醬油中乙酰丙酸測定方法

1、SB/T 醬油中乙酰丙酸的測定方法1 范圍本標準規(guī)定了用氣相色譜法測定醬油中乙酰丙酸的方法。本標準適用于醬油中乙酰丙酸的測定。本標準方法的檢出限：0.010g/kg。（一）內(nèi)標法2 原理樣品經(jīng)酸化后，用乙醚提取乙酰丙酸，以正庚酸作內(nèi)標物質(zhì)，用具有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行測定，以內(nèi)標法進行定量。3 試劑和溶液除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑和蒸餾水或去離子水。3.1 無水硫酸鈉： 650下灼燒 4 小時，貯于密閉容器中備用。3.2無水乙醚。3.3濃鹽酸。3.4飽和氯化鈉。3.5標準品正庚酸：色譜純，純度99.5%。3.6標準品乙酰丙酸：色譜純，純度98%。3.7正庚酸標準溶液： 稱取 0

2、.50g 正庚酸標準品（精確至0.0001g ）（ 3.5），用乙酸乙酯定容至100mL 。此標準溶液的濃度為 0.0050g/mL 。3.8 乙酰丙酸標準溶液： 稱取 0.50g 乙酰丙酸標準品 （精確至 0.0001g（） 3.6），用乙酸乙酯定容至100mL 。此標準溶液的濃度為 0.0050g/mL 。3.9標準系列溶液：分別準確吸取乙酰丙酸標準溶液（3.8） 0.05、0.1、 0.5、 1.0、 1.5、 2.0mL 于 6 個10mL 容量瓶中 , 各加入 1.0mL 正庚酸標準溶液（ 3.7） , 用乙酸乙酯定容，即得標準系列溶液，相當于每毫升含 25， 50， 250， 50

3、0， 750， 1000 g的乙酰丙酸。4 儀器和設備1SB/T 實驗室常規(guī)儀器、設備及下列各項：4.1100 mL 具塞試管。4.2 氣相色譜儀：配有氫火焰離子化檢測器（FID ）。4.3 色譜柱： 石英彈性毛細管柱，柱長 30m，內(nèi)徑 0.25mm，涂膜厚度0.5 m；固定液： Carbwax20M ?；蚺c此相當?shù)纳V柱。4.4250mL 圓底燒瓶。4.5 濃縮設備（水浴、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或氮吹儀）。5 分析步驟5.1 樣品提取準確稱取5.0g 試樣（精確至0.0001g）于 100mL 具塞試管（ 4.1）中，加入10mL 飽和氯化鈉溶液、 1.0mL 正庚酸標準溶液（3.7）、濃鹽酸3.0m

4、L （ 3.3），充分震搖1min 后，加入50.0 mL 無水乙醚，震搖萃取3-5min ，靜置約 10-15 min 。待分層后，吸取上層乙醚萃取液于250mL 圓底燒瓶（ 4.4）中，再重復萃取二次，合并乙醚萃取液，用10mL 飽和氯化鈉溶液洗滌兩次，棄去下層。乙醚層過過量無水硫酸鈉脫水，在45左右濃縮至近干，殘液用乙酸乙酯定容至10mL ，即可上機。5.2 測定5.2.1 氣相色譜參考條件色譜柱溫度： 120， 1min8o c / min230， 4min ；進樣口溫度： 270；檢測器溫度： 270；進樣方式：分流進樣，分流比25:1；進樣體積： 1 L ；氫氣流速： 30 mL/

5、min ；空氣流速： 300 mL/min ；尾吹氣： 30 mL/min ；載氣：高純氮，純度大于99.999%，流速： 1.0mL/min 。5.2.2 定量用進樣器分別吸取 1 L 的標準系列溶液（3.9），注入氣相色譜儀，在上述色譜條件（5.2.1）下測定乙酰丙酸與內(nèi)標物質(zhì)的響應峰面積。以乙酰丙酸峰面積/內(nèi)標物質(zhì)峰面積為縱坐標，以乙酰丙酸濃度為橫坐標，繪制標準曲線或計算回歸方程。用進樣器吸取 1 L 的試樣（ 5.1），注入氣相色譜儀，在上述色譜條件（5.2.1）下測定試樣。根據(jù)標樣保留時間， 確定乙酰丙酸和內(nèi)標物質(zhì)的峰位置，并記錄乙酰丙酸峰面積和內(nèi)標物質(zhì)峰面積，計算樣品中乙酰丙酸含量

6、。在上述色譜條件（ 5.2.1）下，通常保留時間為：乙酰丙酸約為14.6min ，內(nèi)標物質(zhì)約為 9.7min 。2SB/T 標準系列溶液的氣相色譜圖如下：5.3 空白試驗用 5.0 mL 蒸餾水代替試樣，按5.1-5.2 的步驟做空白試驗。5.4 結(jié)果計算樣品中乙酰丙酸的含量X ，按式（ 1）計算：c V1000 （1）X1000m式中：X 樣品中乙酰丙酸含量，單位為毫克每千克（mg/kg ）；c 測定用樣品中乙酰丙酸含量，單位為微克每毫升（ g/mL ）； V 樣品的定容體積 (mL) ；m 樣品質(zhì)量，單位為克（g）。結(jié)果表述：計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。5.5精密度同一樣品，兩次平行測定結(jié)果

7、之差，不得超過平均值的10%。（二）外標法6 原理樣品經(jīng)酸化后， 用乙醚提取乙酰丙酸，用配有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，以外標法（標準曲線法）跟系列標準進行比較定量。3SB/T 7 試劑如非特別說明，本標準方法所用的水為蒸餾水，所用試劑均為分析純。7.1無水乙醚：不含過氧化物。7.2無水硫酸鈉。 650以下灼燒4小時，貯于密閉容器中備用。7.3乙酸乙酯：經(jīng)重蒸餾處理。7.46N 鹽酸溶液：量取 50mL濃鹽酸，用水稀釋至100mL。7.5乙酰丙酸標準品：色譜純，純度99.5 。7.6乙酰丙酸標準貯備液：準確稱取乙酰丙酸標準品（7.5 ） 0.50g （精確至 0.0001g），

8、置于 100mL容量瓶中，室溫下用乙酸乙酯（7.3）溶解稀釋并定容至刻度。此標準溶液濃度相當于5.0mg/mL 乙酰丙酸。7.7乙酰丙酸標準系列溶液：吸取適量的乙酰丙酸標準貯備液（7.6 ），以乙酸乙酯（7.3 ）稀釋成每毫升相當于25， 50， 100 ， 500， 750， 1000 g 的乙酰丙酸。8 儀器和設備實驗室常規(guī)儀器、設備及以下各項:8.1氣相色譜儀：配備氫火焰離子化檢測器。8.2 色譜柱： J&W DB-FFAP色譜柱（柱長30m，內(nèi)徑 0.25mm，內(nèi)膜厚度0.25 m，固定液： TPA改性聚乙二醇）或與之相當?shù)纳V柱。8.3濃縮設備（旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、恒溫水浴、真空泵）。8.4

9、25mL 具塞試管。8.5100mL 梨形濃縮瓶。9 分析步驟9.1樣品提取室溫下準確吸取充分均勻的醬油樣品5.0g （精確至0.0001g ）于 25mL具塞試管中，加入6N 鹽酸溶液（ 7.4 ） 1mL，充分震搖均勻，往試管中加入25mL無水乙醚（ 7.1 ），充分震搖萃取1 分鐘，靜置約 10-15 分鐘，待上層乙醚與下層樣品充分分層后，吸取上層乙醚提取液于100mL濃縮瓶中，之后重復進行上述的萃取操作兩次，每次加入無水乙醚的量均為20mL，三次的乙醚萃取液合并后經(jīng)無水硫酸鈉（ 7.2 ）進行吸水處理，于40下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，以乙酸乙酯（7.3 ）溶解殘留物并于室溫下定容至5mL

10、，搖勻后靜置，待氣相色譜進樣檢測。4SB/T 9.2色譜參考條件色譜溫度： 60， 1min18 /min200， 1min10 /min230， 12min進樣口溫度： 260；檢測器溫度： 280；進樣方式：不分流進樣；進樣體積：1 L ；氫氣流速：35mL/min ；空氣流速：200mL/min ；載氣：氮氣，純度大于99.999，流速： 2.2mL/min ；尾吹氣：氮氣，純度大于99.999，流速： 27.8mL/min 。9.3測定以乙酰丙酸標準系列溶液（7.7 ）分別進樣1 L 于氣相色譜儀中，測得不同的標準濃度下乙酰丙酸的響應峰面積，以乙酰丙酸的濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標，作一標準曲線并計算其回歸方程。在相同的色譜條件下以上述處理后的樣品溶液（ 9.1 ）進樣 1 L。測得的峰面積與標準曲線比較定量。在上述色譜條件（9.2）下，標準系列溶液的氣相色譜圖如下：9.4結(jié)果計算樣品中乙酰丙酸的含量按式（2）進行計算。5SB/T c V1000 （2）