Agilent1100LC現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)教材-print

1、Agilent 1100 LC現(xiàn)場(chǎng)培訓(xùn)教材基本操作步驟: (一)、開機(jī)： 1、打開計(jì)算機(jī),進(jìn)入Windows NT （或Windows 2000）畫面,并運(yùn)行Bootp Server程序。 2、打開 1100 LC 各模塊電源。 3、待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與1100LC 通訊，進(jìn)入的工作站畫面如下所示。 4、從“View”菜單中選擇“Method and Run control”畫面, 單擊”View”菜單中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Samp

2、ling diagram”，使其命令前有“”標(biāo)志，來調(diào)用所需的界面。 5、把流動(dòng)相放入溶劑瓶中。 6、打開Purge閥。 7、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入泵編輯畫面。 8 、設(shè)Flow：5ml/min，單擊OK。 9、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump control選項(xiàng)，選中On，單擊OK，則系統(tǒng)開始Purge，直到管線內(nèi)（由溶劑瓶到泵入口）無氣泡為止,切換通道繼續(xù)Purge，直到所有要用通道無氣泡為止。 10、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Pump Control選項(xiàng)，選中Off，單擊Ok關(guān)泵， 關(guān)閉Purge valve。

3、 11、單擊Pump圖標(biāo)，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊Setup pump選項(xiàng)，進(jìn)入Pump編輯畫面，設(shè)Flow：1.0ml/min。 12、單擊泵下面的瓶圖標(biāo)，如圖所示（以二元泵為例），輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積。單擊Ok。（二）數(shù)據(jù)采集方法編輯： 1、開始編輯完整方法： 從“Method”菜單中選擇“Edit entire method” 項(xiàng)，如上圖所示選中除“Data analysis ”外的三項(xiàng)，單擊Ok，進(jìn)入下一畫面。 2、方法信息： 在“Method Comments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。 單擊Ok 進(jìn)入下一畫面。3、泵參數(shù)設(shè)定：（以二元泵為例）

4、在“Flow”處輸入流量,如1ml/min，在“Solvent B”處輸入70.0,(A=100-B) ,也可Insert 一行”Timetable” ,編輯梯度。在“Pressure Limits Max”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。 單擊Ok進(jìn)入下一畫面。4、自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定: 選擇合適的進(jìn)樣方式, 如圖所示，進(jìn)樣體積 1.0ul ,洗瓶位置為6號(hào)?！癝tandard Injection”-只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無洗針功能?！癐njection with Needle Wash”-可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會(huì)在洗瓶中洗針?！癠se injector

5、 program”-可以點(diǎn)擊Edit 鍵進(jìn)行進(jìn)樣程序編輯。 點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面。5、柱溫箱參數(shù)設(shè)定: 在”Temperature”下面的方框內(nèi)輸入所需溫度,并選中它,點(diǎn)擊”more” 鍵,如圖所示,選中”Same as left”-使柱溫箱的溫度左右一致。 點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫面。6、VWD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: 在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測(cè)波長(zhǎng),如254nm, 在”Peak width (Response time)”下方點(diǎn)擊下拉式三角框,選擇合適的響應(yīng)時(shí)間, 如0.1min (2s)。 在Timetable 中可以“Insert”一行，輸入隨時(shí)間切換的波長(zhǎng)，如1min ，

6、波長(zhǎng)=300nm。點(diǎn)擊ok進(jìn)入下一畫面。 7、DAD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定: 檢測(cè)波長(zhǎng): 254nm,BW=30nm, 參比波長(zhǎng)=350nm,BW=100nm; 檢測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇最大吸收處的波長(zhǎng)。樣品帶寬BW： 一般選擇最大吸收值一半處的整個(gè)寬度。參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無吸收或低吸收區(qū)域 。參比帶寬BW：至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等，許多情況下用100nm作為缺省值。Peak width（Response time）：其值盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬。Slit狹縫窄，光譜分辨率高；寬時(shí)，噪音低。同時(shí)可以輸入采集光譜方式，步長(zhǎng)，范圍，閾值。選中所用的燈。 點(diǎn)擊Ok進(jìn)入下一畫面。8、 在“ Run

7、 time checklist ”中選中“Data acquisition”，單擊Ok。9、 單擊“Method”菜單，選中“Save method as”，輸入一方法名，如“test”，單擊Ok。10、 從菜單 “View”中選中”O(jiān)nline signal” ,選中Windows 1,然后單擊Change 鈕,將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中,點(diǎn)擊Ok.(如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào),則重復(fù)12,選中Windows 2)。11、 從“Run control ”菜單中選擇“Sample info”選項(xiàng)，如上圖所示，輸入操作者名稱，在“Data file ”中選擇“Manual”或“Prefix”。區(qū)別:

8、 Manual-每次做樣之前必須給出新名字,否則儀器會(huì)將上次的數(shù)據(jù)覆蓋掉。 Prefix在Prefix 框中輸入前綴，在Counter 框中輸入計(jì)數(shù)器的起始位，儀器會(huì)自動(dòng)命名，如vwd0001，vwd0002。12、 從Instrument 菜單選擇System on。13、 等儀器Ready，基線平穩(wěn)，從Method菜單中選擇“Run method”，進(jìn)樣。（DAD, VWD色譜圖如下所示：） （三）、數(shù)據(jù)分析方法編輯:1、 從“View”菜單中，單擊“Data analysis”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。2、 從“File”菜單選擇“Load signal”，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。單擊O

9、k。3、 做譜圖優(yōu)化,從“Graphics”菜單中選擇“Signal options”選項(xiàng)，。從Ranges中選擇Auto scale及合適的顯示時(shí)間，單擊ok,或選擇”Use Ranges” 調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。4、積分: (1)、從“Integration”中選擇 “Auto integrate”,如積分結(jié)果不理想,再?gòu)牟藛沃羞x擇“Integration Events”選項(xiàng)，選擇合適的Slope sensitivity，Peak width，Area reject，Height reject。 (2)、從“Integration”菜單中選擇“Integrate”選項(xiàng)， 則

10、數(shù)據(jù)被積分。 (3)、如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。 (4)、單擊左邊“”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。 5、打印報(bào)告: (1)、從“Report”菜單中選擇“Specify report”選項(xiàng)，進(jìn)入如上畫面。(2)、單擊“Quantitative Results”框中Calculate右側(cè)的黑三角，選中Percent（面積百分比），其它選項(xiàng)不變。(3)、單擊Ok.(4)、從“Report”菜單中選擇“Print report”，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則單擊Report 底部的“Print”鈕。(四)、關(guān)機(jī): 關(guān)機(jī)前，用沖洗好儀器和色譜柱，用酸或堿的

11、流動(dòng)相用純水沖洗干凈管路。 退出化學(xué)工作站，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)（用shut down關(guān)）。 關(guān)掉Agilent 1100電源開關(guān)。(五)、Agilent 1100 LC維護(hù)保養(yǎng)：1、 色譜柱長(zhǎng)時(shí)間不用，存放時(shí)，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死（如ACN適于反相色譜柱，正相色譜柱用相應(yīng)的有機(jī)相）2、 對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，當(dāng)使用緩沖溶液時(shí)，要用水沖洗進(jìn)樣口，同時(shí)搬動(dòng)進(jìn)樣閥數(shù)次，每次數(shù)毫升。 *3、流動(dòng)相使用前必須過濾，不要使用多日存放的蒸餾水（易長(zhǎng)菌）。 *4、帶seal-wash的 1100，要配制90%水+10%異丙醇，以每分23滴的速度虹吸排出，溶劑不能干涸。 5、其它主意事項(xiàng)見說明書，或由現(xiàn)場(chǎng)工程

12、師介紹。維護(hù)知識(shí)問答1、 為什么溶劑和樣品要過濾? 溶劑和樣品過濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。樣品過濾頭的類型：30mm內(nèi)徑：適用于大進(jìn)樣量的過濾，由0.2m和0.45m兩種規(guī)格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。處理樣品體積少于50l。13mm內(nèi)徑：適用于范圍廣的過濾，由0.2m和0.45m兩種規(guī)格,材料為纖維素。3mm內(nèi)徑：適用于小進(jìn)樣量的過濾，由0.2m

13、和0.45m兩種規(guī)格。處理樣品體積為7l。濾膜類型：聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無任何可溶物。醋酸纖維濾膜： 不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶液，推薦 用于蛋白質(zhì)和其相關(guān)樣品。尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可用于強(qiáng)酸， 70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性樣品和有機(jī)溶劑。2、 為什么HPLC用緩沖鹽時(shí)要加在線Seal-wash選項(xiàng)？ HPLC用緩沖鹽時(shí),由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細(xì)小鹽粒非常堅(jiān)硬,它附著在藍(lán)寶石活塞桿上,隨著藍(lán)寶石活塞桿的往復(fù)運(yùn)動(dòng),容易產(chǎn)生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障

14、現(xiàn)象。在線Seal-wash選項(xiàng)能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結(jié)晶。緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0.1mol時(shí),必須使用該在線沖洗選項(xiàng).清洗液配制: 90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長(zhǎng)和減小水的表面張力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。3、 為什么Agilent 1100LC的流動(dòng)相管路非常細(xì)? 在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小45個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣器、柱接頭、連接管、檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起

15、色譜峰的展寬，而使柱效降低 。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，Agilent 1100LC 使用加工工藝難度高的毛細(xì)管線作為流動(dòng)相管路。毛細(xì)管線分類：0.17mm內(nèi)徑 -綠色 ;0.12mm內(nèi)徑-紅色。 PEEK 管線：內(nèi)徑 -0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。 毛細(xì)管線優(yōu)點(diǎn): 柔韌性好. *Agilent 公司同時(shí)備有1/16in 的粗外徑毛細(xì)管線,適用于不同習(xí)慣的用戶 ,優(yōu)點(diǎn)是剛性好,但柔韌性差一些。 4、 流動(dòng)相使用前為什么要脫氣？ 流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理 ，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測(cè)器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)

16、生氣泡。氣泡會(huì)增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能會(huì)造成熒光猝滅。常用的脫氣方法比較： 氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。超聲脫氣法：流動(dòng)相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10- 15min，此法效果最差。在線真空脫氣法：Agilent1100LC真空脫機(jī)利用膜滲透技術(shù)， 在線脫氣，智能控制，無需額外操作，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。5、如

17、何防止溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后的處理？ 溶劑的質(zhì)量或污染以及藻類的生長(zhǎng)會(huì)堵塞溶劑過濾器，從而影響泵的運(yùn)行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液（PH=47）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑過濾器的堵塞。A：請(qǐng)嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過濾。B：請(qǐng)勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液C：如果應(yīng)用許可，可在溶劑中加入0.0001-0.001M的疊氮化鈉. D:在溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空氣。E：避免使溶劑瓶暴露在直射陽(yáng)光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。堵塞后的處理法方法：將過濾頭從組件中取下，在濃硝酸（35%）中浸泡1h，然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。6、 Ag

18、ilent 1100LC泵如何維護(hù)？Agilent 1100LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動(dòng)、流量準(zhǔn)確的流動(dòng)相，及時(shí)合理的維護(hù)非常重要。A：流動(dòng)相使用前請(qǐng)必須脫氣、過濾。B：使用緩沖鹽時(shí)，要加在線Seal-wash選項(xiàng)。C：關(guān)機(jī)前，用 100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如甲醇），然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗 D：及時(shí)更換Purge Valve內(nèi)的過濾芯。（當(dāng)打開Purge Valve時(shí)，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵）。E：使用合適的密封圈。7、 如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？ 泵頭活塞的標(biāo)準(zhǔn)密封圈能適合于大多數(shù)應(yīng)用，但使用正相溶劑（如

19、正己烷），不適合使用標(biāo)準(zhǔn)活塞密封圈，特別是長(zhǎng)時(shí)間使用時(shí)，需更換另一種不同的密封圈，我們建議使用聚四氟乙烯密封圈。（p/n0905-1420 2/pk）*注意：聚四氟乙烯密封圈的壓力范圍為：0200bar；建議在泵的壓力限制中，將最大壓力設(shè)為200bar。8、 使用梯度比例發(fā)時(shí)要注意那些事項(xiàng)？ 當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時(shí)，鹽溶液能與有機(jī)溶劑溶液完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點(diǎn)，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機(jī)溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過來，鹽可能落在有機(jī)溶劑中，出現(xiàn)問題。強(qiáng)烈建議：當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機(jī)溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。9、 在線真空脫氣機(jī)使用要注意那些事項(xiàng)？ 一般來說，Agilent 1100LC 的真空脫氣機(jī)無需過多維護(hù)，只需注意幾個(gè)注意事項(xiàng)就可以了。A：第一次使用，要用隨儀器附帶的注射器抽滿脫氣機(jī)腔體；更換不同類型的溶劑時(shí)，要先抽空，再抽滿。B：不用的通道要充滿溶劑或密閉起來。10、 更換色譜柱時(shí)要注意什么事項(xiàng)?在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子