梅毒診斷標準WS—修訂版

1、梅毒診斷標準（W S）修訂版作者: 日期:W S 27 3 -2007梅毒診斷標準i范圍本標準規(guī)定了梅毒的診斷依據(jù)、診斷原則、診斷標準和鑒別診斷。2術語和定義下列術語和定義適用于本標準。2.1 梅毒 Sy p h il i s梅毒是蒼白螺旋體（又名梅毒螺旋體）感染人體所引起的一種系統(tǒng)性、慢性經(jīng)典的性傳播疾病，可累及人體多系統(tǒng)多臟器的損害，產(chǎn)生多種多樣的臨床表現(xiàn)，導致組織破壞、功能失 常，甚至危及生命。2. 2 前帶現(xiàn)象 Pro zone ph en omenon非梅毒螺旋體抗原試驗（如RPR試驗）中,有時由于血清抗體水平過高，抗原抗體比例不 合適，而出現(xiàn)弱陽性、不典型或陰性的結果，但臨床上又有

2、典型的二期梅毒體征，將此血清稀釋后再做血清學試驗，出現(xiàn)了陽性的結果，稱為“前帶現(xiàn)象”。3縮略語下列縮略語適用于本標準。V D RL V en ereal Di s ease R e search Lab o r at ory 性病研究實驗室（玻片試驗） USR U n heate d serum rea gin血清不需加熱的反應素 （玻片試驗）T RUST Tol uid i n e r ed u n heat e d serum te s t 甲苯胺紅血清不需加熱 試驗RP R Rapid p lasma reagi n 快速血漿反應素（環(huán)狀卡片試驗）FTA-ABS Fluore s cen

3、t trepo nem al ant ibo dy- a bso rpti on 熒光螺旋體抗體吸收 （試驗）T PH A T re p o ne ma p a lli d u m h ema g gluti n ati o n ass a y梅毒螺旋體血凝試驗T PP A Trep on ema pallidum p a rti cl e a g gluti n ation a s say 梅毒螺旋體顆 粒凝集試驗4診斷依據(jù)4. 1 一期梅毒4.1. 1流行病學史：有多性伴，不安全性行為，或性伴感染史。4 .1 . 2臨床表現(xiàn)：4.1.2 .1硬下疳：潛伏期一般為24周。一般為單發(fā)，但也可多

4、發(fā)；直徑約 1 c m2c m, 圓形或橢圓形淺在性潰瘍，界限清楚、邊緣略隆起，瘡面清潔；觸診基底堅實、浸潤明顯，呈軟骨樣的硬度；無明顯疼痛或觸痛。多見于外生殖器部位。4 .1.2.2 腹股溝或患部近衛(wèi)淋巴結腫大：可為單側或雙側，無痛，相互孤立而不粘連，質硬不化膿破潰，其表面皮膚無紅、腫、熱。4 .1.3 實驗室檢查：4.1.3.1暗視野顯微鏡檢查：皮膚黏膜損害或淋巴結穿刺液可查見梅毒螺旋體（見附錄A）。4. 1 . 3.2非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性。如感染不足 23周，該試驗可為陰性，應于感染4周后復查（見附錄A）。4 .1.3.3梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性（見附錄A）。4. 2二

5、期梅毒4.2. 1流行病學史：有多性伴，不安全性行為，或性伴感染史，或有輸血史（早期梅毒病人為 供血者）。4.2.2臨床表現(xiàn)：可有一期梅毒史，病期在2年以內。42 2 .1皮損呈多形性，包括斑疹、斑丘疹、丘疹、鱗屑性皮損、毛囊疹及膿皰疹等，常泛發(fā)對稱。掌跖部易見暗紅斑及脫屑性斑丘疹。外陰及肛周皮損多為濕丘疹及扁平濕疣。皮損一般無自覺癥狀，可有瘙癢?？谇豢砂l(fā)生黏膜斑?？砂l(fā)生蟲蝕樣脫發(fā)。二期復發(fā)梅毒，皮損局限，數(shù)目較少，皮損形態(tài)奇異，常呈環(huán)狀或弓形。4 2 2. 2全身淺表淋巴結腫大。4.2 . 2 .3可出現(xiàn)梅毒性骨關節(jié)損害、眼損害、內臟及神經(jīng)系統(tǒng)損害等。4.2. 3實驗室檢查：4.2. 3.1

6、暗視野顯微鏡檢查：二期皮損尤其扁平濕疣、濕丘疹及黏膜斑，易查見梅毒螺旋體（見附錄A ）。4.2.3.2 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性（見附錄A） 。4.2.3. 3 梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性（見附錄A）。4.3三期梅毒（晚期梅毒）4 .3. 1 流行病學史：有多性伴，不安全性行為，或性伴感染史。4 .3.2臨床表現(xiàn)：可有一期或二期梅毒史。病期2年以上。4. 3.2.1晚期良性梅毒-皮膚黏膜損害：頭面部及四肢伸側的結節(jié)性梅毒疹，大關節(jié)附近的近關節(jié)結節(jié)，皮膚、口腔、舌咽的樹膠腫，上腭及鼻中隔粘膜樹膠腫可導致上腭及鼻中隔穿孔和鞍鼻。-骨梅毒，眼梅毒，其他內臟梅毒，累及呼吸道、消化道、肝脾、

7、泌尿生殖系、內分泌腺 及骨骼肌等。4.3 .2.2神經(jīng)梅毒，可發(fā)生梅毒性腦膜炎、腦血管栓塞、麻痹性癡呆、脊髓癆等。4. 3.2 .3 心血管梅毒，可發(fā)生單純性主動脈炎、主動脈瓣閉鎖不全、主動脈瘤等。4.3.3實驗室檢查：4. 3.3.1非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性（見附錄A）。4.3.3. 2梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性（見附錄 A ）。4.3.3. 3 腦脊液檢查：白細胞計數(shù)10X 106/L,蛋白量50 0 m g /L,且無其他引起這些異常 的原因。腦脊液 VD RL試驗或FTA- A BS試驗陽性（見附錄 A）。4.3.3 .4 組織病理檢查：有三期梅毒的組織病理變化（見附錄 A

8、）。4.4隱性梅毒（潛伏梅毒）4. 4. 1流行病學史：有多性伴，不安全性行為，或性伴感染史。4.4 .2臨床表現(xiàn)：早期隱性梅毒:病期在2年內,根據(jù)下列標準來判斷：在過去2年內，有明確記載的非 梅毒螺旋體抗原試驗由陰轉陽，或其滴度較原先升高達 4倍或更高。在過去 2年內，有符 合一期或二期梅毒的臨床表現(xiàn)。在過去2年內，有與疑似或確診的一期或二期梅毒 ，或疑似早期隱性梅毒的性伴發(fā)生性接觸史。晚期隱性梅毒：病期在2年以上。無證據(jù)表明在既往2年中獲得感染。無法判斷病期者 亦視為晚期隱性梅毒處理。無論早期隱性梅毒或晚期隱性梅毒，均無任何梅毒性的癥狀和體征。4.4.3 實驗室檢查：4.4.3.1非梅毒螺

9、旋體抗原血清學試驗：對于無既往梅毒史者，非梅毒螺旋體抗原試驗陽性（滴 度一般在1:8以上）。對于有既往梅毒治療史者，與前次非梅毒螺旋體抗原試驗結果相比， 本次試驗結果陽轉或其滴度升高4倍或更高（見附錄 A）。4.4. 3. 2梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性（見附錄A）。4. 4. 3.3腦脊液檢查：無異常發(fā)現(xiàn)。4.5胎傳梅毒（先天梅毒）4.5.1流行病學史：生母為梅毒患者。4.5 . 2臨床表現(xiàn)：4.5. 2.1早期胎傳梅毒：一般在2歲以內發(fā)病，類似于獲得性二期梅毒，發(fā)育不良，皮損常為水皰-大皰、紅斑、丘疹、扁平濕疣；梅毒性鼻炎及喉炎；骨髓炎、骨軟骨炎及骨膜炎；可有全身淋巴結腫大、肝脾腫大、貧

10、血等。4.522晚期胎傳梅毒：一般在2歲以后發(fā)病，類似于獲得性三期梅毒。出現(xiàn)炎癥性損害（間質性角膜炎、神經(jīng)性耳聾、鼻或腭樹膠腫、克勒頓關節(jié)、脛骨骨膜炎等）或標記性損害（前 額圓凸、馬鞍鼻、佩刀脛、鎖胸關節(jié)骨質肥厚、赫秦生齒、腔口周圍皮膚放射狀裂紋等 ）。4. 5.2 .3胎傳隱性梅毒:即胎傳梅毒未經(jīng)治療，無臨床癥狀，梅毒血清學試驗陽性，腦脊液檢查正 常，年齡小于2歲者為早期胎傳隱性梅毒，大于2歲者為晚期胎傳隱性梅毒。4. 5.3實驗室檢查：4.5. 3 .1暗視野顯微鏡檢查：在早期胎傳梅毒兒的皮膚黏膜損害或胎盤中可查到梅毒螺旋體 （見附錄A ）。4.5.3.2非梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性（

11、見附錄A）。4.5.3 .3梅毒螺旋體抗原血清學試驗：陽性（見附錄 A ）。5診斷原則應根據(jù)病史、臨床癥狀、體檢及實驗室檢查等進行綜合分析，作出診斷。6診斷標準6. 1 一期梅毒6. 1.1 疑似病例 應同時符合4.1 .1,4.1. 2和4 .1.3. 2項。6.1.2 確診病例：應同時符合疑似病例的要求和4.1.3.1、4.1.3. 3中的任一項。6. 2二期梅毒6. 2.1疑似病例：應同時符合4.2.1 , 4. 2.2和4 .2.3.2項。6 .2.2 確診病例：應同時符合疑似病例的要求和4.2.3.1、4. 2.3 . 3中的任一項。6.3三期梅毒（晚期梅毒）6.3. 1疑似病例：應

12、同時符合4.3. 1,4 .3 .2中的任一項和4. 3. 3.1項。6. 3.2確診病例：應同時符合疑似病例的要求和4.3.3 .2、4.3 . 3.3、4 .3.3. 4中的任一項。6 . 4隱性梅毒（潛伏梅毒）6.4. 1疑似病例：應同時符合4.4.1 , 4. 4.2和4 .4 . 3 .1項。6.4.2確診病例：應同時符合疑似病例的要求和4.4.3 .2、4.4 .3.3項。6 .5胎傳梅毒（先天梅毒）6.5. 1疑似病例：應同時符合4.5. 1 , 4. 5.2和4.5.3 . 2項。6.5.2 確診病例：應同時符合疑似病例的要求和4.5.3 . 1、4. 5.3 .3中的任一項。

13、7鑒別診斷7.1 一期梅毒7.1.1硬下疳：需與軟下疳、生殖器皰疹、性病性淋巴肉芽腫、糜爛性龜頭炎、白塞病、固定 型藥疹、癌腫、皮膚結核等發(fā)生在外陰部的紅斑、糜爛和潰瘍鑒別。7. 1.2梅毒性腹股溝淋巴結腫大：需與軟下疳、性病性淋巴肉芽腫引起的腹股溝淋巴結腫 大,以及轉移癌腫鑒別。7.2二期梅毒7.2.1梅毒性斑疹：需與玫瑰糠疹、銀屑病、扁平苔蘚、手足癬、白癜風、花斑癬、藥疹、 多形紅斑、遠心性環(huán)狀紅斑等鑒別。7.2.2 梅毒性丘疹和扁平濕疣：需與銀屑病、體癬、扁平苔蘚、毛發(fā)紅糠疹、尖銳濕疣等 鑒別。723梅毒性膿皰疹：需與各種膿皰病、膿皰瘡、臁瘡、雅司、聚合性痤瘡等鑒別。7.2.4黏膜梅毒疹

14、：需與傳染性單核細胞增多癥、地圖舌、鵝口瘡、扁平苔蘚、化膿性扁桃 體炎等鑒別。7.2.5梅毒性脫發(fā)：需與斑禿鑒別。7.3三期梅毒73 1 結節(jié)性梅毒疹：需與尋常狼瘡、結節(jié)病、瘤型麻風等鑒別。7.3 .2樹膠腫：需與尋常狼瘡、瘤型麻風、硬紅斑、結節(jié)性紅斑、小腿潰瘍、脂膜炎、癌腫 等鑒別。7.3 .3神經(jīng)梅毒:梅毒性腦膜炎需與結核性腦膜炎、隱球菌性腦膜炎、鉤端螺旋體病引起的 腦膜炎等相鑒別。腦膜血管梅毒需與各種原因引起的腦卒中相鑒別。麻痹性癡呆需與腦腫瘤、動脈硬化、阿爾茨海默?。ɡ夏晷园V呆）、慢性酒精中毒和癲癇發(fā)作等相鑒別。脊髓癆需與埃迪（Adie ）綜合征、糖尿病性假脊髓癆等鑒別。7.3.4心血

15、管梅毒：梅毒性主動脈瘤需與主動脈硬化癥相鑒別。梅毒性冠狀動脈病需與冠狀 動脈粥樣硬化相鑒別。梅毒性主動脈瓣閉鎖不全需與感染性心內膜炎、先天性瓣膜畸形等引起的主動脈瓣閉鎖不全相鑒別。附錄A梅毒螺旋體檢查A.1梅毒螺旋體暗視野檢查A .1.1原理暗視野映光檢查是采用一個特殊的聚光器，分為干系和濕系兩種，其中央均為黑漆所遮蔽，僅在圓周邊留有光線斜角處， 光線只可從其圓周邊緣斜角射到載玻片上。梅毒螺旋體檢查一般采用濕系聚光器。倘若斜射光線遇到載玻片上的物體，如螺旋體等，物體會發(fā)光顯現(xiàn)。A.1.2材料暗視野顯微鏡、鈍刀（刮勺）、載玻片、注射器、注射針頭、無菌等滲鹽水。A.1. 3取材A. 1.3 .1皮

16、膚黏膜損害取材：首先在載玻片（厚度為1.01.2mm）上滴加5 0100 L鹽水備用。然后用棉拭子取無菌鹽水輕輕擦去皮損上的污物。如皮損上有痂皮，可用鈍刀小心除去。再用鈍刀輕輕地刮數(shù)次（避免出血），取組織滲液與載玻片上的鹽水混勻，加蓋玻片置暗視野顯微鏡下檢查。A.1.3 . 2淋巴結取材：消毒淋巴結表面皮膚，用無菌干棉球擦干。用1m L無菌注射器配12號針頭，吸取無菌等滲鹽水 0.25 m L0 . 5mL，以無菌操作穿刺淋巴結并注入鹽水，再吸 入注射器內，反復23次后，取少量淋巴液于載玻片上，加蓋玻片，置暗視野顯微鏡下檢查。A.1.4方法A.1. 4 .1.在暗視野聚光器（此法用濕系暗視野聚

17、光器）上加一滴甘油緩沖液（甘油和0. 1mol/L PBS ,p H 7.0 按 7: 3 配制）。A. 1 .4.2載玻片置載物臺上，上升聚光器使甘油緩沖液接觸載玻片，先用10倍物鏡，使物 像清晰，再用40倍物鏡觀察，尋找有特征形態(tài)和運動方式的梅毒螺旋體。A . 1.5結果及解釋A.1. 5. 1暗視野顯微鏡下，典型的梅毒螺旋體呈白色發(fā)光,其螺旋較密而均勻。運動規(guī)律 ,運動性較強，其運動方式包括旋轉式，圍繞其長軸旋轉；蛇行式 ，全身彎曲如蛇行；伸縮其螺旋間距離而移動。觀察其運動形式有助于與其他螺旋體相鑒別。A .1.5.2未檢出螺旋體不能排除梅毒的診斷 ，陰性結果可能說明：螺旋體數(shù)量不足 （

18、單次暗 視野顯微鏡檢查陽性率小于 5 0 %） o患者已接受抗生素或殺滅梅毒螺旋體的藥物治療。 W 損害接近自然消退。損害不是梅毒。A . 2梅毒血清學檢查當人體感染梅毒螺旋體后 41 0周左右，血清中可產(chǎn)生一定數(shù)量的抗類脂質抗原的非特異性反應素（主要是IgM、IgG）和抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體（主要是IgM、I gG）。這些抗體均可用免疫學方法進行檢測。血清學檢查是輔助診斷梅毒的重要手段。根據(jù)檢測所用抗原不同，梅毒血清學試驗分為兩大類：一類為非梅毒螺旋體抗原血清試驗，包括VD RL玻片試驗、U SR玻片試驗、RPR試驗、T RUST試驗，這些試驗主要應用于梅毒的篩查和療效 觀察。另一類為

19、梅毒螺旋體抗原血清試驗，包括T PHA.試驗、TPP A試驗、FTA- A BS試驗、EL ISA試驗等。這些試驗主要用于確證試驗，不用于療效觀察。A.2.1 非梅毒螺旋體抗原血清試驗A .2.1.1 原理梅毒螺旋體一旦感染人體，人體迅速對被損害的宿主細胞以及梅毒螺旋體細胞表面所釋 放的類脂物質作出免疫應答，在34周產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（反應素）。這些抗體主要是IgG 和IgM型混合抗體。非梅毒螺旋體抗原試驗是使用心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原的絮 狀凝集試驗。反應素與心磷脂形成抗原抗體反應，卵磷脂可加強心磷脂的抗原性，膽固醇可增強抗原的敏感性。心磷脂、卵磷脂遇水形成膠體溶液，膽固醇遇水形成結

20、晶。當抗原與抗體（反應素）混合發(fā)生反應時 后者即粘附膠體微粒的周圍，形成疏水性薄膜。由于搖動、碰撞，使顆粒與顆?；ハ嗾掣蕉纬扇庋劭梢姷念w粒凝集和沉淀，即為陽性反應。如遇到非梅毒血清，因體液中的白蛋白多于球蛋白，而白蛋白對膠體顆粒有保護作用，形成親水性薄膜，即使同樣搖動、碰撞，由于抗原顆粒周圍沒有粘附免疫球蛋白的作用，不能形成較大顆粒，無肉 眼可見的凝集和沉淀，因此為陰性反應D RL、US R、RPR和TRUST等試驗均為此類 試驗，它們所采用的抗原成分相同，敏感性和特異性基本相似。A . 2.1 . 2 VDRL玻片試驗A. 2.1 .2. 1 材料a. VDRL試劑盒：含 VDR L抗原（

21、0 .5mL）; VD R L緩沖液，pH 6.0± 0.1,其配方為中 性福爾馬林0 .5mL,Na2HP O 4 0. 0 3 7g, K H 2PO4 0. 17g,N aCI 1 0. 0g,蒸餾水 1000mL ;標準針頭（60 ± 1滴/mL ），直徑1 4mm漆圈玻片;V D RL試驗結果圖片。b .其他：0.8 5% N aCI溶液（等滲鹽水）；可調水平旋轉器。A . 2.1 . 2.2 V DR L抗原配制方法：a. 吸取0 . 3 m L V DRL緩沖液置 3 0 m L小瓶；b. 吸取0 .3mLV D RL抗原迅速滴入小瓶內 VDRL緩沖液中（約4

22、s）,隨后搖動10s,使之混勻；c. 立即加2. 4m L VD RL緩沖液，蓋上瓶蓋，來回顛倒搖動小瓶10 s約30次，即為 VDRL抗原，此抗原只能用 1doA.2.1.2.3定性試驗a. 血清標本需56C滅活3 0 min備用；b. 吸取0.05mL血清放入玻片圈內，將血清涂開至整個圈內；c. 用標準針頭加入1滴抗原；d. 將玻片置旋轉器上搖動 4 mi n,180 ± 5次/m in ,立即置10X 10倍顯微鏡下觀察。A.2. 1.2.4 定量試驗經(jīng)VDRL定性試驗為陽性、弱陽性，可疑反應或陰性但臨床懷疑為梅毒者，需做定量試驗，前者需明確抗體滴度，后者為排除”前帶現(xiàn)象”。a

23、. 在反應板18孔各加等滲鹽水 0.05 m L;b. 吸取0. 05 mL血清標本（血清已滅活）置第1孔與等滲鹽水混勻，吸取0 .05 mL稀釋 液至第2孔混勻，再吸取0. 0 5 m L至第3孔，如此連續(xù)稀釋至第8孔，棄0. 0 5 mL稀釋液。 稀釋度分別為：1： 2、1:4、1:8、1: 16、1:3 2、1: 6 4、1 :128、1: 2 5 6,必要時可稀釋至 更高倍數(shù)。c. 每個稀釋度加入抗原1滴；d. 旋轉速度和時間同定性試驗。A. 2 .1.2 .5 結果大或中等大小的絮狀物，液體清亮：3+4+強陽性反應；絮狀物較小，液體較清亮：2+ 陽性反應；絮狀物較小，均勻分布，液體混

24、濁1+弱陽性反應；抗原顆粒稍粗，無凝集土可疑；抗原顆粒均勻，針狀細?。?陰性反應。A . 2. 1 . 3 RPR環(huán)狀卡片試驗A . 2.1.3. 1 原理R PR試驗是VDRL試驗的一種改良方法。該法是在抗原中加入活性炭顆粒作為指示物 加入了氯化膽堿，因此血清不需滅活。特制的白色紙卡替代了玻片。試驗結果易于判斷 眼即可觀察。也可用血漿進行檢測，試驗結果可保存?？乖?C冰箱可保存1A.2.1 .3. 2 材料a. RP R試劑盒：含 RPR抗原;直徑為18 m m圓圈的特制白色反應卡片 （60 ±1滴/m L）; R PR試驗結果圖片。b.A.2.1 .年。；標準針頭a.10個或其

25、他：可調水平旋轉器。.3定性試驗吸取0.05 mL血清或血漿加于卡片圈內，并均勻地涂布在整個圈內 2個反應圈）；（每張紙卡有1b.將抗原輕輕搖勻，用標準針頭吸取抗原，每個標本加 c .將卡片置水平旋轉器旋轉8d.立即在明亮光線下觀察結果。A .2. 1.3.4 結果中到大的黑色絮狀物，液體清亮小到中的黑色絮狀物，液體較清亮 小的黑色絮狀物，液體混濁1 +1滴抗原；min, 10 0± 5 轉/m in ;3 + 4 +2+陽性弱陽性強陽性僅見活性炭顆粒集于中央一點或均勻分散A . 2.1.3.5定量試驗RPR定量試驗的指證與VD RL試驗相同。a. 在圈內加入0.05 mL等滲鹽水（

26、一般作6b. 吸取0. 05 m L血清或血漿作系列稀釋陰性8個稀釋度），勿將鹽水涂開；（1:2 1:64 ），當稀釋到最后的第 6孔 時，棄去0.05 mL稀釋液。從第6孔起將血清稀釋液涂布整個圈內，再涂布第5孔，依此向 前到第1孔。c.滴加抗原，旋轉時間、速度和觀察結果同定性試驗。A.2. 1 .4 TRUS T試驗A.2.1.4 . 1 原理T RU ST試驗原理與 RP R試驗原理相同。唯 TR UST試驗的抗原中加入甲苯胺紅顆粒代替活性炭顆粒指示物，使陽性結果出現(xiàn)紅色絮狀現(xiàn)象，陰性結果見紅色顆粒集于中央或均勻分散。A .2.1 . 4.2 方法TRUST試驗方法及結果判斷均與R P

27、R試驗相同。A.2.1.5 注意事項A.2.1.5.1實驗環(huán)境溫度應為 2329C,抗原應保存于4C冰箱，試驗前應恢復到室溫?？?原應防止凍結，以免抗原被破壞。A.2 . 1.5.2 校準針頭，VDR L、RPR 和 TRUST 等抗原為6 0± 1 滴 /mL。A . 2.1.5. 3血液標本應防止污染，放置室溫應在2 4 h內完成。如血清56C滅活或放4C保 存，在試驗前應恢復試驗溫度后再開始試驗。A.2 . 1.5 .4 試驗完畢 應立即觀察結果。A.2.1.6臨床意義A .2.1.6 .1 非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡便、快速，敏感性和特異性較好。對一期梅毒的敏感性為 74

28、%87%,二期梅毒達100%，三期梅毒3 4%9 4%。特異性 96%99%。 A . 2.1.6. 2非梅毒螺旋體抗原血清試驗適用于各期梅毒的診斷。早期梅毒經(jīng)治療后血清滴 度可下降或轉陰，故可用于療效觀察、判愈、判定復發(fā)或再感染。也適用于人群的篩查、產(chǎn) 前檢查及健康體檢等。A . 2 .1.6.3 V D RL試驗適用于神經(jīng)梅毒的腦脊液檢查，特異性高，但敏感性低。A.2.1.6.4 非梅毒螺旋體抗原血清試驗可在某些傳染病及膠原病時出現(xiàn)假陽性反應，因此對陽性反應應結合臨床進行鑒別，或作梅毒螺旋體抗原血清試驗以進一步證實之。A . 2.2梅毒螺旋體抗原血清試驗采用梅毒螺旋體作抗原，為特異性抗原，

29、檢測血清中抗梅毒螺旋體IgG或IgM抗體，其敏感性和特異性均較高。A.2. 2 . 1梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）A . 2.2.1.1 原理T PPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結 合，產(chǎn)生可見的凝集反應。明膠顆粒為玫瑰紅色，便于肉眼觀察結果。A. 2 .2 . 1 . 2 材料a . TPPA試劑盒：含蒸餾水（標記A），用于溶解致敏顆粒、未致敏顆粒和質控血清；標本稀釋液（標記B）,用于稀釋血清標本；致敏顆粒（標記 C），冷凍干燥品，用前30 m in按規(guī)定 量加A液溶解并混勻；未致敏顆粒（標記D）,冷凍干燥品，用前30 m i n按規(guī)定量加

30、A液溶 解并混勻；質控血清（標記E），冷凍干燥品，用時按規(guī)定量加入A液。b. 其他:U型微量反應板；微量加樣器（2 5卩L ）;微量滴管（C和D管）;移液管（微量移液管和刻度滴管）；微量板振蕩器。A. 2 .2. 1 .3 定性試驗試驗前試劑應恢復到15C 3 0C。a . B液加至微量反應板孔內，第1孔25 L ,第2孔1 0 0卩L,第3、4孔各25卩L;b. 取血清2 5L加至第1孔，混勻后取2 5卩L至第2孔，混勻后取25卩L至第3 孔，混勻后取25卩L至第4孔，混勻后棄去 25卩L。c. 第3孔加D液（未致敏顆粒）25卩L,第4孔加C液（致敏顆粒）25 L ;d. 將反應板置振蕩器振

31、蕩 30 s；e. 置有蓋濕盒，1525 C避光孵育4 h后，或放4C冰箱過夜觀察結果。A . 2.2 . 1.4定量試驗a .加E液至微量反應板孔，第1孔第4孔與定性試驗相同，第5孔第1 0孔各加25 卩 L;b. 取血清.25卩L加至第1孔,如定性試驗稀釋方法，從第2孔第1 0孔混勻，混勻后第 10孔棄去25卩L;C.第3孔加D液2 5卩L,第4孔第1 0孔各加C液25卩L;d. 以后步驟同定性試驗。結果以最高血清稀釋度能產(chǎn)生陽性反應的稀釋度為抗體滴度。A. 2 .2. 1 .5 結果顆粒光滑覆蓋整個孔底，有時邊緣有折疊陽性 4 +顆粒光滑覆蓋大部分孔底陽性3+顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有

32、一顆粒環(huán)陽性 2+顆粒光滑集聚覆蓋孔底，周圍有一明顯顆粒環(huán)陽性1 +顆粒沉集孔底，中央形成一小點可疑土顆粒緊密沉積孔底中央陰性-A .2.2 . 1 .6報告方法a. 陽性報告：定性試驗，血清在1:80以上稀釋度與致敏顆粒發(fā)生凝集反應（1 +或更強）,與未致敏顆粒（第3孔）不發(fā)生凝集反應。定量試驗則應報告發(fā)生陽性反應的血清最高稀釋度，為血清滴度。b. 陰性報告：血清與致敏顆粒和未致敏顆粒均不發(fā)生凝集反應。A. 2 .2. 1. 7 注意事項a. 微量反應板要清潔干凈，孔內無異物。b. 加入血清后，使用微量板振蕩器振蕩反應板，而不可使用水平旋轉儀。c .試劑盒不可置于 0C以下，防止凍結。不同批

33、號試劑不可混合使用。d. 有些血清標本在血清低稀釋度時可出現(xiàn)前帶現(xiàn)象，此時可作定量試驗；e. 如未致敏顆粒出現(xiàn)凝集反應，應將血清進行吸收處理后再進行試驗，或改用其他試驗 方法。A.2. 2 .1. 8血清吸收處理a. 取0. 95 m L已恢復體積的未致敏顆粒加入清潔的小試管內。b. 試管內加入50血清標本并充分混勻，置152 5 °C 20 mi n或更長時間。c. 離心2 0 00 rpm, 5 min ,取2 5卩L上清液（血清標本稀釋1 : 20）置第3孔，注意不 要混入顆粒。d. 自第4孔第1 0孔各加25 mL B液。e. 自第3孔吸2 5 mL至第4孔，混勻后吸25 m

34、 L至第5孔如此稀釋至第 10孔, 棄去2 5mL。f. 按定量試驗法加入D液和C液，將反應板置微量板振蕩器上振蕩30秒鐘，置濕盒內，1525C孵育2小時觀察結果。A . 2. 2.2熒光螺旋體抗體吸收試驗（FT A-ABS ）A.2.2.2.1 原理FT A-ABS試驗以完整形態(tài)的Nic ho l梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Re i t er株螺旋體制備而成）處理過的患者血清形成抗原抗體復合物，再加入熒光素（F ITC ）標記的抗人免疫球蛋白，與血清梅毒螺旋體抗體結合。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯示蘋果綠色的熒光，即為陽性反應。A. 2.2.2.2 材料a .梅毒螺旋體抗原玻片， 有直徑

35、0 .5 c m涂布梅毒螺旋體的圓圈，在高倍鏡下每視野 不少于30條螺旋體，丙酮固定。b .吸收劑（5 ml冷凍干燥品）,由體外培養(yǎng)的 Reiter株螺旋體制備而成。使用前用無菌蒸餾水恢復原體積。C.熒光抗體，用熒光素標記羊或鼠抗人免疫球蛋白。d. 血清稀釋板。A.2.2 . 2. 3 方法a. 將血清標本于56C滅活30 min,備用；b. 吸收劑加入5 m L無菌蒸餾水，用作血清的稀釋；c. 血清標本和吸收劑按1:51:20稀釋,混勻后置有蓋濕盒內于 3537C孵育30 min；d .將系列稀釋的血清分別加到抗原片上（每孔不少于30卩L）,放入有蓋濕盒內，置3537C孵育 30 min ;

36、e. 用0.01m o I/L的PB S沖洗抗原片，用磁力攪拌器低速以0. 0 1 mol/L PBS溶液洗滌抗原片，每5 mi n更換PBS液1次，共3次。最后一次用蒸餾水沖洗一遍，冷風吹干備用；f. 抗原片每個圈內加 30熒光抗體（熒光抗體稀釋為工作液 ），放濕盒35 3 7C孵育30 m in。重復步驟5的洗滌和吹干；g. 抗原片加固封劑（甘油緩沖液）1滴，覆以蓋玻片。在熒光顯微鏡下觀察。h .試驗對照：每批次試驗包括下列對照。 4+陽性血清和1 +陽性血清對照，血清用PBS液和吸收劑分別按1:51:2 0稀 釋。非特異血清對照。 染色對照：用0.01 m ol/L PBS和吸收劑分別替

37、代熒光抗體。A.2 . 2.2.4 結果梅毒螺旋體均勻地發(fā)出中等或高強度的蘋果綠色熒光陽性梅毒螺旋體均勻地發(fā)出弱蘋果綠色熒光弱陽性梅毒螺旋體呈微弱黃色光或觀察不到熒光 陰性A.2.2. 3梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗（EL I SA ）A.2.2. 3 .1 原理該試驗是用經(jīng)純化及超聲裂解處理的梅毒螺旋體為抗原包被固相板條，加上梅毒血清和辣根過氧化酶標記的抗人IgG抗體,利用酶免疫法檢測患者血清中的抗梅毒螺旋體特異性抗體。采用特異的梅毒螺旋體重組蛋白作為抗原，使試驗更加敏感、特異。A .2. 2.3.2 材料a. EL ISA試劑盒:含包被梅毒螺旋體抗原的反應板 （9 6孔）；標本稀釋液；洗滌液，使用 前按說明書要求稀釋；酶結合物；底物液（A液和B液）；反應終止液；陽性對照血清；陰性對照 血清。b. 其他：酶標檢測儀；洗扳機。A .2.2. 3.3 方法a. 取標本稀釋液100卩L加到反應板孔內，再加入待檢血清1 0卩L,同時作陽性和陰 性對照，置3 7C孵育30 mi n。b. 洗滌液洗板5次，拍干；c. 每孔加酶結合物100卩L,置37 C孵育15 mi n ;d. 洗滌液洗板5次,拍干；e .每孔加底物液 A液、B液各1滴（各50卩L）, 3 7C避光孵育1 5 mi n；f. 每孔加終止液1滴（50 yL ）終止反應；g. 置酶標檢測儀450 nm波長