技能實驗報告(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)

1、成員：黃黎黎，黃立燾，蔣孟青，雷萌，成員：黃黎黎，黃立燾，蔣孟青，雷萌，林秋惠，李浩，劉婷，劉秋紅，隆曉元林秋惠，李浩，劉婷，劉秋紅，隆曉元損傷是多種致病因素所造成的損傷是多種致病因素所造成的肝臟病理過程的一部分，是肝肝臟病理過程的一部分，是肝纖維化和肝硬化的起始動因。纖維化和肝硬化的起始動因。近年來隨著新藥的大量涌現(xiàn)，近年來隨著新藥的大量涌現(xiàn)，由藥物引起的肝臟損害也屢見由藥物引起的肝臟損害也屢見不鮮。因此對肝臟疾病的防治不鮮。因此對肝臟疾病的防治己為全世界所關(guān)注。目前尚無己為全世界所關(guān)注。目前尚無更多的特效藥可以明顯地減輕更多的特效藥可以明顯地減輕肝臟的損傷和促進肝細(xì)胞的肝臟的損傷和促進肝細(xì)

2、胞的再生，如何預(yù)防及治療各類肝臟疾病己引起國內(nèi)外有關(guān)學(xué)再生，如何預(yù)防及治療各類肝臟疾病己引起國內(nèi)外有關(guān)學(xué)者的廣泛重視，因此了解肝損傷及其發(fā)生機制，對尋找防者的廣泛重視，因此了解肝損傷及其發(fā)生機制，對尋找防治藥物的研究意義重大。治藥物的研究意義重大。國內(nèi)研究課題國內(nèi)研究課題1、蜂王漿對肝損傷的保護作用、蜂王漿對肝損傷的保護作用2、鹿茸對肝損傷的保護作用、鹿茸對肝損傷的保護作用3、琥珀酸鈉對肝損傷的保護作用、琥珀酸鈉對肝損傷的保護作用4、夏枯草對肝損傷的保護作用、夏枯草對肝損傷的保護作用轉(zhuǎn)氨酶是人體代謝過程中必不可少的轉(zhuǎn)氨酶是人體代謝過程中必不可少的“催化劑催化劑”，主要存在與肝細(xì)胞內(nèi)。肝功檢查中

3、最基本，最重主要存在與肝細(xì)胞內(nèi)。肝功檢查中最基本，最重要的指標(biāo)就是轉(zhuǎn)氨酶要的指標(biāo)就是轉(zhuǎn)氨酶,通常包括血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶通常包括血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）兩項。谷丙轉(zhuǎn)氨）兩項。谷丙轉(zhuǎn)氨酶主要存在于肝細(xì)胞原漿的可溶部分酶主要存在于肝細(xì)胞原漿的可溶部分,肝細(xì)胞發(fā)生肝細(xì)胞發(fā)生炎癥病變炎癥病變,引起細(xì)胞腫脹引起細(xì)胞腫脹,壞死或肝細(xì)胞膜通透性壞死或肝細(xì)胞膜通透性增高等增高等,均可使谷丙轉(zhuǎn)氨酶釋放于血液循環(huán)中均可使谷丙轉(zhuǎn)氨酶釋放于血液循環(huán)中,而而使血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶增高。谷草轉(zhuǎn)氨酶主要存在于使血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶增高。谷草轉(zhuǎn)氨酶主要存在于肝細(xì)胞線粒體內(nèi)肝細(xì)胞線粒體內(nèi),當(dāng)肝臟發(fā)生嚴(yán)重壞死

4、或破壞時當(dāng)肝臟發(fā)生嚴(yán)重壞死或破壞時,才能引起谷草轉(zhuǎn)才能引起谷草轉(zhuǎn)氨酶的顯著升高。通常氨酶的顯著升高。通常,體檢中主要檢查的轉(zhuǎn)氨體檢中主要檢查的轉(zhuǎn)氨酶是谷丙轉(zhuǎn)氨酶酶是谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)。1%的肝臟細(xì)胞損害的肝臟細(xì)胞損害,可以使血中可以使血中ALT的濃度增加的濃度增加1倍。因此倍。因此,ALT水水平可以比較敏感地監(jiān)測到肝臟是否受到損害。平可以比較敏感地監(jiān)測到肝臟是否受到損害。然而轉(zhuǎn)氨酶高是個很常見的情況然而轉(zhuǎn)氨酶高是個很常見的情況,并不一定是肝并不一定是肝臟出了問題。因為轉(zhuǎn)氨酶非常敏感臟出了問題。因為轉(zhuǎn)氨酶非常敏感,很多因素會很多因素會引起轉(zhuǎn)氨酶正常值的上下波動引起轉(zhuǎn)氨酶正常值的上下波動,健康人

5、在一天之健康人在一天之內(nèi)的不同時間檢查內(nèi)的不同時間檢查,轉(zhuǎn)氨酶測量結(jié)果都可能不一轉(zhuǎn)氨酶測量結(jié)果都可能不一樣。轉(zhuǎn)氨酶水平在樣。轉(zhuǎn)氨酶水平在040之間是正常的。之間是正常的。實驗器材實驗器材：設(shè)備：移液搶，替補頭，酶標(biāo)儀，顯色板設(shè)備：移液搶，替補頭，酶標(biāo)儀，顯色板試劑：谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒試劑：谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒(谷丙轉(zhuǎn)氨酶基質(zhì)液，谷丙轉(zhuǎn)氨酶基質(zhì)液， 2，4-二硝基苯肼液，二硝基苯肼液，4mol/L氫氧化鈉液氫氧化鈉液)， 血清血清實驗前準(zhǔn)備實驗前準(zhǔn)備藥物對小鼠急性肝損傷的藥物對小鼠急性肝損傷的保護作用保護作用：1、將健康、將健康60只只ICR小鼠隨機小鼠隨機分成六組：正常對照組、模型分成六組：正常對照

6、組、模型組（組（CCl4）、聯(lián)苯雙酯陽性）、聯(lián)苯雙酯陽性對照組、藥物高、中、低（對照組、藥物高、中、低（400、200、100mg/kg）組，每組組，每組10只。只。2、高、中、低劑量給藥組分、高、中、低劑量給藥組分別別400、200、100mg/kg灌胃，灌胃，1次次/d，0.2ml/只，只，連續(xù)連續(xù)6天，于末次給藥后天，于末次給藥后1小小時，將時，將CCl4溶于精制的花生溶于精制的花生油中，配成油中，配成0.35%的的CCl4花花生油溶液，按生油溶液，按0.1ml/10g的的劑量灌胃建立急性肝損傷模型劑量灌胃建立急性肝損傷模型。正常對照組灌胃等量生理鹽。正常對照組灌胃等量生理鹽水，禁食不禁

7、水，水，禁食不禁水，24h后：后：a摘眼球取血，摘眼球取血，分離血清分離血清3000r/min，離心，離心10min，分成兩份，分成兩份，4保存?zhèn)溆?；保存?zhèn)溆?；b取肝臟分成取肝臟分成兩份。一部分放在兩份。一部分放在10%福爾馬林固定，福爾馬林固定，另一部分做成肝勻漿，取另一部分做成肝勻漿，取0.5g肝組織，肝組織，剪碎、放入玻璃勻漿器中，將預(yù)冷的剪碎、放入玻璃勻漿器中，將預(yù)冷的9倍倍體積的體積的0.9%生理鹽水勻漿，生理鹽水勻漿，3000r/min，離心，離心10min，上清液分，上清液分成兩份成兩份4保存?zhèn)溆谩１４鎮(zhèn)溆?。實驗步驟實驗步驟1、4mol/l氫氧化鈉與蒸餾水按氫氧化鈉與蒸餾水按1:

8、9的比例稀釋配成的比例稀釋配成0.4mol/L的氫氧化鈉液的氫氧化鈉液2、測定管測定管對照管對照管血清（血清（l）5基質(zhì)液（基質(zhì)液（l）2525混勻后，混勻后，37，水浴，水浴30min2，4-二硝基苯肼二硝基苯肼液（液（l）2525血清（血清（l）5混勻后，混勻后，37，水浴，水浴20min0.4mol/L氫氧氫氧化鈉液（化鈉液（l）250250實驗數(shù)據(jù)實驗數(shù)據(jù)高劑量組高劑量組中劑量組中劑量組低劑量組低劑量組正常組正常組模版組模版組聯(lián)苯雙酯組聯(lián)苯雙酯組測定組測定組對照組對照組測定組測定組對照組對照組測定組測定組對照組對照組測定組測定組對照組對照組測定組測定組對照組對照組測定組測定組對照組對照

9、組0.6160.270.4320.3460.370.2630.4380.311.6021.1350.470.3360.3490.2610.4090.350.5870.2910.6040.331.3741.2710.4940.3390.4030.3160.4110.3540.3980.2970.4240.3721.2521.2560.4780.2790.7580.3250.4420.360.6650.3490.4580.3460.8651.1510.3890.2610.8210.3440.3260.280.4140.340.3970.341.1681.1970.3730.3290.4240.32

10、50.3740.2930.7550.3570.3360.3840.7540.9920.3910.3570.6130.2720.4070.3030.3970.250.3830.3560.7570.3480.3420.2830.6310.3740.550.2920.6230.3210.4250.350.4990.351空白空白0.0440.0411、數(shù)據(jù)統(tǒng)計、數(shù)據(jù)統(tǒng)計實驗數(shù)據(jù)采用實驗數(shù)據(jù)采用SPSS（版本（版本11.5）軟件的）軟件的Independent-Samples T test 算法算法進行統(tǒng)計，以進行統(tǒng)計，以xSD表示，模型對照組與表示，模型對照組與其他各組血清酶的差異顯著性水平設(shè)為其他各組血清酶的差異顯著性水平設(shè)為0.052、預(yù)期結(jié)果、預(yù)期結(jié)果3、實驗結(jié)果、實驗結(jié)果通過查標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力單位通過查標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力單位高劑量組高劑量組中劑量組中劑量