4天美公司LC2000高效液相色譜儀水行業(yè)

1、上海天美科學(xué)儀器公司液相歷史現(xiàn)狀簡(jiǎn)介液相歷史現(xiàn)狀簡(jiǎn)介液相色譜的雛形液相色譜的雛形 薄層色譜薄層色譜經(jīng)典的液相色譜制備色譜的雛形制備色譜的雛形2、1906年，俄國(guó)植物學(xué)家茨年，俄國(guó)植物學(xué)家茨維特使用圖所示的裝置分離維特使用圖所示的裝置分離綠葉素，柱管是采用碳酸鈣，綠葉素，柱管是采用碳酸鈣，溶劑加在上端，在地球引力溶劑加在上端，在地球引力的作用下遷移，而組分的檢的作用下遷移，而組分的檢測(cè)則依靠肉眼的觀察。測(cè)則依靠肉眼的觀察。氣相色譜理論的引入第一臺(tái)液相色譜的誕生液相色譜的現(xiàn)狀的重要分析方法。1、食品安全、藥品安全、環(huán)境衛(wèi)生、生命科學(xué)等都需要液相色譜2、液相色譜占全世界分析儀器市場(chǎng)銷售總額近20%，

2、而且每年按10%左右的增長(zhǎng)率穩(wěn)步上升。3、液相色譜的發(fā)展朝著更加自動(dòng)化，智能化、和其它儀器聯(lián)用技術(shù)方向發(fā)展，比如液相和質(zhì)譜聯(lián)用，液相和紅外聯(lián)用，以利于更快速、更準(zhǔn)確的定性、定量分析。outinabcdlock off檢測(cè)檢測(cè)器器!belock off自自動(dòng)進(jìn)樣動(dòng)進(jìn)樣器器lock off溶溶劑劑箱箱高高壓泵單壓泵單元元液相色譜整體及概念液相色譜整體及概念分析柱分析柱六通閥六通閥檢測(cè)器檢測(cè)器廢液瓶廢液瓶保護(hù)柱保護(hù)柱流動(dòng)相在線脫氣比例電磁閥輸液泵輸液泵排放閥混合器液相色譜的流程圖梯度篇液相色譜的基本概念（一）液相色譜的基本概念（一）液相色譜的叫法一、液相色譜和氣相色譜的區(qū)別分析對(duì)象分離的形式液相色譜

3、氣相色譜樣品形式 主要是通過(guò)色譜柱的不同極性來(lái)進(jìn)行分離，從非極性到中等極性，再到強(qiáng)極性，做一類樣品需要一根專用的色譜柱，所以有很多的色譜柱，使用成本較高。分析對(duì)象固定相區(qū)別出峰順序等度模式梯度模式lock off!belock offoutinabcdoutinabcdlock off溶溶劑劑箱箱檢測(cè)檢測(cè)器器柱溫箱柱溫箱自自動(dòng)進(jìn)樣動(dòng)進(jìn)樣器器泵泵2 泵泵 1outinabcdlock off檢測(cè)檢測(cè)器器!belock off自自動(dòng)進(jìn)樣動(dòng)進(jìn)樣器器lock off溶溶劑劑箱箱高高壓泵單壓泵單元元高壓梯度低壓梯度高壓梯度lock off!belock offoutinabcdoutinabcdlock

4、 off溶溶劑劑箱箱檢測(cè)檢測(cè)器器柱溫箱柱溫箱自自動(dòng)進(jìn)樣動(dòng)進(jìn)樣器器泵泵2 泵泵 1工作過(guò)程outinabcdlock off檢測(cè)檢測(cè)器器!belock off自自動(dòng)進(jìn)樣動(dòng)進(jìn)樣器器lock off溶溶劑劑箱箱高高壓泵單壓泵單元元低壓梯度工作過(guò)程優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)液相色譜的關(guān)鍵技術(shù)液相色譜的關(guān)鍵技術(shù)高壓輸液泵高壓輸液泵恒流泵恒流泵恒壓泵恒壓泵注射型泵注射型泵往復(fù)型泵往復(fù)型泵雙泵頭往復(fù)雙泵頭往復(fù)式柱塞泵式柱塞泵雙柱塞往復(fù)雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵式串聯(lián)泵液相色譜發(fā)展的瓶頸-泵是關(guān)鍵泵體材料耐腐蝕泵體材料耐腐蝕泵腔的體積要泵腔的體積要小，以便快小，以便快速更換溶劑速更換溶劑能在高壓下連續(xù)能在高壓下連續(xù)工作工作, ,耐壓耐

5、壓40-40-50mpa. cm50mpa. cm2 2壓力平穩(wěn)，無(wú)壓力平穩(wěn)，無(wú)脈沖脈沖高壓輸液泵高壓輸液泵輸出流量穩(wěn)定，輸出流量穩(wěn)定，重復(fù)性高重復(fù)性高, ,輸出輸出流量范圍寬流量范圍寬液相色譜發(fā)展的瓶頸-泵是關(guān)鍵液相色譜發(fā)展的瓶頸-泵是關(guān)鍵單柱塞泵單柱塞泵雙柱塞串聯(lián)往復(fù)泵結(jié)構(gòu)雙柱塞串聯(lián)往復(fù)泵結(jié)構(gòu)rr實(shí)施壓力控制區(qū)域比例閥、混合器比例閥、混合器泵泵進(jìn)樣閥進(jìn)樣閥檢測(cè)器檢測(cè)器泵頭泵頭比例閥比例閥流通池流通池色譜柱色譜柱混合器混合器進(jìn)樣閥進(jìn)樣閥流動(dòng)相流動(dòng)相廢液閥廢液閥紫外檢測(cè)器的工作原理紫外檢測(cè)器的工作原理可變波長(zhǎng)的紫外吸收檢測(cè)器可變波長(zhǎng)的紫外吸收檢測(cè)器 比例雙光路設(shè)計(jì) 豐富的程序功能 符合 glp

6、/gmp 要求 關(guān)鍵元件進(jìn)口lc2030監(jiān)測(cè)器光路示意圖0.000.050.100.150.200.250.300.350.400.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.00auminutesuracilethylparabenpropylparaben0 .0 00 .0 50 .1 00 .1 50 .2 00 .2 50 .3 00 .0 00 .5 01 .0 01 .5 02 .0 02 .5 03 .0 03 .5 04 .0 04 .5 05 .0 05 .5 06 .0 06 .5 07 .0 0m in

7、 u te s0 .0 00 .0 50 .1 00 .1 50 .2 00 .2 50 .3 00 .0 00 .5 01 .0 01 .5 02 .0 02 .5 03 .0 03 .5 04 .0 04 .5 05 .0 05 .5 06 .0 06 .5 07 .0 0m in u te s0 .0 00 .0 50 .1 00 .1 50 .2 00 .2 50 .3 00 .0 00 .5 01 .0 01 .5 02 .0 02 .5 03 .0 03 .5 04 .0 04 .5 05 .0 05 .5 06 .0 06 .5 07 .0 0m in u te s0501001

8、5020025001,0002,0003,0004,0005,000樣品濃度響應(yīng)值峰面積()標(biāo)準(zhǔn)曲線i)(xiii)(xa樣品響應(yīng)值rfc未知組知組分的)r(x標(biāo)樣響應(yīng)值)c(x標(biāo)樣濃度rf校正因子ii0.000.200.400.600.801.001.201.401.601.802.002.503.003.504.004.505.005.506.00voltsminutesm ethylparabenethylparabenpropylparabenbutylparaben05010015020025001020304050樣品濃度標(biāo)樣峰面積內(nèi)標(biāo)樣峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線.)()()()().(sii

9、xiiixaarfcxcxrsirrfii內(nèi)標(biāo)峰面積樣品峰面積未知組分的濃度標(biāo)樣濃度標(biāo)樣響應(yīng)值內(nèi)標(biāo)樣響應(yīng)值校正因子%100%iaiac最低濃度標(biāo)樣最高濃度標(biāo)樣所希望的檢測(cè)范圍線性問(wèn)題靈敏度問(wèn)題檢測(cè)器響應(yīng)樣品濃度好的精度不好的精度)100(x%12)(xcvnxixnix變異系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)偏差平均值22)()()(yyxxyyxxriiii色素、防腐劑分析舉例色素、防腐劑分析舉例標(biāo)準(zhǔn)解讀標(biāo)準(zhǔn)解讀日常的使用維護(hù)事項(xiàng)日常的使用維護(hù)事項(xiàng)液相色譜的流程圖（總圖）液相色譜的流程圖（總圖）在線脫氣比例電磁閥檢測(cè)器分析柱混合器六通進(jìn)樣閥流動(dòng)相排放閥輸液泵輸液泵預(yù)柱預(yù)柱廢液瓶廢液瓶分析柱分析柱六通閥六通閥檢測(cè)器檢測(cè)器

10、廢液瓶廢液瓶保護(hù)柱保護(hù)柱流動(dòng)相在線脫氣比例電磁閥輸液泵輸液泵排放閥混合器液相色譜的維護(hù)分圖梯度篇1、流動(dòng)相必須用、流動(dòng)相必須用hplc級(jí)級(jí)的試劑，使用前過(guò)濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)的試劑，使用前過(guò)濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用使用0.45um或更細(xì)的膜過(guò)濾或更細(xì)的膜過(guò)濾)。2、流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波、流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波脫氣脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。1、流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭⒏呒兯螂p蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后使用，過(guò)、流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭?、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后使用，過(guò)濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；濾時(shí)注

11、意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍； 2、水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換（一般不超過(guò)、水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換（一般不超過(guò)2天），防止長(zhǎng)菌變質(zhì)；天），防止長(zhǎng)菌變質(zhì)；3、溶劑的截至波長(zhǎng)、溶劑的截至波長(zhǎng) 5 5重新連接色譜柱，設(shè)定適當(dāng)流速，當(dāng)流動(dòng)相流出重新連接色譜柱，設(shè)定適當(dāng)流速，當(dāng)流動(dòng)相流出約約3030倍于色譜柱體積，并且檢測(cè)器基線平衡后，倍于色譜柱體積，并且檢測(cè)器基線平衡后，流動(dòng)相更換完畢流動(dòng)相更換完畢1 1將新流動(dòng)相置于儲(chǔ)液瓶中將新流動(dòng)相置于儲(chǔ)液瓶中2 2打開(kāi)放空閥，啟動(dòng)泵使新的流動(dòng)相從入空閥出打開(kāi)放空閥，啟動(dòng)泵使新的流動(dòng)相從入空閥出口流出口流出20ml20ml左右左右3 3關(guān)閉放空閥，然后將進(jìn)樣閥與色譜柱相

12、連接端關(guān)閉放空閥，然后將進(jìn)樣閥與色譜柱相連接端卸開(kāi)，用小容器放置于過(guò)樣閥的出口處卸開(kāi)，用小容器放置于過(guò)樣閥的出口處4 4啟動(dòng)恒流泵，讓流動(dòng)相從進(jìn)樣閥出口流出啟動(dòng)恒流泵，讓流動(dòng)相從進(jìn)樣閥出口流出10ml10ml左左右右溶劑過(guò)濾頭的清洗溶劑過(guò)濾頭的清洗1.取下過(guò)濾頭放在取下過(guò)濾頭放在(1:4,v/v)的硝酸溶液燒杯中超的硝酸溶液燒杯中超聲清洗聲清洗15分鐘分鐘;2.取出后用蒸餾水超聲清洗取出后用蒸餾水超聲清洗10分鐘分鐘;3.用吸球吹出過(guò)濾頭中的液體用吸球吹出過(guò)濾頭中的液體;4.再用蒸餾水超聲清洗再用蒸餾水超聲清洗10分鐘分鐘;5.用吸球吹凈過(guò)濾頭中的水份用吸球吹凈過(guò)濾頭中的水份;6.將過(guò)濾頭重新

13、插入溶劑瓶中將過(guò)濾頭重新插入溶劑瓶中(正相系統(tǒng)注意將過(guò)正相系統(tǒng)注意將過(guò)濾頭烘干濾頭烘干)流程流程排放閥清洗排放閥清洗濾頭清洗濾頭清洗記記住住拿拿到到一一根根從從未未用用過(guò)過(guò)的的色色譜譜柱柱時(shí)時(shí) 一一定定要要先先看看其其使使用用說(shuō)說(shuō)明明！記記住住每每種種色色譜譜柱柱可可能能有有特特定定的的方方法法 一一定定要要先先看看其其使使用用說(shuō)說(shuō)明明！常見(jiàn)問(wèn)題的處理常見(jiàn)問(wèn)題的處理861.柱恒溫2.至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱3.用25mmol/l的緩沖液4.每天沖洗柱5.穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相6.采用保護(hù)柱871.檢查泵,重新設(shè)定流速2.降低樣品量3.流動(dòng)相ph值保持在37.5檢查柱的方向4.防止流動(dòng)

14、相蒸發(fā)或沉淀5.柱恒溫881.管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡2.用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱3.流動(dòng)相ph值保持在37.5檢查柱的方向4.防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀5.柱恒溫891.樣品體積過(guò)大2.樣品溶劑過(guò)強(qiáng)3.柱塌陷或形成短路通道4.柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效5.進(jìn)樣器損壞1.用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%2.采用較弱的樣品溶劑3.更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件4.更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)濾樣品5.更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子901.每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗2.處理樣品3.重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離子對(duì)色譜)4.每天新配,用抗氧化劑5.通過(guò)變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用hplc級(jí)的水911.流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓2.清洗柱,凈化樣品,用hplc級(jí)試劑3.更換氘燈4.采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來(lái)源(如水浴等)5.流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓921.降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相2.清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相3.加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相ph值,鈍化樣品4.更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過(guò)濾器,過(guò)