人基質(zhì)金屬蛋白酶2MMP2酶聯(lián)免疫分析

1、 人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T20g/L -480g/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）水平。用純化的人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 MMP-2，再與 HRP標(biāo)記的 MMP-2抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺

2、和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）濃度。試劑盒組成12345630倍濃縮洗滌液酶標(biāo)試劑20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8條6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶78終止液6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份標(biāo)準(zhǔn)品（960g/L）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液說明書酶標(biāo)包被板樣品稀釋液顯色劑 A液顯色劑 B液9101112封板膜2張密封袋1個標(biāo)本要求1標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進

3、行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。480g/L240g/L120g/L60g/L5號標(biāo)準(zhǔn)品4號標(biāo)準(zhǔn)品3號標(biāo)準(zhǔn)品2號標(biāo)準(zhǔn)品1號標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的 5號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的 4號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的 3號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液150l的 2號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30g/L2

4、.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、3 / 3文檔可自由編輯打印 待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40l，然后再加待測樣品 10l（樣品最終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.4.5.溫育：用封板膜封板后置 37溫育30分鐘。配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。6.7.8.9.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50l，空白孔除外。溫育：操作同 3。洗滌：操作同

5、5。顯色：每孔先加入顯色劑 A50l，再加入顯色劑 B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液 50l，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié)：計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡

6、 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀