氨基酸代謝ppt課件

1、1氨基酸代謝氨基酸代謝The metabolism of amino acid2聯(lián)合脫氨基作用是大多數(shù)氨基酸的主要代謝方式。聯(lián)合脫氨基作用是大多數(shù)氨基酸的主要代謝方式。氨基酸分解代謝的主要途徑是脫氨基作用，生成氨氨基酸分解代謝的主要途徑是脫氨基作用，生成氨(ammonia)和相應(yīng)的和相應(yīng)的-酮酸；酮酸； 氧化脫氨基、聯(lián)合脫氨基和非氧化脫氨基氧化脫氨基、聯(lián)合脫氨基和非氧化脫氨基 是氨基酸的三種脫氨基方式。是氨基酸的三種脫氨基方式。背景知識背景知識3白化病白化病苯丙酮尿癥苯丙酮尿癥氨基酸的代謝異常與疾病氨基酸的代謝異常與疾病苯丙氨酸羥化酶遺傳性缺陷可致苯丙酮酸尿癥，酪氨酸酶遺傳性缺陷可致白化病苯丙

2、氨酸羥化酶遺傳性缺陷可致苯丙酮酸尿癥，酪氨酸酶遺傳性缺陷可致白化病 4 了解氨基酸代謝的方式。了解氨基酸代謝的方式。 掌握聯(lián)合脫氨基作用的檢定方法。掌握聯(lián)合脫氨基作用的檢定方法。實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?a 丙氨酸丙氨酸a 酮戊二酸酮戊二酸 谷丙轉(zhuǎn)氨酶谷丙轉(zhuǎn)氨酶 （GPT）丙酮酸丙酮酸谷氨酸谷氨酸NADH（NADPH)+NH3+H+谷氨酸脫氫酶谷氨酸脫氫酶NAD + （NADP +)+H20苯肼為轉(zhuǎn)氨酶的抑制劑，可以阻斷聯(lián)合脫氨基。苯肼為轉(zhuǎn)氨酶的抑制劑，可以阻斷聯(lián)合脫氨基。本實驗以谷丙轉(zhuǎn)氨酶為底物，以苯肼為抑制劑，觀察抑制劑對氨生成的影響。本實驗以谷丙轉(zhuǎn)氨酶為底物，以苯肼為抑制劑，觀察抑制劑對氨生成的

3、影響。聯(lián)合脫氨基，是指氨基酸的轉(zhuǎn)氨基作用和氧化脫氨基作用的聯(lián)合，其過程是氨基酸首先與聯(lián)合脫氨基，是指氨基酸的轉(zhuǎn)氨基作用和氧化脫氨基作用的聯(lián)合，其過程是氨基酸首先與酮酮戊二酸在轉(zhuǎn)氨酶催化下生成相應(yīng)的戊二酸在轉(zhuǎn)氨酶催化下生成相應(yīng)的酮酸和谷氨酸，谷氨酸在酮酸和谷氨酸，谷氨酸在L-L-谷氨酸脫氫酶作用下生成谷氨酸脫氫酶作用下生成酮戊二酸和氨，酮戊二酸和氨，酮戊二酸再繼續(xù)參與轉(zhuǎn)氨基作用。酮戊二酸再繼續(xù)參與轉(zhuǎn)氨基作用。 實驗原理實驗原理6ConwayConway擴(kuò)散皿擴(kuò)散皿 內(nèi)室放稀鹽酸，外室放一側(cè)放氫氧化鈉溶液，另一內(nèi)室放稀鹽酸，外室放一側(cè)放氫氧化鈉溶液，另一側(cè)放反應(yīng)后溶液。側(cè)放反應(yīng)后溶液。蓋上玻璃片，

4、將反應(yīng)液混合后置于溫箱內(nèi)反應(yīng)。蓋上玻璃片，將反應(yīng)液混合后置于溫箱內(nèi)反應(yīng)。7實驗步驟實驗步驟 1 肝勻漿的制備肝勻漿的制備 2 聯(lián)合脫氨基作用的反應(yīng)體系聯(lián)合脫氨基作用的反應(yīng)體系 3 等溫蒸餾等溫蒸餾4 顯色顯色5 計算計算8取取0.50.5克肝組織，加入克肝組織，加入4.5%4.5%預(yù)冷的預(yù)冷的PH4.0PH4.0的磷酸鹽緩沖液，制成的磷酸鹽緩沖液，制成10%10%的肝勻漿。的肝勻漿。玻璃勻漿器玻璃勻漿器使用時注意事項使用時注意事項 用力但不要用力過猛，以免管子被搗破。用力但不要用力過猛，以免管子被搗破。 動作要迅速，以免酶活性喪失。動作要迅速，以免酶活性喪失。 用后要立即清洗管子。用后要立即清

5、洗管子。 1 肝勻漿的制備肝勻漿的制備92 聯(lián)合脫氨基作用的反應(yīng)體系聯(lián)合脫氨基作用的反應(yīng)體系取三支試管，按順序在各個管中加入以下試劑。取三支試管，按順序在各個管中加入以下試劑。1 對照管對照管2 測定管測定管3 抑制管抑制管谷丙轉(zhuǎn)氨酶底物液（谷丙轉(zhuǎn)氨酶底物液（ml）1% NAD溶液（溶液（ml）1% 苯肼溶液（苯肼溶液（ml)10 % 三氯醋酸（三氯醋酸（ml)0.80.80.80.10.10.10.10.10.51010 % 三氯醋酸（三氯醋酸（ml)1% 苯肼溶液（苯肼溶液（ml)1 對照管對照管2 測定管測定管3 抑制管抑制管0.50.50.1 將以上反應(yīng)體系于將以上反應(yīng)體系于3737水

6、浴中預(yù)溫水浴中預(yù)溫5 5分鐘。各管加入分鐘。各管加入10%10%肝勻漿液肝勻漿液0.5ml, 0.5ml, 3737水浴中保溫水浴中保溫4545分鐘。按順序在各個管中加入以下試劑。分鐘。按順序在各個管中加入以下試劑。113 等溫蒸餾等溫蒸餾 取取3 3只只conwayconway擴(kuò)散皿，內(nèi)室加入擴(kuò)散皿，內(nèi)室加入0.01mol/L HCL, 0.01mol/L HCL, 外室兩側(cè)分別加入外室兩側(cè)分別加入1.0 ml1.0 ml的聯(lián)合脫氨的聯(lián)合脫氨基反應(yīng)液和基反應(yīng)液和0.5ml0.5ml的的0.5%0.5%的的NaOHNaOH液。密封，搖動擴(kuò)散皿，液。密封，搖動擴(kuò)散皿，3737溫箱中保溫溫箱中保溫4545分鐘。分鐘。124 顯色顯色 分別取擴(kuò)散皿內(nèi)室液分別取擴(kuò)散皿內(nèi)室液0.5ml0.5ml，各加蒸餾水，各加蒸餾水2.5ml2.5ml及阿拉伯膠液及阿拉伯膠液2 2滴，混均后，滴，混均后，再加再加NesslerNessler試劑試劑0.75ml,0.75ml,立即于立即于480nm480nm波長比色測定，讀取吸光度。波長比色測定，讀取吸光度。135 計算計算按硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算每克肝每小時釋放的氨量。按硫酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算每克肝每小時釋放的氨量。6045NH3/g.h =測得值測得值220.5 10%14思考題思考題1 肝細(xì)胞中谷丙轉(zhuǎn)氨酶在體內(nèi)有哪些生理意義？臨床上測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶有何