級實(shí)驗(yàn)一還原糖脂肪蛋白質(zhì)鑒定

1、一、驗(yàn)證鑒定類實(shí)驗(yàn)一、驗(yàn)證鑒定類實(shí)驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康尼槍σ阎纳飳W(xué)事實(shí)進(jìn)行驗(yàn)證，鞏固和加強(qiáng)針對已知的生物學(xué)事實(shí)進(jìn)行驗(yàn)證，鞏固和加強(qiáng)有關(guān)知識(shí)內(nèi)容，培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作能力。有關(guān)知識(shí)內(nèi)容，培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作能力。2常用方法和技術(shù)常用方法和技術(shù)(1)研磨、過濾：研磨、過濾：如生物組織樣液制備。如生物組織樣液制備。(2)顏色反應(yīng)：顏色反應(yīng)：如生物組織中有機(jī)物的鑒定。如生物組織中有機(jī)物的鑒定。(3)紙層析法：紙層析法：如葉綠體中色素的分離。如葉綠體中色素的分離。(4)同位素示蹤法：同位素示蹤法：如噬菌體侵染細(xì)菌實(shí)驗(yàn)。如噬菌體侵染細(xì)菌實(shí)驗(yàn)。3特定化學(xué)物質(zhì)的檢測方法特定化學(xué)物質(zhì)的檢測方法常用指示劑或指示物常用指示劑或

2、指示物作用作用現(xiàn)象現(xiàn)象碘液碘液檢測淀粉檢測淀粉變藍(lán)變藍(lán)斐林試劑斐林試劑檢測還原糖檢測還原糖磚紅色沉淀磚紅色沉淀雙縮脲試劑雙縮脲試劑檢測蛋白質(zhì)檢測蛋白質(zhì)紫色紫色蘇丹蘇丹/染液染液檢測脂肪檢測脂肪橘黃色橘黃色/紅色紅色ca(oh)2溶液溶液檢測檢測co2石灰水變渾濁石灰水變渾濁二苯胺二苯胺鑒定鑒定dna藍(lán)色藍(lán)色余燼木條余燼木條檢測檢測o2木條復(fù)燃木條復(fù)燃二、還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定二、還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定基礎(chǔ)梳理基礎(chǔ)梳理1 1、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)原理 某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物產(chǎn)生物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)特定的顏色反應(yīng)。 還原糖還原糖+

3、+斐林試劑斐林試劑 磚紅色沉淀磚紅色沉淀鏡檢脂肪脂肪+ +蘇丹蘇丹染液染液橘黃色橘黃色蘇丹蘇丹染液染液鏡檢紅色紅色蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑雙縮脲試劑紫色紫色沸水浴沸水浴2 2實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)流程(1)(1)還原糖的鑒定還原糖的鑒定甲液和乙液甲液和乙液等量混合等量混合均勻均勻后使用后使用（2）脂肪的鑒定）脂肪的鑒定取材：花生種子浸泡取材：花生種子浸泡3 34h4h，去皮，將子葉削成薄片，去皮，將子葉削成薄片 制片制片（1）取最理想的薄片）取最理想的薄片（2）在薄片上滴）在薄片上滴23滴蘇丹滴蘇丹染色染色23 min（3）去浮色（體積分?jǐn)?shù)為）去浮色（體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精）的酒精）（4）制成臨時(shí)裝片）

4、制成臨時(shí)裝片觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒 然后用高倍鏡觀察，可觀察到橘黃色顆粒然后用高倍鏡觀察，可觀察到橘黃色顆粒結(jié)論：花生種子中含有脂肪結(jié)論：花生種子中含有脂肪（3）蛋白質(zhì)的鑒定）蛋白質(zhì)的鑒定組織樣液中有蛋白質(zhì)。組織樣液中有蛋白質(zhì)。升華提高升華提高一、實(shí)驗(yàn)材料的選擇一、實(shí)驗(yàn)材料的選擇（1）還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最理想的實(shí)驗(yàn)材料是）還原糖的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最理想的實(shí)驗(yàn)材料是含還原糖量較高含還原糖量較高的生物組織（或器官），而且組的生物組織（或器官），而且組織的織的顏色較淺顏色較淺，易于觀察?？蛇x用，易于觀察?？蛇x用蘋果、梨蘋果、梨、白、白色甘藍(lán)葉、

5、白蘿卜等。色甘藍(lán)葉、白蘿卜等。不能選用甜菜、甘蔗，因?yàn)樗鼈兯恼崽鞘且环N非還不能選用甜菜、甘蔗，因?yàn)樗鼈兯恼崽鞘且环N非還原糖原糖;馬鈴薯因含淀粉較多也不能做實(shí)驗(yàn)材料；不能選西馬鈴薯因含淀粉較多也不能做實(shí)驗(yàn)材料；不能選西瓜、血液（含葡萄糖）、含還原糖的綠色葉片等做實(shí)驗(yàn)瓜、血液（含葡萄糖）、含還原糖的綠色葉片等做實(shí)驗(yàn)材料材料,以避免顏色的干擾。以避免顏色的干擾。思考：能不能選用甜菜、甘蔗、馬鈴薯、西瓜、血液、思考：能不能選用甜菜、甘蔗、馬鈴薯、西瓜、血液、 韭菜？韭菜？（2）脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)材料最好選）脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)材料最好選富含脂肪且體富含脂肪且體積比較大積比較大的種子，才有

6、利于徒手切片，如花生種子。的種子，才有利于徒手切片，如花生種子。課堂練習(xí)課堂練習(xí)1：（2007年江蘇生物，年江蘇生物，19）若以雞蛋蛋白液為）若以雞蛋蛋白液為材料進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)蛋白液與雙縮脲試劑發(fā)生材料進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)蛋白液與雙縮脲試劑發(fā)生反應(yīng)后會(huì)粘固在試管壁上。下列關(guān)于這一現(xiàn)象形成原因的反應(yīng)后會(huì)粘固在試管壁上。下列關(guān)于這一現(xiàn)象形成原因的描述中，正確的是（描述中，正確的是（ ） a.雞蛋蛋白液稀釋不夠，攪拌不勻雞蛋蛋白液稀釋不夠，攪拌不勻 b.只添加了雙縮脲試劑只添加了雙縮脲試劑a，未添加雙縮脲試劑，未添加雙縮脲試劑b c.雞蛋蛋白液不是合適的實(shí)驗(yàn)材料雞蛋蛋白液不是合適的實(shí)驗(yàn)

7、材料 d.蛋白液與雙縮脲試劑的反應(yīng)時(shí)間不夠長蛋白液與雙縮脲試劑的反應(yīng)時(shí)間不夠長a（3）蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最好選用）蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)中，最好選用富含蛋白質(zhì)富含蛋白質(zhì)的生物的生物組織，植物材料常用的是大豆，動(dòng)物材料常用的是雞蛋的組織，植物材料常用的是大豆，動(dòng)物材料常用的是雞蛋的蛋清（蛋清（一定要稀釋一定要稀釋）。）。思考：思考：斐林試劑與雙縮脲試劑在使用時(shí)能相互替代嗎？為斐林試劑與雙縮脲試劑在使用時(shí)能相互替代嗎？為什么？什么？二、斐林試劑與雙縮脲試劑的比較分析二、斐林試劑與雙縮脲試劑的比較分析 比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目 斐林試劑斐林試劑 雙縮脲試劑雙縮脲試劑不不同同點(diǎn)點(diǎn)濃度濃度 反應(yīng)原理反應(yīng)原理使用方法

8、使用方法呈色反應(yīng)條件呈色反應(yīng)條件顏色顏色 相同點(diǎn)相同點(diǎn)乙液乙液cuso4cuso4濃度濃度0.05g/ml0.05g/mlb b液液cuso4cuso4濃度為濃度為0.01g/ml0.01g/ml還原糖中的醛基被還原糖中的醛基被cucu（ohoh）2 2氧化，氧化，cucu（ohoh）2 2被還原為被還原為cucu2 2o o具有兩個(gè)上肽鍵的化具有兩個(gè)上肽鍵的化合物在堿性條件下與合物在堿性條件下與cucu2+2+反應(yīng)生成絡(luò)合物反應(yīng)生成絡(luò)合物甲液和乙液甲液和乙液混合均勻后方混合均勻后方可使用，且現(xiàn)配現(xiàn)用可使用，且現(xiàn)配現(xiàn)用使用時(shí)使用時(shí)先加先加a a液搖勻液搖勻后，再加后，再加b b液液需加熱煮沸需

9、加熱煮沸不需加熱即可反應(yīng)不需加熱即可反應(yīng)磚紅色磚紅色紫色紫色都含有都含有naohnaoh、cuso4cuso4兩種成分，且所用兩種成分，且所用naohnaoh濃度濃度都是都是0.1 g/ml0.1 g/ml、鑒定蛋白質(zhì)時(shí)，向勻漿中加入、鑒定蛋白質(zhì)時(shí)，向勻漿中加入2ml雙縮脲試雙縮脲試劑劑a時(shí)搖勻，再加入時(shí)搖勻，再加入34滴雙縮脲試劑滴雙縮脲試劑b搖勻。其搖勻。其中中雙縮脲試劑雙縮脲試劑b的量不能過量的量不能過量，因?yàn)檫^量的雙縮，因?yàn)檫^量的雙縮脲試劑脲試劑b會(huì)與試劑會(huì)與試劑a反應(yīng)，使溶液呈藍(lán)色，從而掩反應(yīng)，使溶液呈藍(lán)色，從而掩蓋生成的紫色。蓋生成的紫色。課堂練習(xí)課堂練習(xí)2：a課堂練習(xí)課堂練習(xí)3、

10、下列關(guān)于實(shí)驗(yàn)操作步驟的敘述中，正下列關(guān)于實(shí)驗(yàn)操作步驟的敘述中，正確的是確的是( )( )a.a.用于鑒定還原糖的斐林試劑甲液和乙液，可直用于鑒定還原糖的斐林試劑甲液和乙液，可直接用于蛋白質(zhì)的鑒定接用于蛋白質(zhì)的鑒定b.b.脂肪的鑒定需要用顯微鏡才能看到被染成橘黃脂肪的鑒定需要用顯微鏡才能看到被染成橘黃色的圓形小顆粒色的圓形小顆粒c.c.用于鑒定蛋白質(zhì)的雙縮脲試劑用于鑒定蛋白質(zhì)的雙縮脲試劑a a液與液與b b液要混合液要混合均勻后，再加入到含樣品的試管中，且必須現(xiàn)配均勻后，再加入到含樣品的試管中，且必須現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)用d.d.在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，蘇丹在鑒定脂肪的實(shí)驗(yàn)中，蘇丹染液染色的時(shí)間染液染色的時(shí)間

11、比蘇丹比蘇丹染液染色的時(shí)間長染液染色的時(shí)間長b課堂練習(xí)課堂練習(xí)4 4. .（20092009西安模擬）在下列四支試管中分別加西安模擬）在下列四支試管中分別加入一些物質(zhì)。甲試管：豆?jié){；乙試管：氨基酸溶液；丙試入一些物質(zhì)。甲試管：豆?jié){；乙試管：氨基酸溶液；丙試管：牛奶和蛋白酶；丁試管：人血液中的紅細(xì)胞和蒸餾水。管：牛奶和蛋白酶；丁試管：人血液中的紅細(xì)胞和蒸餾水。上述四支試管中加入雙縮脲試劑振蕩后，有紫色反應(yīng)的是上述四支試管中加入雙縮脲試劑振蕩后，有紫色反應(yīng)的是( )( )a.a.乙、丙、丁乙、丙、丁 b.b.甲、乙、丁甲、乙、丁c.c.甲、乙、丙甲、乙、丙 d.d.甲、丙、丁甲、丙、丁【解析】【解

12、析】。雙縮脲試劑能與蛋白質(zhì)或多肽發(fā)生紫色反應(yīng)，。雙縮脲試劑能與蛋白質(zhì)或多肽發(fā)生紫色反應(yīng)，甲試管中有豆?jié){，丙中有牛奶和蛋白酶，故甲、丙兩試管甲試管中有豆?jié){，丙中有牛奶和蛋白酶，故甲、丙兩試管均出現(xiàn)紫色，丁試管中紅細(xì)胞在蒸餾水中會(huì)吸水漲破流出均出現(xiàn)紫色，丁試管中紅細(xì)胞在蒸餾水中會(huì)吸水漲破流出血紅蛋白，血紅蛋白也是蛋白質(zhì)，故丁試管也出現(xiàn)紫色，血紅蛋白，血紅蛋白也是蛋白質(zhì)，故丁試管也出現(xiàn)紫色，而乙試管中是氨基酸，不發(fā)生紫色反應(yīng)，故能發(fā)生紫色反而乙試管中是氨基酸，不發(fā)生紫色反應(yīng)，故能發(fā)生紫色反應(yīng)的試管是甲、丙、丁。應(yīng)的試管是甲、丙、丁。d課堂練習(xí)課堂練習(xí)5：（20082008重慶重慶tt3030）在對大

13、豆萌發(fā)）在對大豆萌發(fā)種子進(jìn)行定量測定之前，進(jìn)行了蛋白質(zhì)含量變化種子進(jìn)行定量測定之前，進(jìn)行了蛋白質(zhì)含量變化的預(yù)測實(shí)驗(yàn)，請?zhí)畛鋵?shí)驗(yàn)原理；判斷實(shí)驗(yàn)步驟中的預(yù)測實(shí)驗(yàn)，請?zhí)畛鋵?shí)驗(yàn)原理；判斷實(shí)驗(yàn)步驟中劃線部分是否正確，并更正錯(cuò)誤之處；寫出實(shí)驗(yàn)劃線部分是否正確，并更正錯(cuò)誤之處；寫出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果。（1 1）實(shí)驗(yàn)原理：蛋白質(zhì)）實(shí)驗(yàn)原理：蛋白質(zhì)_，其顏色，其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。（2 2）實(shí)驗(yàn)步驟：）實(shí)驗(yàn)步驟：將三份等量大豆種子分別萌發(fā)將三份等量大豆種子分別萌發(fā)1 1、5 5、9 9天后取出，天后取出，各加入適量蒸餾水，研碎、提取，定容后離心得各加入適量蒸餾水，研碎、提取，定容后離心得到蛋白質(zhì)制備液；到蛋白質(zhì)制備液；取取3 3支試管，編號(hào)支試管，編號(hào)1 1、2 2、3 3，分別加入等量的萌，分別加入等量的萌發(fā)發(fā)1 1、5 5、9 9天的蛋白質(zhì)制備液；天的蛋白質(zhì)制備液；與雙縮脲試劑作與雙縮脲試劑作用產(chǎn)生紫色反應(yīng)用產(chǎn)生紫色反應(yīng)在上述試管中各加入等量的在上述試管中各加入等量的a.a.雙縮脲試劑雙