研究黃芪精中黃芪甲苷

1、研究黃芪精中黃芪甲苷揚揚 子子 江江 藥藥 業(yè)業(yè) 集集 團團揚揚 子子 江江 藥藥 業(yè)業(yè) 集集 團團研究黃芪精中黃芪甲苷二.小組概況( (一一) )小組簡介小組簡介 小組名稱小組名稱飛躍飛躍QCQC小組小組課題注冊號課題注冊號TZ2005015TZ2005015課題類型課題類型創(chuàng)新型創(chuàng)新型小組成員小組成員8 8人人成立時間成立時間2005.102005.10活動時間活動時間2005.102005.102006.42006.4課題名稱課題名稱研究黃芪精中黃芪甲苷含量測定的新方法研究黃芪精中黃芪甲苷含量測定的新方法活動次數(shù)活動次數(shù)1919次次出勤率出勤率100%100%制表人：張集盤制表人：張集盤

2、 日期：日期：2006.3 .202006.3 .20揚揚 子子 江江 藥藥 業(yè)業(yè) 集集 團團研究黃芪精中黃芪甲苷(二)QC小組成員一覽表序號序號姓名姓名性別性別受教育情況受教育情況職務職務組內(nèi)分工組內(nèi)分工1張集盤張集盤男男大專大專標準研究員標準研究員組長，資料整理組長，資料整理2黃新蘭黃新蘭女女本科，工程師，質(zhì)量本科，工程師，質(zhì)量管理工程師管理工程師QC主管主管副組長，技術(shù)指導副組長，技術(shù)指導3馬馬 軍軍男男大專大專標準研究員標準研究員方案實施方案實施4盧晶晶盧晶晶女女本科本科標準研究員標準研究員方案實施，成果匯報方案實施，成果匯報5陸莉娟陸莉娟女女大專大專標準研究員標準研究員方案實施方案實

3、施6祖若玉祖若玉女女大專大專標準研究員標準研究員方案實施方案實施7牛牛 萍萍女女碩士，高工，質(zhì)量管碩士，高工，質(zhì)量管理工程師理工程師質(zhì)管經(jīng)理質(zhì)管經(jīng)理技術(shù)指導技術(shù)指導8季洪英季洪英女女大專，工程師，質(zhì)量大專，工程師，質(zhì)量管理工程師管理工程師質(zhì)管部長質(zhì)管部長技術(shù)指導技術(shù)指導制表人：張集盤制表人：張集盤 日期：日期：2006.3.20研究黃芪精中黃芪甲苷三選擇課題三選擇課題1.薄層掃描法測定黃芪精中黃芪甲苷含量的缺陷分析薄層掃描法測定黃芪精中黃芪甲苷含量的缺陷分析基線不基線不穩(wěn)定穩(wěn)定耗時長耗時長易出現(xiàn)易出現(xiàn)鬼峰鬼峰偏差大偏差大缺陷缺陷研究黃芪精中黃芪甲苷1.1.掃描時基線不穩(wěn)定掃描時基線不穩(wěn)定研究黃

4、芪精中黃芪甲苷1.2.容易出現(xiàn)鬼峰容易出現(xiàn)鬼峰研究黃芪精中黃芪甲苷1.3.檢測偏差大，方法的準確性較差檢測偏差大，方法的準確性較差研究黃芪精中黃芪甲苷v1.4.薄層板展開耗時長，且一塊薄層板只能點一個薄層板展開耗時長，且一塊薄層板只能點一個批號的供試品，檢測批次很有限，導致出成品檢測批號的供試品，檢測批次很有限，導致出成品檢測報告的周期較長。報告的周期較長。v1.5.按照部頒標準，以薄層掃描法按照部頒標準，以薄層掃描法 （TLCS）對黃）對黃芪精中黃芪甲苷進行含量測定，結(jié)果如下。芪精中黃芪甲苷進行含量測定，結(jié)果如下。研究黃芪精中黃芪甲苷黃芪精按部頒標準含量測定結(jié)果黃芪精按部頒標準含量測定結(jié)果批

5、批 號號含量（含量（mgml-1）含量平均值含量平均值（mgml-1）相對平均偏差相對平均偏差（%）030301-10.114120.105260.109694.1030401-10.110680.106490.108582.0030501-10.126550.119450.123002.9030601-10.120410.113520.116963.0030702-10.129010.119300.124164.0030801-10.125070.133710.129393.4制表人：張集盤制表人：張集盤 日期：日期：2005.11.3TLCS法測定本品含量時偏差大，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制。法

6、測定本品含量時偏差大，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制。研究黃芪精中黃芪甲苷2.課題確定課題確定 研究研究黃芪黃芪精中精中黃芪黃芪甲苷甲苷含量含量測定測定的新的新方法方法可供直接借鑒的方法少可供直接借鑒的方法少黃芪化學成分復雜黃芪化學成分復雜黃芪為君藥黃芪為君藥黃芪甲苷為主要有效成分黃芪甲苷為主要有效成分研究黃芪精中黃芪甲苷四四.設(shè)定目標設(shè)定目標v擬制定黃芪精中黃芪甲苷含量擬制定黃芪精中黃芪甲苷含量測定的新方法的回收率不低于測定的新方法的回收率不低于90%；含量測定結(jié)果的相對平；含量測定結(jié)果的相對平均偏差小于均偏差小于2.0%。研究黃芪精中黃芪甲苷五提出并選擇最佳方案五提出并選擇最佳方案v 1.提出方案提

7、出方案v（1）HPLC-UV（高效液相色譜（高效液相色譜-紫外檢測器）法紫外檢測器）法v（2）HPLC-RI（高效液相色譜（高效液相色譜-示差折光檢測器）法示差折光檢測器）法v（3）HPLC-ELSD（高效液相色譜（高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器）法蒸發(fā)光散射檢測器）法研究黃芪精中黃芪甲苷 2.方案的分析、評估與確定方案的分析、評估與確定序序號號方方 案案 內(nèi)內(nèi) 容容原原 理理 分分 析析評估人評估人方方 案案 評評 估估綜綜合合得得分分方案方案選定選定可操作可操作性性準確準確性性經(jīng)濟經(jīng)濟性性1HPLC-UV（高效液相色譜（高效液相色譜-紫外檢測器）紫外檢測器）法法利用黃芪甲利用黃芪甲苷在苷在

8、203nm處有末端吸處有末端吸收的原理收的原理,建立以乙腈建立以乙腈-水水（32：68）為流動相的為流動相的HPLC-UV法法張集盤張集盤44因在因在203nm處干處干擾大擾大不選不選黃新蘭黃新蘭馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶陸莉娟陸莉娟祖若玉祖若玉牛牛 萍萍季洪英季洪英研究黃芪精中黃芪甲苷序序號號方方 案案 內(nèi)內(nèi) 容容原原 理理 分分 析析評估人評估人方方 案案 評評 估估綜綜合合得得分分方案方案選定選定可操作可操作性性準確準確性性經(jīng)濟經(jīng)濟性性2HPLC- RI（高效液相色（高效液相色譜譜-示差折光示差折光檢測器）檢測器）法法樣品組分折樣品組分折射率與流動射率與流動相溶劑折射相溶劑折射率有差異，率有

9、差異，當組分洗脫當組分洗脫出來時，會出來時，會引起流動相引起流動相折射率的變折射率的變化，該變化化，該變化與樣品組分與樣品組分的濃度成正的濃度成正比比 張集盤張集盤 32因靈因靈敏度敏度不高不高不選不選黃新蘭黃新蘭 馬馬 軍軍 盧晶晶盧晶晶 陸莉娟陸莉娟 祖若玉祖若玉 牛牛 萍萍 季洪英季洪英 研究黃芪精中黃芪甲苷序序號號方方 案案 內(nèi)內(nèi) 容容原原 理理 分分 析析評估人評估人方方 案案 評評 估估綜綜合合得得分分方案選方案選定定可操作可操作性性準確準確性性經(jīng)濟經(jīng)濟性性3HPLC-ELSD （高效液相色（高效液相色譜譜-蒸發(fā)光散射蒸發(fā)光散射檢測器）檢測器）法法 ELSD可以可以對所有揮發(fā)對所有

10、揮發(fā)性低于流動性低于流動相的物質(zhì)作相的物質(zhì)作出準確檢測出準確檢測,而與被檢測而與被檢測物質(zhì)的化學物質(zhì)的化學基團關(guān)系不基團關(guān)系不大大,響應值響應值與樣品的質(zhì)與樣品的質(zhì)量成正比量成正比張集盤張集盤76因檢測因檢測范圍廣、范圍廣、靈敏度靈敏度高，故高，故選定選定黃新蘭黃新蘭馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶陸莉娟陸莉娟祖若玉祖若玉牛牛 萍萍 季洪英季洪英 備注：可操作性、準確性、經(jīng)濟性三個指標均以備注：可操作性、準確性、經(jīng)濟性三個指標均以1分（分（一般）、一般）、3分（分（良好）、良好）、5分（分（顯著）為評分標準，上述綜合得分為顯著）為評分標準，上述綜合得分為QC小組成員所評分數(shù)的總和。小組成員所評分數(shù)的總和

11、。研究黃芪精中黃芪甲苷3.確定方案的采用順序確定方案的采用順序（3）HPLC-ELSD（高效液相色譜高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器）法蒸發(fā)光散射檢測器）法（1）HPLC-UV（高效液相色譜（高效液相色譜-紫外檢測器）法紫外檢測器）法（2）HPLC-RI（高效液相色譜（高效液相色譜-示差折光檢測器）法示差折光檢測器）法P DCA研究黃芪精中黃芪甲苷六制定對策六制定對策 根據(jù)以上選擇的最佳方案制訂對策表根據(jù)以上選擇的最佳方案制訂對策表對對 策策目目 標標措措 施施地地 點點時時 間間負責人負責人色譜條件色譜條件的確定的確定峰形對稱，目標峰形對稱，目標峰與相鄰峰分離峰與相鄰峰分離度不小于度不小于1.

12、5，保，保留時間適中留時間適中對不同的色譜柱、流動對不同的色譜柱、流動相、流速等進行摸索，相、流速等進行摸索，盡量與藥典中黃芪藥材盡量與藥典中黃芪藥材含量測定的色譜條件劃含量測定的色譜條件劃一一儀器室儀器室05.11.2105.11.28張集盤張集盤馬馬 軍軍供試品前供試品前處理方法處理方法的選擇的選擇有效地提取目標有效地提取目標物且操作方便物且操作方便摸索科學、準確的供試摸索科學、準確的供試品前處理方法，盡量與品前處理方法，盡量與藥典中黃芪藥材含量測藥典中黃芪藥材含量測定的前處理方法劃一定的前處理方法劃一儀器室儀器室05.12.0505.12.17張集盤張集盤馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶陸莉娟陸莉

13、娟研究黃芪精中黃芪甲苷對對 策策目目 標標措措 施施地地 點點時時 間間負責人負責人線性關(guān)線性關(guān)系的確系的確定定 相關(guān)系數(shù)大于相關(guān)系數(shù)大于0.9990配制至少配制至少5個個系列濃度，選系列濃度，選擇適當?shù)那€擇適當?shù)那€擬和類型進行擬和類型進行確定確定 儀器室儀器室 06.01.0506.01.20 張集盤張集盤馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶精密度精密度試驗試驗 峰面積的相對峰面積的相對標準偏差標準偏差RSD2.0% 同一供試品至同一供試品至少連續(xù)進樣少連續(xù)進樣5次，考查色譜次，考查色譜峰面積的相對峰面積的相對標準偏差標準偏差（RSD） 儀器室儀器室 06.02.0506.02.11 張集盤張集盤馬馬

14、 軍軍祖若玉祖若玉研究黃芪精中黃芪甲苷對對 策策目目 標標措措 施施地地 點點時時 間間負責人負責人重復性重復性試驗試驗 含量測定結(jié)果的含量測定結(jié)果的相對標準偏差相對標準偏差RSD2.0%同一批號的供同一批號的供試品同一人同試品同一人同一儀器平行操一儀器平行操作作6份，考查含份，考查含量測定結(jié)果的量測定結(jié)果的相對標準偏差相對標準偏差（RSD） 儀器室儀器室 06.02.1306.02.18 張集盤張集盤穩(wěn)定性穩(wěn)定性試驗試驗峰面積的相對標峰面積的相對標準偏差準偏差RSD2.0% 同一供試品分同一供試品分別在別在0、2、4小時進樣小時進樣分析，考查色分析，考查色譜峰面積的相譜峰面積的相對標準偏差對

15、標準偏差（RSD）儀器室儀器室 06.02.2006.02.23 張集盤張集盤馬馬 軍軍盧晶晶盧晶晶祖若玉祖若玉 研究黃芪精中黃芪甲苷對對 策策目目 標標措措 施施地地 點點時時 間間負責人負責人方法回收方法回收率試驗率試驗 方法回收率不低方法回收率不低于于90% 同一批號已知同一批號已知含量的供試品含量的供試品加入適量的對加入適量的對照品（或?qū)φ照掌罚ɑ驅(qū)φ掌啡芤海┢叫衅啡芤海┢叫胁僮鞑僮?份，考查份，考查方法回收率方法回收率 儀器室儀器室 06.02.2506.03.10張集盤張集盤馬馬 軍軍陸莉娟陸莉娟 制表人：張集盤制表人：張集盤 日期：日期：2005.11.4研究黃芪精中黃芪甲苷七對

16、策實施七對策實施實施一：色譜條件的確定實施一：色譜條件的確定1.儀器與試藥儀器與試藥 Agilent1100高效液相色譜儀；高效液相色譜儀；Attech2000蒸發(fā)光蒸發(fā)光散射檢測器；梅特勒散射檢測器；梅特勒AG285電子天平。電子天平。 黃芪精黃芪精；天津農(nóng)藥總廠天津農(nóng)藥總廠D101型大孔吸附樹脂；甲醇、型大孔吸附樹脂；甲醇、乙腈為色譜純；乙腈為色譜純；95%乙醇為分析純；水為超純水。乙醇為分析純；水為超純水。研究黃芪精中黃芪甲苷2.對照品溶液的制備對照品溶液的制備v取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解，配制成取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解，配制成0.1 mgml-1的對照品溶液。的對照品溶液

17、。3.供試品溶液的制備供試品溶液的制備v精密量取本品精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水，置分液漏斗中，加水10ml，搖，搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次次，每次20ml，合，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次次，每次20ml，棄，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇10ml使溶解，使溶解，0.45 m有機系微孔濾膜濾過，即得有機系微孔濾膜濾過，即得。研究黃芪精中黃芪甲苷4.色譜條件的確定色譜條件的確定研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖1色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-

18、C18柱（柱（4.6150 mm，5m）流動相：乙腈流動相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.2mlmin-1min24681012mAu100200300400500600700 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ21528.D) 1.405 7.917研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖2色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5m）流動相：乙腈流動相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.0 mlmin-1min2468101214mAu150200250300350400

19、450 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ11038.D) 1.406 1.848 2.463 2.738 3.088 3.281 10.198研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖3色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5m）流動相：乙腈流動相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：0.9 mlmin-1min24681012mAu20040060080010001200 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ25055.D) 1.482 11.243研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選

20、圖色譜條件篩選圖4色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5 m）流動相：乙腈流動相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：0.9 mlmin-1min24681012mAu25050075010001250150017502000 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ25019.D) 1.427 1.853 2.814 3.315 3.507 4.446 11.265 12.380研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖5色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5m）流動相：乙

21、腈流動相：乙腈-水水 (32：68)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.0 mlmin-1min2468101214mAu200250300350400450500550 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ11185.D) 1.494 10.575 - Astragaloside 研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖6色譜柱：色譜柱：Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5 m）流動相：乙腈流動相：乙腈-水水 (32：68)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.0 mlmin-1min24681012mAu200250300350400 ADC1

22、 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ11215.D) 1.485 1.877 2.786 3.150 3.345 10.453 - Astragaloside 研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件篩選圖色譜條件篩選圖7色譜柱：色譜柱：Dikma DiamonsilTM（鉆石）（鉆石）C18柱柱(4.6250 mm,5 m)流動相：乙腈流動相：乙腈-水水 (40：60)柱溫：柱溫：40流速：流速：1.0 mlmin-1min2.557.51012.51517.5mAu02505007501000125015001750 ADC1 A, ADC1 CHANNEL A (ZJPHQJ0000

23、1.D) 2.294 10.117 17.536 19.273研究黃芪精中黃芪甲苷色譜條件選擇情況匯總表色譜條件選擇情況匯總表制表人：馬軍制表人：馬軍 日期：日期：2005.11.20色譜柱色譜柱流動相流動相不同流速（不同流速（mlmin-1）下的）下的對照品溶液色譜峰分離情況對照品溶液色譜峰分離情況不同流速（不同流速（mlmin-1）下的）下的供試品溶液色譜峰分離情況供試品溶液色譜峰分離情況0.91.01.20.91.01.2Agilent XDB-C18柱柱（4.6150 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (40：60)峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5

24、，保留時間適，保留時間適中中峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，保留時間適，保留時間適中中Dikma DiamonsilTM（鉆石）（鉆石）C18柱柱（4.6250 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (40：60)峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10min峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10minAgilent XDB-C18柱柱（4.6150 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (32：68)峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰

25、分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10min峰形對稱；目標峰與相鄰峰峰形對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于分離度大于1.5，tR R10min10minDikma DiamonsilTM（鉆石）（鉆石）C18柱柱（4.6250 mm，5 m）乙腈乙腈-水水 (32：68)峰形較對稱；目標峰與相鄰峰形較對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于峰分離度大于1.5，tR R10min10min峰形較對稱；目標峰與相鄰峰形較對稱；目標峰與相鄰峰分離度大于峰分離度大于1.5，tR R10min10min研究黃芪精中黃芪甲苷v 因此，可以選擇因此，可以選擇Agilent XDB-C18柱柱（4.6150 m

26、m，5 m）、以、以乙腈乙腈-水水 (32：68)為流動相為流動相，流速為流速為1.0 mlmin-1進行后續(xù)進行后續(xù)試驗。試驗。研究黃芪精中黃芪甲苷實施二：供試品前處理方法的選擇實施二：供試品前處理方法的選擇1.供試品溶液的制備供試品溶液的制備精密量取本品精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水，置分液漏斗中，加水10ml，搖勻，用，搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次次，每次20ml，合并正丁醇液，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌用氨試液充分洗滌2次，每次次，每次20ml，棄去氨液，正丁醇液蒸，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水干，殘渣加水5ml使溶解，放冷，通過使溶

27、解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂型大孔吸附樹脂柱，以水柱，以水50ml洗脫，棄去水液，再用洗脫，棄去水液，再用A乙醇乙醇30ml洗脫，洗脫，棄去洗脫液，繼用棄去洗脫液，繼用B乙醇乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。濾過，即得。研究黃芪精中黃芪甲苷2.提取分離條件的確定提取分離條件的確定收集上述水液和各擬棄去的乙醇洗脫液，蒸收集上述水液和各擬棄去的乙醇洗脫液，蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液干，加甲醇適量使溶解，得溶液C按照上述按照上述色譜條件分別進樣色譜條件

28、分別進樣20 l，記錄色譜峰面積。，記錄色譜峰面積。研究黃芪精中黃芪甲苷各擬棄去的乙醇洗脫液蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液各擬棄去的乙醇洗脫液蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液C水液水液30%40%50%60%70%80%95%黃芪甲黃芪甲苷峰檢苷峰檢出情況出情況未檢未檢出出未檢未檢出出檢出檢出量較量較小小檢出檢出量較量較大大檢出檢出量最量最大大未檢未檢出出未檢未檢出出未檢未檢出出制表人制表人:盧晶晶盧晶晶 日期日期:2005.12.10研究黃芪精中黃芪甲苷v試驗結(jié)果表明：（試驗結(jié)果表明：（1）棄去的水液中目）棄去的水液中目標物無損失；（標物無損失；（2）當）當A=40，即采用，即采用40%乙醇洗

29、脫時，目標物有損失；（乙醇洗脫時，目標物有損失；（3）當當B=60，即繼續(xù)采用，即繼續(xù)采用60%乙醇洗脫時，乙醇洗脫時，則目標物洗脫不完全。則目標物洗脫不完全。v因此因此確定確定A%、B%的最佳值分別為：的最佳值分別為：30%、70%，并以此值確定的提取分離，并以此值確定的提取分離條件進行后續(xù)方法學的驗證。條件進行后續(xù)方法學的驗證。研究黃芪精中黃芪甲苷實施三：線性關(guān)系的確定實施三：線性關(guān)系的確定v取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解并稀釋至取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解并稀釋至8個系列濃度個系列濃度, 分別進樣分別進樣10 l，測定峰面積，測定峰面積，以對照品濃度以對照品濃度X(mgml-1)的

30、的lg值為橫坐標，峰值為橫坐標，峰面積積分值面積積分值Y的的lg值為縱坐標進行線性回歸，值為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程：得回歸方程： Y=0.1819X+1.9515 r=0.9992研究黃芪精中黃芪甲苷工作曲線工作曲線評價：評價：結(jié)果表明黃芪甲苷在結(jié)果表明黃芪甲苷在76.560255.20 gml-1 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。研究黃芪精中黃芪甲苷實施四：精密度試驗實施四：精密度試驗取同一供試品溶液，在上述色譜條件下重復取同一供試品溶液，在上述色譜條件下重復進樣進樣6次，每次次，每次10 l，測得黃芪甲苷色譜峰，測得黃芪甲苷色譜峰峰面積平均值為峰面積平均值為978.5788

31、3，RSD為為0.5%。研究黃芪精中黃芪甲苷制表人：祖若玉制表人：祖若玉 日期：日期：2006.2.7進樣次數(shù)進樣次數(shù)峰面積峰面積峰面積平均值峰面積平均值RSD（%）1977.09442978.578830.52980.079413975.409004986.095835976.362926976.43140研究黃芪精中黃芪甲苷繪圖人：祖若玉繪圖人：祖若玉 日期：日期：2006.2.7評價：精密度良好，達到預期目標。評價：精密度良好，達到預期目標。研究黃芪精中黃芪甲苷實施五：重復性試驗實施五：重復性試驗取同一批號樣品，制備取同一批號樣品，制備6份供試品溶液，分份供試品溶液，分別精密吸取對照品溶

32、液別精密吸取對照品溶液10l、20l，供試，供試品溶液品溶液10l，注入液相色譜儀，測定峰面，注入液相色譜儀，測定峰面積值，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得積值，以外標兩點法對數(shù)方程計算，即得黃芪甲苷的含量。黃芪甲苷的含量。研究黃芪精中黃芪甲苷重復性試驗結(jié)果重復性試驗結(jié)果試驗次數(shù)試驗次數(shù)含量含量（mgml-1）含量平均值含量平均值（mgml-1）RSD（%）10.1234380.1223571.20.12196820.1233660.12376830.1238620.12227040.1211760.12373450.1211650.11947860.1209460.123113制表人：張集盤制

33、表人：張集盤 日期：日期：2006.2.14研究黃芪精中黃芪甲苷 繪圖人：張集盤繪圖人：張集盤 日期：日期：2006.2.14評價：重復性試驗評價：重復性試驗RSD為為1.2%，達到預期目標。，達到預期目標。 研究黃芪精中黃芪甲苷實施六：穩(wěn)定性試驗實施六：穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，于取同一供試品溶液，于0、2、4、6、12、14 h分別精密吸取分別精密吸取10 l注入液相色譜儀分注入液相色譜儀分析，測得峰面積值，計算析，測得峰面積值，計算RSD。 研究黃芪精中黃芪甲苷穩(wěn)定性試驗結(jié)果穩(wěn)定性試驗結(jié)果進樣時間進樣時間（h）峰面積峰面積峰面積平均值峰面積平均值RSD（%）01071.51477106

34、9.388771.821064.4517841077.6015661053.73657121098.48413141043.48083制表人：盧晶晶制表人：盧晶晶 日期：日期：2006.2.20研究黃芪精中黃芪甲苷繪圖人：盧晶晶繪圖人：盧晶晶 日期：日期：2006.2.20 評價：上述結(jié)果表明供試品溶液在評價：上述結(jié)果表明供試品溶液在14 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。內(nèi)穩(wěn)定性良好。研究黃芪精中黃芪甲苷實施七：方法回收率試驗實施七：方法回收率試驗 v精密吸取已知含量同一批號樣品精密吸取已知含量同一批號樣品5 ml，6份，份，分別精密加入已知濃度的對照品溶液分別精密加入已知濃度的對照品溶液5 ml，制備溶液，

35、分別進樣制備溶液，分別進樣10 l，測得峰面積值，測得峰面積值， 計算平均回收率和計算平均回收率和RSD。研究黃芪精中黃芪甲苷回收率測定結(jié)果（回收率測定結(jié)果（n = 6）取樣量取樣量（ml）樣品含量樣品含量（mg）加入量加入量（mg）測得量測得量（mg）回收率回收率（%）平均值平均值（%）RSD（%）50.8219550.52701.3168893.9196.761.911.3248795.4350.8219550.52701.3455599.351.3418698.6550.8219550.52701.3305796.511.3396498.2350.8219550.52701.335269

36、7.401.3371497.7650.8219550.52701.3218994.861.3219794.8850.8219550.52701.3432198.911.3241195.29制表人：張集盤制表人：張集盤 日期：日期：2006.2.26研究黃芪精中黃芪甲苷評價：平均回收率為評價：平均回收率為96.76%，RSD為為1.91%，表明方，表明方法準確度良好，可以用于本品的定量分析。法準確度良好，可以用于本品的定量分析。研究黃芪精中黃芪甲苷評價評價v1.初步評價初步評價v建立了黃芪精中黃芪甲苷含量測定的新方法，建立了黃芪精中黃芪甲苷含量測定的新方法，方法學研究符合方法學研究符合中國藥典中

37、國藥典2005年版（一部）年版（一部）附錄附錄“中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則”。研究黃芪精中黃芪甲苷v2.綜合評價綜合評價 取本品取本品3批，將兩法的含量測定結(jié)果進批，將兩法的含量測定結(jié)果進行對比。行對比。研究黃芪精中黃芪甲苷批號批號含含 量（量（mgml-1）相對平均偏差（相對平均偏差（%）TLCS法法平均值平均值HPLC-ELSD法法平均值平均值TLCS法法HPLC-ELSD法法0.133960.1393240.1304560.1352832.60.70.1332480.127400.1381040.1393240.152920.1585610.1441

38、870.1512221.91.20.1442410.147310.1578980.1585610.148710.1541390.1454340.1496721.80.70.1460540.143720.1530620.154139研究黃芪精中黃芪甲苷繪圖人：陸莉娟繪圖人：陸莉娟 日期：日期：2006.3.9研究黃芪精中黃芪甲苷v評價：評價：采用采用HPLC- ELSD法測定黃芪精中法測定黃芪精中黃芪甲苷含量比采用黃芪甲苷含量比采用TLCS法測定時的相法測定時的相對平均偏差小，測定的結(jié)果較理想。對平均偏差小，測定的結(jié)果較理想。研究黃芪精中黃芪甲苷八八.效果檢查效果檢查v1.效果驗證效果驗證v取不

39、同批號的黃芪精，依法制備供試品溶液，取不同批號的黃芪精，依法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進樣在上述色譜條件下進樣10 l，測得峰面積值，測得峰面積值，并計算黃芪甲苷含量。并計算黃芪甲苷含量。10批樣品含量測定結(jié)果批樣品含量測定結(jié)果見下表。見下表。研究黃芪精中黃芪甲苷10批樣品含量測定結(jié)果（批樣品含量測定結(jié)果（n = 4） 批號批號含量含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值含量平均值（mgmlmgml-1-1）相對平均偏差相對平均偏差（% %）0.1573570.1573570.1586400.1586401.11.10.1565360.1565360.1602440.1602440.1

40、604240.1604240.1554750.1554750.1555660.1555660.60.60.1556130.1556130.1539920.1539920.1571840.1571840.1634490.1634490.1643910.1643911.41.40.1611400.1611400.1659520.1659520.1670230.167023研究黃芪精中黃芪甲苷批號批號含量含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值含量平均值（mgmlmgml-1-1）相對平均偏差相對平均偏差（% %）0.1523720.1523720.1525030.1525030.50.50.15

41、13820.1513820.1527150.1527150.1535440.1535440.1433190.1433190.1428430.1428430.80.80.1435370.1435370.1405860.1405860.1439300.1439300.1326390.1326390.1327960.1327960.40.40.1321470.1321470.1335680.1335680.1328280.132828研究黃芪精中黃芪甲苷批號批號含量（含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值（含量平均值（mgmlmgml-1-1）相對平均偏差（相對平均偏差（% %）0.1460670.1460670.1468010.1468010.60.60.1458130.1458130.1478130.1478130.1475110.1475110.1093570.1093570.1095220.1095220.30.30.1096420.1096420.1