型）29（四）利用選擇性吸附的純化方法 1.羥磷灰石層析 2.疏水作用層析 某些稱為吸附劑的固體物質(zhì)具有吸附能力，能夠?qū)⑵淠承┓Q為吸附劑的固

22、體物質(zhì)具有吸附能力，能夠?qū)⑵渌N類的分子吸附在自己的表面，吸附力的強弱因被吸他種類的分子吸附在自己的表面，吸附力的強弱因被吸物質(zhì)的性質(zhì)而定。物質(zhì)的性質(zhì)而定。吸附過程涉及范德華相互作用和氫鍵這些非離子吸引吸附過程涉及范德華相互作用和氫鍵這些非離子吸引力力。典型的吸附劑有硅膠、氧化鋁和活性炭等。典型的吸附劑有硅膠、氧化鋁和活性炭等。301.羥磷灰石層析 吸附劑羥磷灰石即結(jié)晶磷酸鈣，它用于分離吸附劑羥磷灰石即結(jié)晶磷酸鈣，它用于分離蛋白質(zhì)或核酸。蛋白質(zhì)或核酸。 據(jù)推測，蛋白質(zhì)中帶負電基團與羥磷灰石晶據(jù)推測，蛋白質(zhì)中帶負電基團與羥磷灰石晶體表面的鈣離子結(jié)合，而帶正電基團與磷酸體表面的鈣離子結(jié)合，而帶正電

23、基團與磷酸基相互作用。基相互作用。 羥磷灰石層析最重要的用途之一是把單鏈羥磷灰石層析最重要的用途之一是把單鏈DNADNA和雙鏈和雙鏈DNADNA分開。分開。312.疏水作用層析 疏水作用層析就是根據(jù)蛋白質(zhì)表面的疏水性差疏水作用層析就是根據(jù)蛋白質(zhì)表面的疏水性差別發(fā)展起來的一種純化技術(shù)。別發(fā)展起來的一種純化技術(shù)。 連接在支持介質(zhì)（如瓊脂糖）上的疏水基團與連接在支持介質(zhì)（如瓊脂糖）上的疏水基團與蛋白質(zhì)表面上暴露的疏水基團結(jié)合。市售的疏蛋白質(zhì)表面上暴露的疏水基團結(jié)合。市售的疏水吸附劑有苯基瓊脂糖、辛基瓊脂糖等。水吸附劑有苯基瓊脂糖、辛基瓊脂糖等。 為使吸附達到最大，可將蛋白質(zhì)樣品的為使吸附達到最大，可

24、將蛋白質(zhì)樣品的pHpH調(diào)至調(diào)至等電點附近。等電點附近。32（五）利用配體的特異性親和力的純化方法 親和層析是利用親和層析是利用蛋白質(zhì)分子對其配體分子蛋白質(zhì)分子對其配體分子特有的識特有的識別能力，也即生物學親和力，建立起來的一種有效別能力，也即生物學親和力，建立起來的一種有效的純化方法。的純化方法。 親和層析經(jīng)常只需要經(jīng)過一步的處理即可將某種所親和層析經(jīng)常只需要經(jīng)過一步的處理即可將某種所需蛋白質(zhì)從復雜的混合物中分離出來，并且純度相需蛋白質(zhì)從復雜的混合物中分離出來，并且純度相當高。當高。 親和層析最先用于親和層析最先用于酶的純化酶的純化并從中得到發(fā)展，并從中得到發(fā)展，親和層析（親和層析（affiu

25、ity chromatography）應用應用 分離純化酶、分離純化酶、 抗原、抗體抗原、抗體 分離純化核酸分離純化核酸 研究酶的結(jié)構(gòu)與功能研究酶的結(jié)構(gòu)與功能+待純化分子待純化分子配體配體a. 理論依據(jù)理論依據(jù)：待純化分子和配體間具有親和性：待純化分子和配體間具有親和性+基質(zhì)基質(zhì)b. 活性基質(zhì)與配體結(jié)合產(chǎn)生親和吸附劑活性基質(zhì)與配體結(jié)合產(chǎn)生親和吸附劑+雜質(zhì)雜質(zhì)c. 待純化分子與親和吸附劑結(jié)合，與雜質(zhì)分離待純化分子與親和吸附劑結(jié)合，與雜質(zhì)分離+d. 偶聯(lián)復合物經(jīng)解離后，得到純的待純化分子偶聯(lián)復合物經(jīng)解離后，得到純的待純化分子原理原理：基質(zhì)基質(zhì) 纖維素、聚丙烯酰胺凝膠、纖維素、聚丙烯酰胺凝膠、 sepharose、sephadex