動物細(xì)胞的融合與單克隆抗體PPT課件

1、第1頁/共72頁 植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)第2頁/共72頁溫故而知新： 哪種植物細(xì)胞工程技術(shù)可以突破不同生物之間的生殖隔離，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培育出新的作物類型？植物體細(xì)胞雜交技術(shù)你能回憶出植物體細(xì)胞雜交的過程嗎？第3頁/共72頁植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞脫分化再分化愈傷組織雜種植株溫故知新:第4頁/共72頁植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞細(xì)胞分裂分化發(fā)育愈傷組織雜種植株思考：1、動物細(xì)胞融合的概念是什么？ 2、動植物細(xì)胞在

2、結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這對它們雜交或融合過程有什么影響？ 3、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？那動物細(xì)胞融合呢？4、動物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？是什么原理？5、動物細(xì)胞融合有什么意義？主要應(yīng)用在哪些方面？第5頁/共72頁動物細(xì)胞A動物細(xì)胞B誘導(dǎo)、融合雜合的細(xì)胞有絲分裂2個完整的雜交細(xì)胞AB6、植物體細(xì)胞雜交可得到雜種、植物體細(xì)胞雜交可得到雜種植株，動物細(xì)胞融合后能象電影植株，動物細(xì)胞融合后能象電影上一樣形成雜種動物個體嗎上一樣形成雜種動物個體嗎?為什么？為什么？植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種

3、細(xì)胞細(xì)胞分裂分化發(fā)育愈傷組織雜種植株第6頁/共72頁第7頁/共72頁第8頁/共72頁鼠細(xì)胞人細(xì)胞人工誘導(dǎo)雜交細(xì)胞第9頁/共72頁第10頁/共72頁第11頁/共72頁滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動性）（細(xì)胞膜具有一定的流動性）第12頁/共72頁第13頁/共72頁第14頁/共72頁細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性滅活病毒、滅活病毒、PEGPEG、電激等、電激等融合后的細(xì)胞進行有絲分裂，融合后的細(xì)胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細(xì)胞形成完整的雜交細(xì)胞誘導(dǎo)的

4、手段？誘導(dǎo)的手段？融合后細(xì)胞的類型？融合后細(xì)胞的類型？ABAB雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)雜種細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什么特點？有什么特點？三種三種AAAA、ABAB、BBBB（A A、B B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)含兩種生物的遺傳物質(zhì)動物細(xì)胞融合過程原理？原理？第15頁/共72頁物理法的融合效率較高,且對細(xì)胞（原生質(zhì)體）的傷害小,易操作、控制和觀察。太空中處于失重狀態(tài)，不同種細(xì)胞（原生質(zhì)體）更容易親近；為什么在太空中細(xì)胞（原生質(zhì)體）融合率會大大上升？為什么選用物理法誘導(dǎo)？第16頁/共72頁2 2、動物細(xì)胞融合的應(yīng)用、動物細(xì)胞融合的應(yīng)用1.1.突破有性雜交方法的局限突破有性雜交方法的局限, ,使遠(yuǎn)緣雜交成為使遠(yuǎn)緣雜交

5、成為可能?？赡堋?.2.成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。新品種培育等的重要手段。鼠鼠雞、鼠雞、鼠兔、鼠兔、鼠猴、人猴、人鼠、人鼠、人兔、兔、人人雞、人雞、人蛙、酵母菌蛙、酵母菌雞雞 、人、人胡蘿卜等胡蘿卜等3、重要用途：、重要用途：第17頁/共72頁獲得雜種植株獲得雜種植株物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電激）蕩、電激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）直接誘直接誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合去壁去壁原生質(zhì)體原生質(zhì)體融合融合誘誘導(dǎo)新壁導(dǎo)新壁雜種植株雜種植株細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞

6、膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性結(jié)果結(jié)果誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法步驟步驟融合的原理融合的原理動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項目比較項目獲得雜交細(xì)胞獲得雜交細(xì)胞第18頁/共72頁【例1】能使動物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是 （ ）A.離心 B.滅活的病毒 C.電刺激 D.振動【例2】融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有何特點（ ）具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信息 B.能無限增殖 C.可形成新個體 D.培養(yǎng)過程會貼壁【例3】動物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（ ）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B.制備單克隆抗體 C.培育新物種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞 BBA第19頁/共72頁二、單克隆抗體的制備二、

7、單克隆抗體的制備 醫(yī)院一般怎樣檢測人體內(nèi)是否存在乙肝病毒？醫(yī)院一般怎樣檢測人體內(nèi)是否存在乙肝病毒？ 第20頁/共72頁第21頁/共72頁 第22頁/共72頁第23頁/共72頁 第24頁/共72頁3、抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法、抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法：從從血血清清中中分分離離抗抗體體多多種種漿漿細(xì)細(xì)胞胞動動物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 第25頁/共72頁第26頁/共72頁 抗體抗體第27頁/共72頁第28頁/共72頁第29頁/共72頁 抗體抗體 抗原抗原 應(yīng)答應(yīng)答 抗體的不純性抗體的不純性 動物細(xì)胞受到抗原刺激動物細(xì)胞受到抗原刺激, ,引起免疫反應(yīng)產(chǎn)生的球蛋白引起免疫反應(yīng)產(chǎn)生的球蛋白. .不是自己的

8、而又能引起免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)就是抗原不是自己的而又能引起免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)就是抗原. .一種抗原有多種不同的決定簇一種抗原有多種不同的決定簇, ,刺激的是多種刺激的是多種B B細(xì)胞細(xì)胞, ,作用于作用于不同的不同的B B細(xì)胞后細(xì)胞后, ,會產(chǎn)生多種抗體會產(chǎn)生多種抗體, , 這是多克隆的這是多克隆的, , 故不純故不純! ! 抗原抗原 B B細(xì)胞細(xì)胞漿細(xì)胞漿細(xì)胞 抗體抗體 刺激刺激第30頁/共72頁 怎么才能得到純的抗體怎么才能得到純的抗體? ? 光純還不行光純還不行, ,還要大量還要大量. .怎么辦怎么辦? ? 但，有但，有問題問題: : 找，什么細(xì)胞能無限繁殖呢找，什么細(xì)胞能無限繁殖呢? ?

9、 思路就出來了思路就出來了: :要想獲單一的純抗體要想獲單一的純抗體, ,就必須從一個就必須從一個B B細(xì)胞出發(fā)細(xì)胞出發(fā). .讓讓B B細(xì)胞大量繁殖細(xì)胞大量繁殖( (克隆克隆) )就可以產(chǎn)生大量抗體了就可以產(chǎn)生大量抗體了. .B B細(xì)胞是不能無限繁殖的細(xì)胞是不能無限繁殖的. .怎么辦怎么辦? ?癌癌! ! 只有癌細(xì)胞只有癌細(xì)胞. . 但它不能產(chǎn)生抗體但它不能產(chǎn)生抗體. .癌細(xì)胞能無限繁殖癌細(xì)胞能無限繁殖, ,但不能產(chǎn)生抗體但不能產(chǎn)生抗體.B.B細(xì)胞能產(chǎn)生抗體細(xì)胞能產(chǎn)生抗體, ,但不能大但不能大量繁殖量繁殖. .融合呀融合呀! !只要將兩個細(xì)胞融合即可互補只要將兩個細(xì)胞融合即可互補. .第31頁

10、/共72頁 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 HAT篩選篩選大量培養(yǎng)大量培養(yǎng)PEGPEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合B 脾脾骨髓瘤骨髓瘤瘤瘤 問題問題: : 在培養(yǎng)體系中在培養(yǎng)體系中, , 有有5 5種細(xì)胞種細(xì)胞. B. B細(xì)胞、瘤細(xì)胞細(xì)胞、瘤細(xì)胞, ,和雜交細(xì)胞。和雜交細(xì)胞。 我們還是拿不到我們還是拿不到McAb,McAb,怎么辦怎么辦? ? 篩選！篩出雜交瘤細(xì)胞。怎么篩篩選！篩出雜交瘤細(xì)胞。怎么篩? ? 又是一個思路問題。又是一個思路問題。 關(guān)鍵一步關(guān)鍵一步第32頁/共72頁 第33頁/共72頁細(xì)胞兩兩融合后，有哪細(xì)胞兩兩融合后，有哪些類型？些類型？ 第34頁/共72頁 第35頁/共72頁第36頁/共72

11、頁 例：已知細(xì)胞增殖時合成例：已知細(xì)胞增殖時合成DNA有有D和和S兩條途徑，兩條途徑，其中其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。途徑能被氨基喋呤阻斷。 人淋巴細(xì)胞中有這兩種人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般的合成途徑，但一般不分裂增殖。不分裂增殖。 鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增途徑，但能不斷分裂增殖，殖， 將兩種細(xì)胞在培養(yǎng)液中混合，加聚乙二醇促融，將兩種細(xì)胞在培養(yǎng)液中混合，加聚乙二醇促融，在培養(yǎng)液中有在培養(yǎng)液中有 種細(xì)胞。種細(xì)胞。 加入氨基喋呤后，使加入氨基喋呤后，使D合成途徑阻斷，僅有合成途徑阻斷，僅有D合成合成途徑的途徑的 及其彼此融合的細(xì)胞不能增殖。

12、及其彼此融合的細(xì)胞不能增殖。 人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜交細(xì)胞中可利人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜交細(xì)胞中可利用淋巴細(xì)胞中的用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成途徑合成DNA而增殖。從培養(yǎng)液中分而增殖。從培養(yǎng)液中分離出雜交細(xì)胞。離出雜交細(xì)胞。如何篩選出培養(yǎng)液中的雜交瘤細(xì)胞？如何篩選出培養(yǎng)液中的雜交瘤細(xì)胞？5骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞第37頁/共72頁第38頁/共72頁第39頁/共72頁陽性孔陽性孔第40頁/共72頁 第41頁/共72頁注射抗原注射抗原效應(yīng)效應(yīng)B B細(xì)胞細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1抗原抗原- -抗抗體雜交法體雜交法克隆化克

13、隆化單克隆單克隆抗體抗體 篩選篩選2 24.第一次篩選出的雜交瘤第一次篩選出的雜交瘤細(xì)胞為何需進行克隆化培細(xì)胞為何需進行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測？養(yǎng)和專一抗體檢測？第42頁/共72頁第43頁/共72頁第44頁/共72頁第45頁/共72頁第46頁/共72頁 第47頁/共72頁第48頁/共72頁結(jié)合同位素的單抗結(jié)合同位素的單抗-生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈第49頁/共72頁第50頁/共72頁對比對比比較項目比較項目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備原理原理融合前處理融合前處理促融方法促融方法用途用途過過程程第一步第一步第二步第二步第三步第三步第四步第四步細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)

14、胞膜的流動性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞增殖增殖酶解法去壁酶解法去壁小鼠要免疫處理小鼠要免疫處理物理法化學(xué)法物理法化學(xué)法物理、化學(xué)、生物法物理、化學(xué)、生物法原生質(zhì)體的制備原生質(zhì)體的制備融合親本細(xì)胞的準(zhǔn)備融合親本細(xì)胞的準(zhǔn)備原生質(zhì)體的融合原生質(zhì)體的融合與篩選與篩選動物細(xì)胞融合與動物細(xì)胞融合與兩次篩選兩次篩選雜種細(xì)胞的形成與培養(yǎng)雜種細(xì)胞的形成與培養(yǎng)對產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)對產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)雜種植株的鑒定雜種植株的鑒定單克隆抗體的分離提純單克隆抗體的分離提純單抗有助于疾病的診斷、治療單抗有助于疾病的診斷、治療獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株第

15、51頁/共72頁第52頁/共72頁圖中圖中B為為_過程，過程，常用常用_作為誘導(dǎo)劑作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,又能又能_ 。B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC 第53頁/共72頁第54頁/共72頁第55頁/共72頁單克隆抗體單克隆抗體B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)誘導(dǎo)融合融合選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)雜交瘤雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞克隆化克隆化培養(yǎng)培養(yǎng)抗體抗體檢測檢測產(chǎn)生所需產(chǎn)生所需抗體的雜抗體的雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖小鼠腹腔內(nèi)增殖單克隆抗體單

16、克隆抗體多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞1、該過程中用到了兩種技術(shù)、該過程中用到了兩種技術(shù)單克隆抗體的制備過程：單克隆抗體的制備過程：動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)2、單克隆抗體的制備過程的三個、單克隆抗體的制備過程的三個“一一”：一種一種誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法，產(chǎn)生了誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法，產(chǎn)生了一種一種新細(xì)胞，得到了新細(xì)胞，得到了一種一種優(yōu)勢優(yōu)勢抗體?？贵w。滅活病毒誘導(dǎo)融合滅活病毒誘導(dǎo)融合雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體單克隆抗體優(yōu)勢：特異性強、靈敏度高，優(yōu)勢：特異性強、靈敏度高，可大量制備可大量制備第56頁/共72頁兩個過程兩個過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程動物細(xì)胞培養(yǎng)過程單克

17、隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢強、靈敏度高的優(yōu)勢第57頁/共72頁圖10第58頁/共72頁第59頁/共72頁第60頁/共72頁 2 第61頁/共72頁第62頁/共72頁第63頁/共72頁第64頁/共72頁第65頁/共72頁第66頁/共72頁思考與探究1.1.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)有植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？什么不同？植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)基本相植物體細(xì)胞雜

18、交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動物細(xì)胞融合是兩個體細(xì)胞直接融然后再融合；動物細(xì)胞融合是兩個體細(xì)胞直接融合。合。 誘導(dǎo)融合方法不同：動物細(xì)胞誘導(dǎo)融合所用的方誘導(dǎo)融合方法不同：動物細(xì)胞誘導(dǎo)融合所用的方法比植物體細(xì)胞雜交多一類滅活的病毒誘導(dǎo)；結(jié)法比植物體細(xì)胞雜交多一類滅活的病毒誘導(dǎo)；結(jié)果不同：植物體細(xì)胞雜交培養(yǎng)成了雜種植株，而果不同：植物體細(xì)胞雜交培養(yǎng)成了雜種植株，而動物細(xì)胞融合只培養(yǎng)出了雜交細(xì)胞。動物細(xì)胞融合只培養(yǎng)出了雜交細(xì)胞。 第67頁/共72頁2.2.制備單克隆抗體時，為什么要選用制備單克隆抗體時，

19、為什么要選用B B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？哺乳動物感染抗原后，其體內(nèi)會形成相應(yīng)的哺乳動物感染抗原后，其體內(nèi)會形成相應(yīng)的B B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞，胞，B B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種原。動物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種B B淋巴細(xì)胞能淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的必須使能分泌該單一抗體的B B淋巴細(xì)胞大量增殖。淋巴細(xì)胞大量增殖。B B淋淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力

20、，但不能在體外增殖；巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種因此，把一種B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進行細(xì)胞融合，產(chǎn)生與骨髓瘤細(xì)胞進行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會雜交瘤細(xì)胞，它會兼有兩個親本細(xì)胞的特性兼有兩個親本細(xì)胞的特性在體外培養(yǎng)條件下能不在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。斷增殖，同時能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。 第68頁/共72頁知識拓展知識拓展3 3.為什么不只用兩個而要用多個細(xì)胞進行動物細(xì)胞為什么不

21、只用兩個而要用多個細(xì)胞進行動物細(xì)胞間的融合？間的融合？就目前常用的細(xì)胞融合方法來看，不管是用物理的、化學(xué)就目前常用的細(xì)胞融合方法來看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是100%100%。僅。僅用兩個細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。用兩個細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是，即使兩個細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研更重要的是，即使兩個細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者期望得到的細(xì)胞類型。目前動物細(xì)胞融合技術(shù)最有價究者期望得到的細(xì)胞類型。目前動物細(xì)胞融合技術(shù)最有價值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制

22、備單克隆抗體值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來說明這一問題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體為例來說明這一問題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達百萬種以上，但是每一個種類可多達百萬種以上，但是每一個B B淋巴細(xì)胞只分泌一淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，如果僅取一個脾細(xì)胞（含種特異性抗體，如果僅取一個脾細(xì)胞（含B B淋巴細(xì)胞）和淋巴細(xì)胞）和一個瘤細(xì)胞雜交，我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗體是否一個瘤細(xì)胞雜交，我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗體是否正是我們所需要的；若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進行融合，正是我們所需要的；若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進行融合，就可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌

23、所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。就可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 第69頁/共72頁知識拓展知識拓展4 4.如何進行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？如何進行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用的細(xì)胞，通常用“有限稀釋法有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個，通釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個，通過

24、培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法），那些上清液可與特定抗原（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進行有限稀釋，一般自單個細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進行有限稀釋，一般需進行需進行3 34 4次，直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)次，直至確信每個孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。第70頁/共72頁知識

25、拓展知識拓展6 6.單倍體的誘導(dǎo)方法及應(yīng)用價值單倍體的誘導(dǎo)方法及應(yīng)用價值 單倍體（單倍體（haploid）是指具有配子染色體數(shù)目的個體。單）是指具有配子染色體數(shù)目的個體。單倍體可以自發(fā)產(chǎn)生，也可以誘發(fā)產(chǎn)生。動物中（除蜜蜂、倍體可以自發(fā)產(chǎn)生，也可以誘發(fā)產(chǎn)生。動物中（除蜜蜂、白蟻等外）的單倍體，由于生理上不正常，在胚胎發(fā)育時白蟻等外）的單倍體，由于生理上不正常，在胚胎發(fā)育時期就會死亡。植物上自發(fā)產(chǎn)生單倍體的植物很多，如番茄、期就會死亡。植物上自發(fā)產(chǎn)生單倍體的植物很多，如番茄、棉花、咖啡、甜菜、大麥、小麥、油菜等，共有約棉花、咖啡、甜菜、大麥、小麥、油菜等，共有約10個個科科26個屬個屬36個種的植物可以自發(fā)產(chǎn)生單倍體。個種的植物可以自發(fā)產(chǎn)生單倍體。除了自發(fā)產(chǎn)生單倍體外，人工誘導(dǎo)產(chǎn)生單