獸醫(yī)傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1、獸醫(yī)（小動(dòng)物）傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)一 消毒一、目的1.掌握消毒的方法2.了解常用化學(xué)消毒藥及其使用方法3.掌握檢查消毒質(zhì)量的方法 二、消毒的種類(lèi)和方法 消毒的種類(lèi)：1.預(yù)防性消毒：結(jié)合平時(shí)的飼養(yǎng)管理對(duì)畜舍、場(chǎng)地、用具和飲水等進(jìn)行定期消毒，以達(dá)到預(yù)防一般傳染病的目的。2.隨時(shí)消毒（應(yīng)急消毒）：在發(fā)生傳染病時(shí)，為了及時(shí)消滅剛從病畜體內(nèi)排出的病原體而進(jìn)行的臨時(shí)性的消毒。3.終末消毒：在病畜解除隔離、痊愈或死亡后，或者在疫區(qū)解除封鎖之前，為了消滅疫區(qū)內(nèi)可能殘留的病原體所進(jìn)行的全面徹底的大消毒。消毒的方法：1.機(jī)械性清除：用清掃、洗刷、通風(fēng)等機(jī)械性的方法清除存在于環(huán)境中的病原體。2.物理學(xué)消毒：用物理學(xué)

2、方法殺滅環(huán)境中的病原體。陽(yáng)光高溫：火焰燒烤、煮沸消毒、蒸氣消毒3.化學(xué)消毒：利用化學(xué)藥物殺滅病原微生物。4.生物熱消毒：這是消毒糞便常用的消毒方法。在糞便的堆漚過(guò)程中，利用糞便中的微生物發(fā)酵產(chǎn)熱，可以使溫度高達(dá)70以上，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間（13個(gè)月），可殺死細(xì)菌、病毒、寄生蟲(chóng)卵等而達(dá)到消毒的目的。三、化學(xué)消毒劑的分類(lèi)根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用不同可分為 1.堿類(lèi) 6.醛類(lèi) 2.酸類(lèi) 7.表面活性劑 3. 酚類(lèi) 8.醇類(lèi) 4.氧化劑 9.重金屬類(lèi) 5.鹵素類(lèi) 10.染料類(lèi)畜舍常用消毒藥的特點(diǎn)與選用1氫氧化鈉  對(duì)病毒和細(xì)菌有較強(qiáng)的殺滅作用，2%3的熱水溶液噴霧消毒，用于被病毒或細(xì)菌污染的畜舍、場(chǎng)地和

3、食具等。45的熱水溶液對(duì)芽胞桿菌亦有很強(qiáng)的殺滅力。氫氧化鈉對(duì)金屬制品有腐蝕性，消毒完畢要立即用水洗干凈；對(duì)皮膚、被毛和粘膜亦有腐蝕作用，因此，消毒畜舍及食具時(shí)，應(yīng)移出動(dòng)物，隔天用水沖洗場(chǎng)地及食具后，方能讓其入內(nèi)。 2石灰乳  石灰乳是由生石灰1份加水1份制成熟石灰，然后用水配成 1020的混懸液。本品有效強(qiáng)的殺滅病毒和細(xì)菌的作用，但對(duì)芽孢無(wú)效，可用于畜舍地面、墻壁及畜欄等處消毒。由于熟石灰可叢空氣中吸收二氧化碳而變成無(wú)消毒作用的碳酸鈣，故石灰乳應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。 3漂白粉  是最常用的一種含氯消毒化合物。新制漂白粉含有效氯25%-36%，受潮或久貯漸分解無(wú)效，

4、當(dāng)有效氯含量低于16時(shí)，則不宜作消毒使用，故使用前應(yīng)測(cè)量其有效氯含量。常用于食具、畜舍、地面、水井以及嘔吐物和排泄物等的消毒。4、福爾馬林  為含甲醛40的水溶液，有強(qiáng)大的殺菌和殺病毒作用，常用2%-5%福爾馬林液噴灑消毒畜舍的地面、墻壁、食具以及排泄物和嘔吐物等，因本品有特殊氣味，常影響貓的食欲，故貓舍及食具多不使用。5、過(guò)氧乙酸 使用時(shí)應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，過(guò)氧乙酸對(duì)病原微生物有強(qiáng)而快速的殺滅作用，不僅能殺死細(xì)菌、真菌和病毒，而且能殺死芽胞，常用0.5%溶液噴霧消毒畜舍地、墻壁、食具及周?chē)h(huán)境等，用1溶液作嘔吐物和排泄物的消毒，用0.20.4%溶液作蔬菜、飼草的浸泡消毒，本品對(duì)金屬和橡膠制

5、品有腐蝕性，對(duì)皮膚有刺激性，使用時(shí)應(yīng)當(dāng)多加注意。 四、畜舍的消毒1.預(yù)防性消毒 先清掃化學(xué)消毒劑消毒2.隨時(shí)消毒在疫情期間帶動(dòng)物消毒。選用高效、低毒、對(duì)畜禽刺激小的消毒藥。3.終末消毒先用消毒劑消毒清掃五、消毒質(zhì)量的檢查1.清潔度的檢查2.消毒藥檢查正確性的檢查3.使用濃度和數(shù)量的檢查4.細(xì)菌學(xué)檢查 細(xì)菌學(xué)檢查的方法和步驟選取一塊合適的地點(diǎn)，畫(huà)出10cm×10cm的3個(gè)緊挨著的方格，命名為A地、B地和C地。將桌上9個(gè)小青瓶依次用記號(hào)筆標(biāo)上號(hào)碼：A1、A2、A3、B1、B2、B3和C1、C2、C3。用移液器分別注入滅菌生理鹽水5mL、4.5mL 、 4.5mL、5mL、4.5mL、4.

6、5mL和5mL、4.5mL、4.5mL 。用棉花簽蘸取滅菌小青瓶A1號(hào)內(nèi)少許滅菌生理鹽水，然后均勻涂抹A地，理論上將A地所有的細(xì)菌移到A1號(hào)的5mL生理鹽水內(nèi)。 用兩種消毒液分別噴灑B地和C地，等半小時(shí)自然晾干。用移液器從A1號(hào)小青瓶?jī)?nèi)吸取0.5mL液體移到A2瓶?jī)?nèi)，吹打均勻；然后再用移液器從A2號(hào)小青瓶?jī)?nèi)吸取0.5mL液體移到A3瓶?jī)?nèi)，吹打均勻。用移液器從A3號(hào)小青瓶?jī)?nèi)吸取生理鹽水0.2mL移到滅菌固體普通培養(yǎng)基內(nèi)中央，然后用已在酒精燈外焰上燒過(guò)的玻璃涂抹棒將此0.2mL液體均勻涂抹在培養(yǎng)基整個(gè)平面上。平板標(biāo)記上班級(jí)、組號(hào)和日期后置于37培養(yǎng)過(guò)夜。半小時(shí)已過(guò)。用滅菌棉簽蘸取滅菌小青瓶B1(C

7、1）號(hào)內(nèi)少許滅菌生理鹽水，然后均勻涂抹B（C）地，理論上將B（C）地所有的細(xì)菌移到B1（C1）號(hào)的5mL生理鹽水內(nèi)。用移液器從B1（C1）號(hào)小青瓶?jī)?nèi)吸取0.5mL液體移到B2（C2）瓶?jī)?nèi)，吹打均勻；然后再用移液器從B2（C2）號(hào)小青瓶?jī)?nèi)吸取0.5mL液體移到B3（C3）瓶?jī)?nèi)，吹打均勻。用移液器從B3（C3）號(hào)小青瓶?jī)?nèi)吸取生理鹽水0.2mL移到另一塊滅菌固體普通培養(yǎng)基內(nèi)中央，然后用已在酒精燈外焰上燒過(guò)的玻璃涂抹棒將此0.2mL液體均勻涂抹在培養(yǎng)基整個(gè)平面上。平板標(biāo)記上班級(jí)、組號(hào)和日期后置于37培養(yǎng)過(guò)夜。 第2天從恒溫箱中取出平板，計(jì)算長(zhǎng)出的細(xì)菌個(gè)數(shù)，再計(jì)算出甲地和乙地的原細(xì)菌個(gè)數(shù)。實(shí)驗(yàn)二 免疫接

8、種技術(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握免疫接種的方法與步驟。2.熟悉獸醫(yī)生物制品的保存、運(yùn)送和用前檢查方法。實(shí)驗(yàn)概述 疫苗免疫接種的途徑是根據(jù)病原體侵入門(mén)戶(hù)、在機(jī)體內(nèi)的定居場(chǎng)所、疫苗菌（毒）株的活性、佐劑及其使用等特點(diǎn)，經(jīng)過(guò)動(dòng)物免疫學(xué)試驗(yàn)確定的。不同疫苗的接種途徑不完全相同，合理選擇免疫途徑不僅能充分發(fā)揮全身性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力，同時(shí)也能大大提高機(jī)體局部的免疫應(yīng)答。在實(shí)踐中，應(yīng)嚴(yán)格按照商品疫苗的使用說(shuō)明和預(yù)先制訂的免疫程序進(jìn)行，不能隨意更換免疫接種途徑。對(duì)于特定疫苗具有多種可選擇的接種方法時(shí)，選擇的接種方法則要根據(jù)動(dòng)物群狀態(tài)、當(dāng)?shù)丶膊×餍行问揭约梆B(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部可用資源情況等確定。每種接種方法都具有自身固有

9、的優(yōu)缺點(diǎn)，生產(chǎn)中可以根據(jù)情況靈活選用。實(shí)驗(yàn)材料和儀器酒精棉球、碘酒、注射器、針頭、氣霧發(fā)生器實(shí)驗(yàn)操作步驟和方法一、免疫按種的方法免疫接種的方法很多，主要有注射免疫法、經(jīng)口免疫法，氣霧免疫法等數(shù)種。注射免疫法中又可分為皮下接種、皮內(nèi)接種、肌肉接種及靜脈接種等四種。 1皮下接種法：馬、牛等大動(dòng)物皮下接種一般采用頸側(cè)部；豬在耳根后方；家禽在胸部、大腿內(nèi)側(cè)。根據(jù)藥液濃度和動(dòng)物大小，一般用1620號(hào)針頭，長(zhǎng)約1.22.5cm。但家禽則應(yīng)采用針孔直徑小于20號(hào)的針頭。皮下接種優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、劑量分布均勻、吸收較皮內(nèi)接種為快；缺點(diǎn)是劑量大，群體免疫時(shí)費(fèi)時(shí)、費(fèi)力。且疫苗皮下接種的反應(yīng)較皮內(nèi)大。大部分常用的疫苗

10、和免疫血清，一般均采用皮下接種。 2皮內(nèi)接種法：馬皮內(nèi)接種采用頸側(cè)、眼瞼部位；牛、羊除頸側(cè)外，可在尾根或肩胛中央部位；豬大多在耳根后；雞在肉髯部位。 現(xiàn)用獸醫(yī)生物制品用僅有羊痘弱毒菌苗作皮內(nèi)接種，但診斷液皮內(nèi)接種的應(yīng)用較多。皮內(nèi)注射一般用專(zhuān)門(mén)注射器，容量2-l0ml，針孔直徑1925號(hào)；也可使用藍(lán)心注射器，容量lml和相應(yīng)的注射針頭。皮內(nèi)接種的優(yōu)點(diǎn)是使用藥液少，同樣的疫苗皮內(nèi)注射較之于皮下注射反應(yīng)小。同時(shí)，真皮層的組織比較致密，神經(jīng)末梢分布廣泛，特別是豬的耳根皮內(nèi)比其他部位容易保持清潔。同量藥液皮內(nèi)注射時(shí)所產(chǎn)生的免疫力較皮下注射為高。皮內(nèi)接種的缺點(diǎn)是手續(xù)比較麻煩。3肌肉接種法：馬、牛、豬、羊肌

11、肉接種，一律采用臀部或頸部；雞可在胸肌部接種。 現(xiàn)有獸醫(yī)生物制品，除豬瘟弱毒疫苗、牛肺疫弱毒疫苗和多種滅活疫苗以及在某些情況下接種血清可以采用肌肉接種外，其他生物制品一般都不應(yīng)用此法進(jìn)行接種。一般使用1620號(hào)針頭，長(zhǎng)約2.53.7cm。 肌肉接種優(yōu)點(diǎn)是藥液吸收快、免疫效果缺失可靠、注射方法也較簡(jiǎn)便；缺點(diǎn)是群體免疫費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，接種部位不當(dāng)易引起跛行。 4靜脈接種法：馬、牛、羊靜脈接種一般在頸靜脈部位；豬在耳靜脈部位；雞則在翼下靜脈部位。 現(xiàn)用獸醫(yī)生物制品中的免疫血清，除了皮下或肌肉接種外，亦可采用靜脈接種，尤其對(duì)急于傳染病患畜治療時(shí)。疫苗、菌苗、診斷液一般不作靜脈注射。 靜脈接種優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用劑量

12、大、奏效快速，可以及時(shí)搶救患病動(dòng)物。缺點(diǎn)是手續(xù)比較麻煩，如用異種動(dòng)物血清可能引起過(guò)敏反應(yīng)。 5經(jīng)口免疫法：分飲水免疫和喂食免疫兩種，前者是將可供口服的疫（菌）苗混于中，動(dòng)物通過(guò)飲水而獲得免疫，后者是將可供口服的疫（菌）苗用冷的清水稀釋后拌入飼料，動(dòng)物通過(guò)吃食而獲得免疫。經(jīng)口免疫時(shí)，應(yīng)按動(dòng)物頭數(shù)和每頭動(dòng)物平均飲水量或吃食量，準(zhǔn)確計(jì)算需用的疫（菌）苗劑量。免疫前一般需要停飲或停喂半天，以保證飲喂疫（菌）苗時(shí)每頭動(dòng)物都能飲用一定量的水或吃入一定量的料。應(yīng)用冷清水稀釋疫（菌）苗，混有疫（菌）苗的飲水和飼料也要注意掌握溫度，一般以不超過(guò)室溫為宜。已經(jīng)稀釋的疫（菌）苗應(yīng)盡快飲喂。此法可用于豬肺疫弱毒菌苗和

13、雞新城疫弱毒菌苗等免疫接種。 本法具有省時(shí)、省力的優(yōu)點(diǎn)，適于大群動(dòng)物免疫；缺點(diǎn)是由于動(dòng)物飲水量或吃食量不同，每頭動(dòng)物體內(nèi)攝入的疫（菌）苗量有差異，因而容易出現(xiàn)群體免疫不均勻現(xiàn)象，不適合初次免疫。 6氣霧免疫法：此法是通過(guò)壓縮空氣借助于氣霧發(fā)生器將稀釋疫（菌）苗噴射出去，使疫（菌）苗形成直徑1l0m的霧化粒子均勻地浮游在空氣之中，動(dòng)物將霧化粒子吸入肺內(nèi)刺激產(chǎn)生的免疫。 氣霧免疫裝置由氣霧發(fā)生器（即噴頭）及動(dòng)力機(jī)械組成。壓縮空氣的動(dòng)力機(jī)械，可因地制宜，利用各種氣泵或用電動(dòng)機(jī)、柴抽機(jī)帶動(dòng)空氣壓縮泵。 霧化粒子大小是影響免疫效果的最重要因素，大小為1l0m的粒子為有效粒子，氣霧發(fā)生器能產(chǎn)生70以上有效

14、粒子時(shí)為合格。測(cè)定霧化粒子大小時(shí)，用一拭好的玻璃，周?chē)恳苑彩苛钟停诓０逯醒氲我恍〉螜C(jī)油，用拇指和食指轉(zhuǎn)動(dòng)玻片使其均勻分布。將玻片在距離噴頭1030cm處迅速通過(guò)而使霧化粒子吹于機(jī)油面上，然后將玻片液面朝下放于凹玻片上，在顯微鏡下觀察，移動(dòng)視野，用目測(cè)微尺測(cè)量其大小，并計(jì)算其有效粒子的比率。每使用氣霧發(fā)生器時(shí)最好進(jìn)行粒子大小測(cè)定，合格后方能使用。 （1） 室內(nèi)氣霧免疫法：此法需有一定的房舍設(shè)備。免疫時(shí)菌苗用量主要根據(jù)房舍大小而定，可按下式計(jì)算：菌苗用量=D×A/T×V式中： D計(jì)劃免疫劑量； A免疫室容積（L）； T免疫時(shí)間（分鐘）； V呼吸常數(shù)，即動(dòng)物每分鐘吸入的空氣量

15、（L）。 菌苗用量計(jì)算完畢后，將動(dòng)物趕入室內(nèi)，關(guān)閉門(mén)窗。將噴頭由門(mén)窗縫伸入室內(nèi)，使噴頭保持與動(dòng)物頭部同高，向室內(nèi)四面均勻噴射，完畢后讓動(dòng)物在室內(nèi)停留2030分鐘。操作人員要注意防護(hù)，戴上大而厚的口罩，如出現(xiàn)癥狀，應(yīng)及時(shí)就醫(yī)。 （2） 野外氣霧免疫法：菌苗用量主要以動(dòng)物數(shù)量而定。以1000只規(guī)模的羊群為例，每只羊免疫劑量為50億活菌則需50000億，用500ml滅菌生理鹽水稀釋。實(shí)際應(yīng)用時(shí)疫苗用量要比計(jì)算用量高510。免疫時(shí)將羊群趕入四周有矮墻的圈內(nèi)。操作人員手持噴頭，站在畜群中，噴頭與動(dòng)物頭部同高，朝動(dòng)物頭部方向噴射。操作人員要隨時(shí)走動(dòng)，使每一動(dòng)物都有吸入機(jī)會(huì)。如遇微風(fēng)，還須注意風(fēng)向，操作者應(yīng)

16、站在上風(fēng)，以免霧化粒子被風(fēng)吹走。噴射完畢，讓動(dòng)物在圈內(nèi)停留數(shù)分鐘即可放出。進(jìn)行野外氣霧免疫時(shí)，操作者更需注意個(gè)人防護(hù)，應(yīng)穿工作衣褲和膠靴，戴大而厚的口罩，如出現(xiàn)癥狀，應(yīng)及時(shí)就醫(yī)。本法優(yōu)點(diǎn)是省時(shí)、省力，免疫效果優(yōu)良，適于群體動(dòng)物免疫；缺點(diǎn)是疫（菌）苗用量大、容易誘發(fā)呼吸道感染，尤其在呼吸道疾病好發(fā)季節(jié)。二、免疫接種用生物制品的保存、運(yùn)送和用前檢查1獸醫(yī)生物制品保存：各種生物制品應(yīng)保存在低溫、陰暗及干燥場(chǎng)所，死菌苗、致弱菌苗、類(lèi)毒素、免疫血清等應(yīng)保存在215，防止凍結(jié)；弱毒疫苗，如豬瘟兔化弱毒疫苗、雞新城疫弱毒疫苗等應(yīng)置放在0以下凍結(jié)保存。2獸醫(yī)生物制品運(yùn)送：要求包裝完善，防止碰壞瓶子和散播活的弱

17、毒病原體，并盡快送到保存地點(diǎn)或預(yù)防接種的場(chǎng)所。弱毒疫苗應(yīng)放在裝有冰塊的廣口瓶?jī)?nèi)運(yùn)送，以免其性能降低或喪失。 3獸醫(yī)生物制品用前檢查：各種獸醫(yī)生物制品在使用前，均需詳細(xì)檢查，不得使用沒(méi)有瓶簽或瓶簽?zāi)：磺濉⑦^(guò)期失效、瓶塞不緊或玻璃破裂的制品。 三、動(dòng)物免疫接種注意事項(xiàng)1接種前健康檢查：待免疫接種的動(dòng)物必須營(yíng)養(yǎng)和健康狀況良好，飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生清潔。營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)差、患有內(nèi)外寄生蟲(chóng)病或其他慢性病等動(dòng)物免疫接種時(shí)副反應(yīng)較大，應(yīng)盡量避開(kāi)。同時(shí)，從接種安全性和保證接種效果考慮，應(yīng)對(duì)待接種動(dòng)物進(jìn)行臨床檢查，包括體溫檢查。2接種后動(dòng)物護(hù)理和臨床觀察：動(dòng)物在接種疫苗后有時(shí)會(huì)出現(xiàn)副作用，故在接種后要進(jìn)行詳細(xì)的臨床觀察，記錄

18、動(dòng)物表現(xiàn)，期限為710天。發(fā)現(xiàn)動(dòng)物異常，如嚴(yán)重的副作用時(shí)應(yīng)及時(shí)采取必要的應(yīng)急措施。實(shí)驗(yàn)三 布氏桿菌常規(guī)血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)目的：1.掌握試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)布氏桿菌抗體的操作及結(jié)果判定方法。2.了解布氏桿菌虎紅平板凝集試驗(yàn)操作及其結(jié)果判定方法。原理：凝集反應(yīng) 細(xì)菌體的混懸液（抗原）與相應(yīng)的免疫血清（抗體）互相作用時(shí)，在電解質(zhì)（0.85%生理鹽水）參與下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間，顆粒抗原被凝集，形成肉眼可見(jiàn)的絮狀或顆粒沉淀，稱(chēng)為凝集反應(yīng)。一、布氏桿菌試管凝集試驗(yàn) 1.試劑 布氏桿菌試管凝集抗原布氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清布氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陰性血清被檢血清稀釋液：0.5石炭酸生理鹽水2.實(shí)驗(yàn)步驟和程序確定被檢血清的稀釋度 牛、馬和駱駝常用1:50、1:100、1:200、1:400四個(gè)稀釋度 豬、山羊、綿羊和狗用1:25、1:50、1:100、1:200四個(gè)稀釋度 被檢血清的稀釋和加入抗原的方法（以豬、狗為例）將5支試管排成一排編號(hào)后，第1管加入稀釋液2.3ml，第2管不加，第3、4、5管各加入0.5ml。第1管加入0.5ml被檢血清，混勻，吸取混和液分別加入第2管和第3管各0.5ml，第3管混勻后吸0.5ml加入第4管，第4管混勻后吸0.5ml加入第5管，第5管混勻后棄去0.5ml。如此稀釋?zhuān)瑒t血清稀釋度從第2管起分別為1: