5月9日動物細(xì)胞融合與單克隆抗體

1、 20022002年年月日，月日，兩場籌備了兩場籌備了1010年的年的“太空婚禮太空婚禮”首次在神舟四號飛船上舉行，首次在神舟四號飛船上舉行，植物植物細(xì)胞細(xì)胞“新人新人”黃花煙草黃花煙草和和革新一號煙草革新一號煙草葉肉細(xì)葉肉細(xì)胞胞原生質(zhì)體原生質(zhì)體，動物細(xì)胞動物細(xì)胞“新人新人”是小鼠是小鼠b b淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞胞和和骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞，兩批新人同時(shí)在，兩批新人同時(shí)在 “ “產(chǎn)房產(chǎn)房”電融合儀內(nèi)孕育新生命。一段時(shí)間后，我國首批電融合儀內(nèi)孕育新生命。一段時(shí)間后，我國首批”太空娃娃太空娃娃”終于順利誕生。終于順利誕生。對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對照實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，細(xì)胞融合率大大提高。細(xì)胞融合率大大提高。sts“

2、太空婚禮太空婚禮”神舟放飛強(qiáng)國夢神舟放飛強(qiáng)國夢 植物體細(xì)胞雜交技術(shù)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細(xì)胞雜交過程示意圖“ “太空婚禮太空婚禮”植物科研項(xiàng)目計(jì)劃書植物科研項(xiàng)目計(jì)劃書項(xiàng)目項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交原理原理融合前處理融合前處理促融方法促融方法用途用途過過程程第一步第一步第二步第二步第三步第三步第四步第四步細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性酶解法去壁酶解法去壁物理法化學(xué)法物理法化學(xué)法原生質(zhì)體的制備原生質(zhì)體的制備原生質(zhì)體的融合原生質(zhì)體的融合與篩選與篩選雜種細(xì)胞的形成與培養(yǎng)雜種細(xì)胞的形成與培養(yǎng)雜種植株的鑒

3、定與篩選雜種植株的鑒定與篩選克服遠(yuǎn)緣雜交不親和獲得具優(yōu)良克服遠(yuǎn)緣雜交不親和獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株性狀的雜種植株同核體同核體同核體同核體異核體（雜交細(xì)胞）異核體（雜交細(xì)胞）人工誘導(dǎo)人工誘導(dǎo)還有還有3個(gè)個(gè)3個(gè)以上細(xì)胞的融合個(gè)以上細(xì)胞的融合-物理法物理法 的融合效率較的融合效率較高高,且對細(xì)胞且對細(xì)胞（原生質(zhì)（原生質(zhì)體）體）的傷害小的傷害小,易操作、易操作、控制和觀察?？刂坪陀^察。太空中處于失重狀態(tài)，太空中處于失重狀態(tài)，不同種細(xì)胞不同種細(xì)胞（原生質(zhì)體）（原生質(zhì)體）更容易親近；更容易親近；為什么在太空中細(xì)胞為什么在太空中細(xì)胞（原生質(zhì)體）融合率會（原生質(zhì)體）融合率會大大上升？為什么選用大大上升？為什么

4、選用物理法誘導(dǎo)？物理法誘導(dǎo)？請同學(xué)們閱讀課本請同學(xué)們閱讀課本p52動物細(xì)胞融合內(nèi)容動物細(xì)胞融合內(nèi)容問題：問題：什么是什么是動物細(xì)胞融合？它相當(dāng)動物細(xì)胞融合？它相當(dāng)于植物體細(xì)胞雜交過程的哪一步？于植物體細(xì)胞雜交過程的哪一步？它它們的們的過程、基本原理、誘導(dǎo)融合方法過程、基本原理、誘導(dǎo)融合方法和意義是否相同？和意義是否相同？ 1.11.1動物細(xì)胞融合過程、原理與誘導(dǎo)方法動物細(xì)胞融合過程、原理與誘導(dǎo)方法 為什么滅活的為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑病毒能作誘導(dǎo)劑？滅活喪失感染性滅活喪失感染性保留融合活性保留融合活性1.11.1動物細(xì)胞融合過程、原理與誘導(dǎo)方法動物細(xì)胞融合過程、原理與誘導(dǎo)方法鼠鼠b淋巴細(xì)胞淋

5、巴細(xì)胞鼠骨髓瘤細(xì)胞鼠骨髓瘤細(xì)胞人工誘導(dǎo)人工誘導(dǎo)1.21.2動物動物細(xì)胞融合的概念細(xì)胞融合的概念雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 動物細(xì)胞融合（動物細(xì)胞融合（技術(shù)技術(shù)）：是指）：是指（在一定的條件下在一定的條件下）兩個(gè)或多個(gè)細(xì)）兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合形成一個(gè)單核細(xì)胞的過程。胞融合形成一個(gè)單核細(xì)胞的過程。1.31.3動物動物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用問題：問題：抗體由什么抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？其化學(xué)細(xì)胞產(chǎn)生？其化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點(diǎn)？主原作用的特點(diǎn)？主要分布在哪里？要分布在哪里？2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 一個(gè)天然抗原物質(zhì)可有多種和多個(gè)決定簇一個(gè)天然抗原物

6、質(zhì)可有多種和多個(gè)決定簇。教材中所。教材中所說的抗原分子刺激淋巴細(xì)胞，說的也就是說的抗原分子刺激淋巴細(xì)胞，說的也就是抗原決定簇抗原決定簇刺刺激激b b淋巴細(xì)胞，使其分裂分化出淋巴細(xì)胞，使其分裂分化出特異性的效應(yīng)特異性的效應(yīng)b b細(xì)胞細(xì)胞，分分泌泌特異性抗體。特異性抗體?？贵w的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點(diǎn)：該法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。體的特異性差、靈敏度低。多多種種效效應(yīng)應(yīng)b細(xì)細(xì)胞胞動動物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 讀下面一段文字資料，讀下面一段文字資料，找出單克隆抗體的概念找出單

7、克隆抗體的概念 人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的b b細(xì)胞細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個(gè)可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每個(gè)b b細(xì)胞只細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)單一抗體，必須用單個(gè)b b細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。細(xì)胞進(jìn)行無性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 單單: : 單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞 克隆克隆: : 無性繁殖無性繁殖 單克隆單克隆抗體抗體: :單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)

8、單一化學(xué)性質(zhì)單一特異性強(qiáng)特異性強(qiáng)的抗體的抗體提示提示1 1：對：對b b細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提示提示2 2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無限增殖的？提示提示3 3：從誘變育種、基因工程、細(xì)胞工程等從誘變育種、基因工程、細(xì)胞工程等角度有哪些可能的設(shè)計(jì)思路？角度有哪些可能的設(shè)計(jì)思路？問題：問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？2.2單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備一個(gè)一個(gè)b b淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)

9、技術(shù)設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能大量繁殖的細(xì)胞又能大量繁殖的細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? :制備單克隆抗體制備單克隆抗體. . 實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理： 實(shí)驗(yàn)過程：實(shí)驗(yàn)過程：2.2單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備 看書上看書上53頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？字母按正確順序連接起來。順序是？ 描述單克隆描述單克隆抗體制備過抗體制備過程步驟程

10、步驟注射抗原注射抗原b b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1專一抗專一抗體檢測體檢測克隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體有限稀釋法培養(yǎng)有限稀釋法培養(yǎng) 篩選篩選2 21.注射抗原的目的注射抗原的目的是什么？是什么？注射抗原注射抗原b b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1專一抗專一抗體檢測體檢測克隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體有限稀釋法培養(yǎng)有限稀釋法培養(yǎng) 篩選篩選2 22.誘導(dǎo)細(xì)胞融合的誘導(dǎo)細(xì)胞融合的手段有哪些？手段有哪些？注射抗原注射抗原b b淋巴細(xì)胞淋

11、巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1專一抗專一抗體檢測體檢測克隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體有限稀釋法培養(yǎng)有限稀釋法培養(yǎng) 篩選篩選2 23.若細(xì)胞兩兩融合后，若細(xì)胞兩兩融合后，有幾種融合情況？有幾種融合情況？注射抗原注射抗原b b淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1專一抗專一抗體檢測體檢測克隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體有限稀釋法培養(yǎng)有限稀釋法培養(yǎng) 篩選篩選2 24.第一次篩選出的雜交瘤第一次篩選出的雜交瘤細(xì)胞為何需進(jìn)行克隆化培細(xì)胞為何需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專一抗體

12、檢測？養(yǎng)和專一抗體檢測？5.5.實(shí)際操作中如何經(jīng)過兩次篩選獲得能產(chǎn)生特異實(shí)際操作中如何經(jīng)過兩次篩選獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞？性抗體的雜交瘤細(xì)胞？ 有限稀釋法有限稀釋法稀釋多次稀釋多次稀釋稀釋將培養(yǎng)皿孔內(nèi)的上清液取出，檢測抗體。常用的方法將培養(yǎng)皿孔內(nèi)的上清液取出，檢測抗體。常用的方法有：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫熒光測定。有：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫熒光測定。問題：問題：單克隆抗體的突出優(yōu)點(diǎn)是什么？單克隆抗體的突出優(yōu)點(diǎn)是什么？特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高 克隆單個(gè)雜交瘤細(xì)胞，可制備克隆單個(gè)雜交瘤細(xì)胞，可制備抗一種抗原抗一種抗原決定簇的決定簇的特異單克隆抗體。特異單克隆抗體。2.3單克隆

13、抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡易、快速準(zhǔn)確、高效、簡易、快速 (“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈” 單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭)現(xiàn)在你能主持現(xiàn)在你能主持“太空婚禮太空婚禮”動物科研項(xiàng)目了嗎？動物科研項(xiàng)目了嗎？比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備原理原理融合前處理融合前處理促融方法促融方法用途用途過過程程第一步第一步第二步第二步第三步第三步第四步第四步細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性膜的流動性、細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞增殖增殖酶解法去壁酶解法去壁小鼠免疫處理小鼠免疫處理、細(xì)胞分散、細(xì)胞分散物理法化學(xué)法物理法化學(xué)法物理、化學(xué)、生物法物理、化學(xué)、生物法原生質(zhì)體的制備原生質(zhì)體的制備融合親本細(xì)胞的準(zhǔn)備融合親本細(xì)胞的準(zhǔn)備原生質(zhì)體的融合原生質(zhì)體的融合與篩選與篩選動物細(xì)胞融合與動物細(xì)胞融合與兩次篩選兩次篩選雜種細(xì)胞的形成與培養(yǎng)雜種細(xì)胞的形成與培養(yǎng)產(chǎn)特定抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)特定抗體的雜交瘤細(xì)胞