眼絡(luò)通沖劑研究論文

1、眼絡(luò)通沖劑研究論文 1儀器與試藥 1.1儀器日本島津LC10ATvp高效液相色譜儀、SPD10Av紫外檢測(cè)器；7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥（20l定量管），10l微量注射器；HS色譜數(shù)據(jù)工作站V4.0+（杭州英譜）；CQ250超聲波清洗器。 1.2試劑與藥材葛根、川芎、三棱等藥材，CD（上海伯奧生物科技有限公司），葛根素對(duì)照品（供含量測(cè)定用）、川芎對(duì)照藥材均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)分別為752200801和091820007；薄層層析硅膠G（浙江雁蕩山試劑廠），甲醇（色譜純），正己烷、乙酸乙酯、乙醚及石油醚均為分析純，水為蒸餾水。 2方法與結(jié)果 2.1眼絡(luò)通沖劑的制備將處方量飲片打成粗粒，混

2、合均勻，加10倍水量，按審批標(biāo)準(zhǔn)制劑工藝水煎煮法提取2次，第1次1.5h，第2次1h，提取液合并，靜置，取上清液，濃縮至比重1.25以上的浸膏。加入人工麝香、少量糊精及矯味劑，混合均勻，用70%乙醇適量制軟材，過(guò)10目篩制粒，50低溫烘干，分裝，規(guī)格為15g/袋。如上制作三批，批號(hào)分別為：080310、080320、080401。 2.2川芎定性鑒別 2.2.1供試品溶液的制備取本品細(xì)粉4g，加無(wú)水乙醇5ml，搖勻，再加入乙醚30ml，加熱回流1h，放冷，濾過(guò)，取濾液揮干，加乙酸乙酯2ml使溶解，作為供試品溶液。另取缺川芎的陰性對(duì)照樣品4g，同法制成陰性對(duì)照溶液。 2.2.2對(duì)照藥材溶液的制備

3、取川芎對(duì)照藥材1g，加乙醚30ml，加熱回流1h，同法制成對(duì)照藥材溶液。 2.2.3薄層層析板的涂鋪取硅膠G3.5g，置研缽中，加水12ml，研磨均勻，鋪板1020cm2薄板一塊，晾干，于110烘箱中活化30min，置干燥器中備用。 2.2.4薄層色譜法照薄層色譜法（中國(guó)藥典2005年版一部附錄）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各2l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（9：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)12cm，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，結(jié)果供試品色譜圖中，在與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，Rf=0.40，陰性樣品無(wú)此斑點(diǎn)。 2.3三棱定性鑒別 2.3.1供

4、試品溶液的制備取本品細(xì)粉4g，加無(wú)水乙醇5ml，搖勻，再加入乙醚30ml，50水浴加熱回流1，放冷，濾過(guò)，取濾液置40水浴上濃縮至約2ml，作為供試品溶液。另取缺三棱的陰性對(duì)照樣品4g，同法制成陰性對(duì)照溶液。 2.3.2對(duì)照藥材溶液的制備取三棱對(duì)照藥材2g，加乙醚30ml，加熱回流1h，同法制成對(duì)照藥材溶液。 2.3.3薄層層析板的涂鋪取硅膠G3.5g，置研缽中，加0.6%羧甲基纖維素鈉溶液12ml，研磨均勻，鋪板1020cm2薄板一塊，晾干，于110烘箱中活化30min，置干燥器中備用。 2.3.4薄層色譜法照薄層色譜法（中國(guó)藥典2005年版一部附錄）試驗(yàn)，吸取對(duì)照藥材溶液5l，供試品溶液與

5、陰性對(duì)照溶液各10l，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯（173）為展開(kāi)劑，展開(kāi)12cm，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視，結(jié)果供試品色譜圖中，在與對(duì)照藥材色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的亮藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，Rf=0.45，陰性對(duì)照樣品無(wú)此斑點(diǎn)。 2.4葛根素含量測(cè)定 2.4.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以Kromasil100-5C18（4.6mm250mm，5m）為色譜柱；甲醇-水（30：70）為流動(dòng)相；流速1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm；進(jìn)樣量為5l，柱溫為室溫。在此條件下，樣品色譜圖中葛根素與其他相關(guān)峰均能達(dá)到基線分離，保留時(shí)間為16.4

6、min，葛根素峰理論板數(shù)應(yīng)不低于3000，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于1.5。陰性樣品色譜圖表明，處方中其他幾味中藥對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。 2.4.2對(duì)照品純度檢查取每1ml含葛根素1.29mg的70%甲醇溶液，進(jìn)樣10l，在本實(shí)驗(yàn)條件下，未見(jiàn)雜質(zhì)峰，按面積歸一法計(jì)算純度為100%。 2.4.3線性關(guān)系精密稱(chēng)取經(jīng)60減壓干燥至恒重的葛根素對(duì)照品12.98mg，置10ml量瓶中，加70%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置10ml量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，按本文給定的色譜條件，各進(jìn)樣5l，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值Y與對(duì)照品進(jìn)樣量X（g

7、）進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 Y=4.526106X+5.464104r=0.9999 結(jié)果表明：葛根素進(jìn)樣量在0.060.65g范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。因此，在線性范圍內(nèi)可采用外標(biāo)一點(diǎn)法定量。 2.4.4精密度和重復(fù)性試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，求得葛根素峰面積的RSD為0.77%。另稱(chēng)取同一批號(hào)（080310）樣品5份，每份約0.5g，分別按“2.4.9”項(xiàng)下方法制備樣品溶液進(jìn)樣測(cè)定含量，求得含量的RSD為0.51%（n=5）。 2.4.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液1份，在0、2、8、24、48h分別按“2.4.9”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定含量，結(jié)果表明在48h內(nèi)供試品溶液是穩(wěn)定的。

8、2.4.6日內(nèi)和日間精密度取同一份對(duì)照品溶液，在日內(nèi)每隔2h取樣測(cè)定1次，連續(xù)5次，求得峰面積的RSD為0.85%（n=5）；另取同一批號(hào)樣品，每天取樣按“2.4.9”項(xiàng)下方法測(cè)定含量，連續(xù)測(cè)定5d，求得含量的RSD為0.48%（n=5）。 2.4.7提取條件選擇 2.4.7.1提取溶劑選擇文獻(xiàn)報(bào)道12多用甲醇水提取樣品中葛根素，故考察不同濃度甲醇對(duì)提取的影響，稱(chēng)取樣品5份，每份0.5g，置100ml量瓶中，分別加50%、60%、70%、80%甲醇約150ml，超聲處理30min，按“2.4.9”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定含量，根據(jù)測(cè)定結(jié)果，確定用70%甲醇作溶劑。 2.4.7.2溶劑體積選擇精密稱(chēng)取本

9、品3份，每份0.5g，置200ml量瓶中，分別加70%甲醇80、120、180ml，搖勻，超聲溶解30min，按“2.4.9”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定含量，根據(jù)測(cè)定結(jié)果，本法確定加入溶劑體積約120ml。 2.4.7.3提取時(shí)間的選擇精密稱(chēng)取本品5份，每份2.0g，置200ml量瓶中，各加入70%甲醇約180ml，分別超聲溶解10、20、30、40、50min，按“2.4.9”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定含量，結(jié)果表明，超聲處理30min含量已不再增加，故確定超聲時(shí)間為30min。 2.4.8加樣回收率測(cè)定精密稱(chēng)取已知含量樣品9份，每份0.25g，置50ml量瓶中，分別精密加入葛根素對(duì)照品溶液（取12.44mg+

10、70%甲醇20ml）1，2，3ml（0.622，1.244，1.866mg），再各加入70%甲醇至40ml，超聲溶解30min，按“2.4.9”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定含量，計(jì)算回收率，得高、中、低3個(gè)濃度平均加樣回收率分別為101.2%、101.1%、101.4%，RSD分別為1.1%、0.94%、0.41%（n=3）。 2.4.9樣品測(cè)定取本品約20g,研細(xì),再精密稱(chēng)取細(xì)粉約0.5g，置200ml量瓶中，加70%甲醇120ml，超聲溶解30min，放冷，加70%甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取葛根素對(duì)照品用70%甲醇配制成濃度約為60g/ml的對(duì)照品溶液,各進(jìn)樣5l，記錄色譜圖

11、，按外標(biāo)法計(jì)算葛根素含量，結(jié)果見(jiàn)表1。 表1眼絡(luò)通顆粒樣品測(cè)定結(jié)果（略） 3討論 本制劑處方中川芎、三棱兩味中藥均含有揮發(fā)油，按標(biāo)準(zhǔn)制劑工藝采用水煎煮提取、再濃縮制粒方法，其中的揮發(fā)油成分損失較大，影響療效，且自擬質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中制定的川芎揮發(fā)油定性鑒別為將樣品溶液直接點(diǎn)樣于濾紙上，置紫外光燈（365nm）下觀察，顯亮藍(lán)色熒光。經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，該方法受到樣品中相關(guān)組分干擾，熒光斑點(diǎn)不明顯，缺乏專(zhuān)屬性。因此參照中國(guó)藥典（2005版）一部建立了川芎揮發(fā)油的薄層色譜鑒別方法，展開(kāi)劑采用正己烷-乙酸乙酯（91）可獲得滿意結(jié)果。參照文獻(xiàn)3建立了三棱揮發(fā)油的薄層色譜鑒別方法，展開(kāi)劑采用石油醚-乙酸乙酯（17：3）可

12、獲得滿意結(jié)果。 經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用不同溶劑提取葛根，在反相色譜柱上可得到不同的色譜圖，主要表現(xiàn)在水煎煮提取葛根時(shí)，在色譜圖上可分離到葛根素峰兩個(gè)相關(guān)組分峰，葛根素峰與相關(guān)峰之間分離度良好。本文針對(duì)用醇提取葛根工藝制備的樣品，建立的色譜條件能較好地分離樣品中葛根素與相關(guān)組分峰，適用樣品中葛根素的分離測(cè)定。三批樣品測(cè)定結(jié)果表明，葛根素含量在5.906.78mg/g之間，考慮到不同來(lái)源葛根其葛根素含量差異較大，暫定本品葛根素含量限度應(yīng)不低于4.5mg/g。 【參考文獻(xiàn)】 1黃亞非.采用高效液相色譜法測(cè)定心脈通口服液中葛根素的含量J.中國(guó)中藥雜志，2001，26（11）：760. 2向大雄.離子對(duì)色譜法測(cè)

13、定心腦安顆粒劑中葛根素含量J.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002，22（5）：261. 3伍月紅.三棱與莪術(shù)的比較鑒別J.廣東藥學(xué)，1994，4（4）：25. 【摘要】目的研究眼絡(luò)通沖劑的定性和定量質(zhì)控指標(biāo)。方法采用硅膠G薄層色譜法對(duì)沖劑中兩種主要成分川芎和三棱進(jìn)行定性鑒別；用RPHPLC法對(duì)葛根素進(jìn)行含量測(cè)定，采用Kromasil1005C18（4.6mm250mm，5m）為色譜柱，甲醇-水（30:70）作流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。結(jié)果葛根素進(jìn)樣量在0.060.65g的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，日內(nèi)、日間精密度RSD分別為0.85%和0.48%（n=5）。得高、中、低3個(gè)濃度平均加樣回收率（n=