色譜法分離原理

1、色譜法分離原理教學(xué)內(nèi)容1. 色 譜 分 離 的 基 本 原 理 和 基 本 概 念2. 色 譜 分 離 的 理 論 基 礎(chǔ)3. 色 譜 定 性 和 定 量 分 析 的 方 法重點(diǎn)與難點(diǎn)1. 塔 板 理 論 ， 包 括 流 出 曲 線 方 程 、 理 論 塔 板 數(shù) ( n) 及 有 效 理 論 塔 板 數(shù) (n e f f ) 和 塔 板 高 度 (H ) 及 有 效 塔 板 高 度 (H e f f ) 的 計(jì) 算2. 速 率 理 論 方 程3. 分 離 度 和 基 本 分 離 方 程三教學(xué)要求1. 熟 練 掌 握 色 譜 分 離 方 法 的 原 理2. 掌 握 色 譜 流 出 曲 線( 色

2、 譜 峰 )所 代 表 的 各 種 技 術(shù) 參 數(shù) 的 準(zhǔn) 確 含 義3. 能 夠 利 用 塔 板 理 論 和 速 率 理 論 方 程 判 斷 影 響 色 譜 分 離 各 種 實(shí)驗(yàn)因素4. 學(xué) 會(huì) 各 種 定 性 和 定 量 的 分 析 方 法四.學(xué)時(shí)安排 4學(xué)時(shí)第一節(jié) 概述色譜法早在19 03年由俄國(guó)植物學(xué)家茨維特分離植物色素時(shí)采 用。他在研究植物葉的色素成分時(shí)，將植物葉子的萃取物倒入填有碳 酸鈣的直立玻璃管內(nèi)，然后加入石油醚使其自由流下，結(jié)果色素中各 組分互相分離形成各種不同顏色的譜帶。這種方法因此得名為色譜 法。以后此法逐漸應(yīng)用于無(wú)色物質(zhì)的分離，“色譜”二字雖已失去原 來(lái)的含義但仍被人們

3、沿用至今。在色譜法中，將填入玻璃管或不銹鋼管內(nèi)靜止不動(dòng)的一相（固體 或液體）稱為固定相；自上而下運(yùn)動(dòng)的一相（一般是氣體或液體） 稱為流動(dòng)相；裝有固定相的管子（玻璃管或不銹鋼管）稱為色譜 柱_。當(dāng)流動(dòng)相中樣品混合物經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，就會(huì)與固定相發(fā)生作 用，由于各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相相互作用的類型、 強(qiáng)弱也有差異，因此在同一推動(dòng)力的作用下，不同組分在固定相滯留 時(shí)間長(zhǎng)短不同，從而按先后不同的次序從固定相中流出。從不同角度，可將色譜法分類如下：1. 按兩相狀態(tài)分類氣體為流動(dòng)相的色譜稱為氣相色譜（GC）根據(jù)固定相是固體吸附劑還是固定液（附著在惰性載體上的薄層有機(jī)化合物液體），又可分為氣固色譜

4、（GSC）和氣液色譜（GLC） 液 體 為 流 動(dòng) 相 的 色 譜 稱 液 相 色 譜 （ LC）同 理 液 相 色 譜 亦 可 分 為 液 固 色 譜 （ LSC） 和 液 液 色 譜 （ LLC） 。超 臨 界 流 體 為 流 動(dòng)相的色 譜 為 超 臨界流 體 色 譜 （SFC） 。 隨 著色譜工 作 的 發(fā) 展 ， 通 過(guò)化 學(xué)反 應(yīng) 將固 定液鍵 合 到 載體表面 ， 這 種 化學(xué)鍵合 固 定 相 的 色 譜 又稱化學(xué) 鍵 合 相 色譜（ CBPC） .2. 按 分 離 機(jī) 理 分類利 用 組 分 在吸 附 劑（ 固 定 相 ）上 的 吸附 能 力 強(qiáng) 弱 不 同 而 得 以 分 離的

5、 方 法 ， 稱 為 吸 附 色 譜 法 。利 用 組 分 在固 定 液（ 固 定 相 ）中 溶 解度 不 同 而 達(dá) 到 分 離 的 方 法 稱 為分配色譜法。利 用 組 分 在離 子 交 換 劑（ 固 定 相 ）上 的 親 和 力 大 小 不 同 而 達(dá) 到 分離 的 方 法 ， 稱 為 離 子交 換 色 譜 法 。利用大小不同的分子在多孔固定相中的選擇滲透而達(dá)到分離的方 法 ， 稱 為 凝 膠 色 譜 法 或 尺 寸排 阻 色 譜 法 。最 近 ，又 有 一種 新 分 離 技 術(shù) ，利 用 不 同 組 分 與 固 定 相（ 固 定 化 分 子 ）的 高 專 屬 性 親 和 力 進(jìn) 行 分

6、 離 的 技 術(shù) 稱 為 親 和 色 譜 法 ，常 用 于 蛋 白 質(zhì)的分離。3. 按 固 定 相 的 外 型 分 類固 定 相 裝 于柱 內(nèi) 的 色 譜 法 ， 稱為 柱 色 譜 。固 定 相 呈 平板 狀 的 色 譜 ，稱 為 平 板 色 譜 ，它 又 可 分 為 薄 層 色 譜 和 紙色譜4. 按 照 展 開(kāi) 程 序 分 類按照展開(kāi)程序的不同，可將色譜法分為洗脫法、頂替法、和 迎 頭 法 。 洗 脫 法 也 稱沖 洗 法 。工 作 時(shí) ， 首 先 將樣 品 加 到色 譜 柱 頭上 ， 然后用吸附或溶解能力比試樣組分弱得多的氣體或液體作沖洗劑。 由于各組分在固定相上的吸附或溶解能力不同.被

7、沖洗劑帶出的先 后次序也不同，從而使組分彼此分離。這 種 方 法 能使 樣 品 的 各 組 分 獲得 良 好 的 分 離 ，色 譜 峰 清 晰 。此 外 ，除 去 沖 洗 劑 后 ，可 獲 得純 度 較 高 的 物 質(zhì) 。目 前 ，這 種 方 法 是 色 譜 法 中 最常用的一種方法。頂 替 法 是 將樣 品 加 到 色 譜 柱 頭后 ，在惰 性 流 動(dòng) 相 中 加 入 對(duì) 固 定 相 的 吸 附 或 溶 解 能 力 比所 有 試 樣組 分 強(qiáng) 的 物 質(zhì) 為頂 替 劑（ 或 直 接 用 頂 替 劑 作 流 動(dòng) 相 ），通 過(guò) 色 譜 柱 ，將 各 組 分 按 吸附 或 溶 解能 力 的 強(qiáng)

8、弱 順 序 ， 依次頂替出固定相。很明顯，吸附或溶解能力最弱的組分最先流出， 最強(qiáng)的最后流出。此法適于制備純物質(zhì)或濃縮分離某一組分；其缺點(diǎn)是經(jīng)一次使用 后 ，柱 子 就 被 樣 品 或 頂 替 劑 飽 和 ，必 須 更 換 柱 子 或 除 去 被 柱 子 吸 附 的 物 質(zhì) 后 ， 才 能 再 使用 。迎 頭 法 是 將試 樣 混 合 物 連 續(xù) 通過(guò) 色 譜 柱 ，吸 附 或 溶 解 能 力 最 弱 的組 分 首 先 一 純 物 質(zhì) 的狀 態(tài) 流 出，其 次則 以 第 一組 分 和 吸 附 或 溶 解 能 力較 弱 的 第 二 組 分 混 合物 ，以 此 類 推 。該 法 在分 離 多 組分

9、 混 合 物 時(shí) ，除第 一 組 分 外 ，其 余 均 非 純 態(tài) ，因 此 僅 適 用 于 從含 有 微 量 雜 質(zhì) 的 混 合 物中 切 割 出 一 個(gè) 高 純 組分 （ 組 分 A） ， 而 不 適 用 于對(duì) 混 合 物進(jìn) 行 分 離 。第 二 節(jié) 色 譜 流 出 曲線 及 有 關(guān) 術(shù) 語(yǔ)（一）色譜流出曲線和色譜峰由檢測(cè)器輸出的電信號(hào)強(qiáng)度對(duì)時(shí)間作圖，所得曲線稱為色譜 流出曲線。曲線上突起部分就是色譜峰。如果進(jìn)樣量很小，濃度很低，在吸附等溫線（氣固吸附色譜） 或分配等溫線（氣液分配色譜）的線性范圍內(nèi)，則色譜峰是對(duì)稱的。（二）基線在實(shí)驗(yàn)操作條件下，色譜柱后沒(méi)有樣品組分流出時(shí)的流出曲 線稱為基

10、線，穩(wěn)定的基線應(yīng)該是一條水平直線。（三）峰高色譜峰頂點(diǎn)與基線之間的垂直距離，以（h）表示?；€（a）峰高（h）（四）保留值1. 死時(shí)間t匕不被固定相吸附或溶解的物質(zhì)進(jìn)入色譜柱時(shí)，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰 極大值所需的時(shí)間稱為死時(shí)間，它正比于色譜柱的空隙體積，因?yàn)檫@種物質(zhì)不被固定相吸附或溶解，故其流動(dòng)速度將與流動(dòng)相流動(dòng)速度相近。測(cè)定流動(dòng)相平均線速口時(shí)，可用柱長(zhǎng)L與t 0的比值 計(jì)算，即u = L /t o2. 保留時(shí)間t r試樣從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)峰極大點(diǎn)時(shí)所經(jīng)過(guò)的時(shí)間，稱為保留時(shí) 間3. 調(diào)整保留時(shí)間t J某組分的保留時(shí)間扣除死時(shí)間后，稱為該組分的調(diào)整保留時(shí)間，即t r ' = t r - t 0由

11、于組分在色譜柱中的保留時(shí)間t r包含了組分隨流動(dòng)相通過(guò)柱子所須的時(shí)間和組分在固定相中滯留所須的時(shí)間，所以t r實(shí)際上是 組分在固定相中保留的總時(shí)間。保留時(shí)間是色譜法定性的基本依據(jù)，但同一組分的保留時(shí)間常受 到流動(dòng)相流速的影響，因此色譜工作者有時(shí)用保留體積來(lái)表示保留 值。4. 死體積Vo指色譜柱在填充后，柱管內(nèi)固定相顆粒間所剩留的空間、色譜儀中管路和連接頭間的空間以及檢測(cè)器的空間的總和。當(dāng)后兩相很小可忽略不計(jì)時(shí)，死體積可由死時(shí)間與色譜柱出口的載氣流速Fco (cm? min -1)計(jì)算。Vo式中Fco為扣除飽和水蒸氣壓并經(jīng)溫度校正的流速。僅適用于氣相色譜，不適用于液相色譜5. 保留體積V r指從

12、進(jìn)樣開(kāi)始到被測(cè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大點(diǎn)時(shí)所通過(guò)的流動(dòng)相的體積。保留時(shí)間與保留體積關(guān)系：Vr = t r F co6. 調(diào)整保留體積Vr某組分的保留體積扣除死體積后，稱為該組分的調(diào)整保留體積。Vr = Vr _ V。= t r Fco7. 相對(duì)保留值 r 2,1某組分2的調(diào)整保留值與組分1的調(diào)整保留值之比，稱為相對(duì) 保留值。r 2, 1= t r2 / t r1 '= V2/ V1由于相對(duì)保留值只與柱溫及固定相性質(zhì)有關(guān)，而與柱徑、柱 長(zhǎng)、填充情況及流動(dòng)相流速無(wú)關(guān)，因此，它在色譜法中，特別是在 氣相色譜法中，廣泛用作定性的依據(jù)。在定性分析中，通常固定一 個(gè)色譜峰作為標(biāo)準(zhǔn)(s)，然后再求其它

13、峰(i )對(duì)這個(gè)峰的相對(duì)保留 值，此時(shí)可用符號(hào)表示，即:-=t r (i ) /t r(S )式中tr ( i)為后出峰的調(diào)整保留時(shí)間，所以總是大于1的 相對(duì)保留值往往可作為衡量固定相選擇性的指標(biāo)，又稱選擇因子(五) 區(qū)域?qū)挾壬V峰的區(qū)域?qū)挾仁巧V流出曲線的重要參數(shù)之一，用于衡 量柱效率及反映色譜操作條件的動(dòng)力學(xué)因素。表示色譜峰區(qū)域?qū)挾?通常有三種方法。1. 標(biāo)準(zhǔn)偏差匚即0. 607倍峰高處色譜峰寬的一半。2. 半峰寬W1/ 2即峰高一半處對(duì)應(yīng)的峰寬。它與標(biāo)準(zhǔn)偏差的關(guān)系為Wh/ 2=2.3 54 二3. 峰底寬度W即色譜峰兩側(cè)拐點(diǎn)上的切線在基線上截距間的距離。它與標(biāo)準(zhǔn)偏差匚的關(guān)系是 W= 4匚

14、從色譜流出曲線中，可得許多重要信息：(i) 根據(jù)色譜峰的個(gè)數(shù)，可以判斷樣品中所含組分的最少個(gè)數(shù)；(ii )根據(jù)色譜峰的保留值，可以進(jìn)行定性分析；(ii i) 根據(jù)色譜峰的面積或峰高，可以進(jìn)行定量分析；(iv )色譜峰的保留值及其區(qū)域?qū)挾?，是評(píng)價(jià)色譜柱分離效能的依 據(jù)；（ v） 色 譜 峰 兩 峰 間 的 距 離 ， 是 評(píng) 價(jià) 固 定 相 （ 或 流 動(dòng) 相 ） 選 擇 是 否 合 適的依據(jù)。色 譜 分 析 的目 的 是 將 樣 品 中 各組 分 彼 此 分 離 ，組 分 要 達(dá) 到 完 全 分 離 ，兩 峰 間 的 距 離 必 須 足 夠 遠(yuǎn) ，兩 峰 間 的 距 離 是 由 組 分 在 兩

15、 相 間 的 分 配系數(shù)決定的，即與色譜過(guò)程的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān)。第 三 節(jié) 色 譜 法 基 本 原 理（ 一 ） 分 配 系 數(shù) K 和分 配 比 k1. 分 配 系 數(shù) K分配色譜的分離是基于樣品組分在固定相和流動(dòng)相之間反復(fù) 多次的分配過(guò)程，而吸附色譜的分離是基于反復(fù)多次的吸附-脫附過(guò) 程 。這 種 分 離 過(guò) 程 經(jīng) 常 用 樣 品 分 子 在 兩 相 間 的 分 配 來(lái) 描 述 ，而 描 述 這 種 分 配 的 參 數(shù) 稱 為 分配 系 數(shù) K。它 是 指 在 一 定 溫 度和 壓 力 下 ，組 分 在 固定 相 和 流 動(dòng) 相 之 間 分 配 達(dá)平衡時(shí)的濃度之比值，即K= 溶 質(zhì) 在 固

16、 定 相 中 的 濃 度/ 溶 質(zhì) 在 流 動(dòng) 相 中 的 濃 度 =Cs / Cm分 配 系 數(shù) 是 由 組 分和 固 定 相的 熱 力 學(xué) 性 質(zhì) 決定 的 ，它 是 每 一 個(gè) 溶質(zhì)的特征值，它僅與兩個(gè)變量有關(guān)：固定相和溫度。與兩相體積、 柱管的特性以及所使用的儀器無(wú)關(guān)。2. 分 配 比 k分 配 比 又 稱 容 量 因子 ，它 是 指 在 一 定 溫 度和 壓 力 下，組 分 在 兩相間分配達(dá)平衡時(shí)，分配在固定相和流動(dòng)相中的質(zhì)量比。即k =組分在固定相中的質(zhì)量 / 組分在流動(dòng)相中的質(zhì)量=ms /mmk值越大，說(shuō)明組分在固定相中的量越多，相當(dāng)于柱的容量大， 因此又稱分配容量或容量因子。它

17、是衡量色譜柱對(duì)被分離組分保留能 力的重要參數(shù)。k值也決定于組分及固定相熱力學(xué)性質(zhì)。它不僅隨柱 溫、柱壓變化而變化，而且還與流動(dòng)相及固定相的體積有關(guān)。k = mt /mk =CsVs / CmVm式中Cs, Cm分別為組分在固定相和流動(dòng)相的濃度；Vm為柱中流動(dòng) 相的體積，近似等于死體積。Vs為柱中固定相的體積，在各種不同 的類型的色譜中有不同的含義。例如：在分配色譜中，Vs表示固定液的體積；在尺寸排阻色譜中， 則表示固定相的孔體積。分配比k值可直接從色譜圖中測(cè)得(推導(dǎo)過(guò)程教材P.2 96 2 97)。k = (t r - t 0 )/ t 0= t r / t 0 = V r / V 04. 分

18、配系數(shù)K與分配比 k的關(guān)系K = k .-其中卩稱為相比率，它是反映各種色譜柱柱型特點(diǎn)的又一個(gè)參 數(shù)。例如，對(duì)填充柱，其卩值一般為635 ;對(duì)毛細(xì)管柱，其卩值為 6 0 600。4. 分配系數(shù) K及分配比k與選擇因子a的關(guān)系對(duì)A、B兩組分的選擇因子，用下式表示：a = t r ( B) / t r (A ) = k ( A)/ k ( B) =K ( A)/ K通過(guò)選擇因子a把實(shí)驗(yàn)測(cè)量值k與熱力學(xué)性質(zhì)的分配系數(shù)K直 接聯(lián)系起來(lái)，a對(duì)固定相的選擇具有實(shí)際意義。如果兩組分的K或k 值相等，則a =1 ,兩個(gè)組分的色譜峰必將重合，說(shuō)明分不開(kāi)。兩組分 的K或k值相差越大，則分離得越好。因此兩組分具有不

19、同的分配系 數(shù)是色譜分離的先決條件。圖中Ka>Kb ,因此，A組分在移動(dòng)過(guò)程中滯后。隨著兩組分在色 譜柱中移動(dòng)距離的增加，兩峰間的距離逐漸變大，同時(shí)，每一組分的 濃度輪廓（即區(qū)域?qū)挾龋┮猜儗挕ｏ@然，區(qū)域擴(kuò)寬對(duì)分離是不利 的，但又是不可避免的。若要使A、B組分完全分離，必須滿足以下 三占：八、第一，兩組分的分配系數(shù)必須有差異；第二，區(qū)域擴(kuò)寬的速率應(yīng)小于區(qū)域分離的速度；第三，在保證快速分離的前提下，提供足夠長(zhǎng)的色譜柱第一、二點(diǎn)是完全分離的必要條件。作為一個(gè)色譜理論，它不 僅應(yīng)說(shuō)明組分在色譜柱中移動(dòng)的速率，而且應(yīng)說(shuō)明組分在移動(dòng)過(guò)程中 引起區(qū)域擴(kuò)寬的各種因素。塔板理論和速率理論均以色譜過(guò)程中

20、分配 系數(shù)恒定為前提，故稱為線性色譜理論。（二）塔板理論把色譜柱比作一個(gè)精餾塔，沿用精餾塔中塔板的概念來(lái)描述組 分在兩相間的分配行為，同時(shí)引入理論塔板數(shù)作為衡量柱效率的指 標(biāo) ，即 色 譜 柱 是 由 一 系 列 連 續(xù) 的 、相 等 的 水 平 塔 板 組 成 。每 一 塊 塔 板 的 高 度 用 H 表 示 ， 稱為 塔 板 高度 ， 簡(jiǎn) 稱 板 高 。塔板理論假設(shè)：1. 在 柱 內(nèi) 一 小 段 長(zhǎng) 度 H 內(nèi) ， 組 分 可 以 在 兩 相 間 迅 速 達(dá) 到 平 衡 。 這 一 小 段 柱 長(zhǎng) 稱 為 理 論 塔 板 高 度 H。2. 以 氣 相 色 譜 為 例 ，載 氣 進(jìn) 入 色

21、譜 柱 不 是 連 續(xù) 進(jìn) 行 的 ，而 是 脈 動(dòng) 式 ， 每次進(jìn)氣為一個(gè)塔板體積（A Vm）。3. 所 有 組 分 開(kāi) 始 時(shí) 存 在 于 第 0 號(hào) 塔 板 上， 而 且 試 樣 沿 軸（ 縱 ） 向 擴(kuò) 散可忽略。4. 分 配 系 數(shù) 在 所 有 塔 板 上 是 常 數(shù) ， 與 組 分 在 某 一 塔 板 上 的 量 無(wú) 關(guān) 。簡(jiǎn) 單 地 認(rèn) 為 ：在 每 一 塊 塔 板 上 ，溶 質(zhì) 在兩 相 間 很 快 達(dá) 到 分 配 平 衡 ，然 后 隨 著 流 動(dòng) 相 按 一 個(gè) 一 個(gè) 塔 板 的 方 式 向 前 移 動(dòng) 。對(duì) 于 一 根 長(zhǎng) 為 L 的 色 譜 柱 ，溶 質(zhì) 平 衡 的 次

22、 數(shù) 應(yīng)為 ：n = L / Hn 稱 為 理 論 塔 板 數(shù) 。 與 精 餾 塔一 樣 ，色譜 柱 的 柱 效 隨 理 論 塔 板 數(shù) n 的 增 加 而 增 加 ，隨 板 高 H 的 增 大 而減 小 。塔板理論指出：第 一 ， 當(dāng) 溶 質(zhì) 在 柱 中 的平 衡 次 數(shù) ， 即 理論 塔 板 數(shù) n 大 于 50 時(shí) ，可 得 到 基 本 對(duì) 稱的 峰 形 曲線 。 在 色 譜 柱 中 ，n 值一 般 很 大 ，如 氣 相 色 譜 柱的 n 約 為 10 3 106 ， 因 而 這 時(shí) 的 流出 曲 線 可 趨 近 于 正 態(tài) 分 布曲線。第二，當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后，只要各組分在兩相間的分配

23、 系 數(shù) 有 微 小 差 異 ，經(jīng) 過(guò)反 復(fù) 多 次 的 分 配 平衡 后 ，仍 可獲 得 良 好 的 分 離 。第三，n與半峰寬及峰底寬的關(guān)系式為：n = 5. 54( t r / Wi/2)2 =16( t r / W)2式中t r與W/ 2( W )應(yīng)采用同一單位(時(shí)間或距離)。從公式可以看出，在t r 一定時(shí)，如果色譜峰很窄，則說(shuō)明n越大，H越小， 柱效能越高。在實(shí)際工作中，由公式 n = L / H和 n = 5.54(t r / W 1/2) 2=1 6 ( t r / W) 2計(jì)算出來(lái)的的n和H值有時(shí)并不能充分地反映色譜柱的分離效能，因 為采用t r計(jì)算時(shí)，沒(méi)有扣除死時(shí)間t m，

24、 所以常用有效塔板數(shù)n有效 表示柱效：n 有效=5.54 (t r / Wi/2)2 = 16( t r / W)2有效板咼 ：H有效=L / n有效因?yàn)樵谙嗤纳V條件下，對(duì)不同的物質(zhì)計(jì)算的塔板數(shù)不一樣， 因此，在說(shuō)明柱效時(shí)，除注明色譜條件外，還應(yīng)指出用什么物質(zhì)進(jìn)行 測(cè)量。例 已知某組分峰的峰底寬為40 s ,保留時(shí)間為400 s ，計(jì)算此 色譜柱的理論塔板數(shù)。解： n =1 6 ( t r / W ) 2= 1 6( 40 0 /4 0) 2= 1 600 塊塔板理論是一種半經(jīng)驗(yàn)性理論。它用熱力學(xué)的觀點(diǎn)定量說(shuō)明了 溶質(zhì)在色譜柱中移動(dòng)的速率，解釋了流出曲線的形狀，并提出了計(jì)算 和評(píng)價(jià)柱效高低

25、的參數(shù)。但是，色譜過(guò)程不僅受熱力學(xué)因素的影響， 而且還與分子的擴(kuò)散、傳質(zhì)等動(dòng)力學(xué)因素有關(guān)，因此塔板理論只能定 性地給出板高的概念，卻不能解釋板高受哪些因素影響；也不能說(shuō)明 為 什 么 在 不 同 的 流 速下 ，可 以測(cè) 得 不 同 的 理 論 塔 板 數(shù) ，因 而 限 制 了 它 的應(yīng)用。（三）速率理論19 56 年 荷 蘭 學(xué) 者 va n D ee mte r （ 范 第 姆 特 ） 等 在 研 究 氣 液 色 譜 時(shí) ，提 出 了 色 譜 過(guò) 程 動(dòng) 力 學(xué) 理 論 速 率 理 論 。他 們 吸 收 了 塔 板 理 論 中 板 高 的 概 念 ，并 充 分 考 慮 了組 分 在 兩 相

26、 間 的 擴(kuò) 散 和 傳 質(zhì) 過(guò) 程 ，從 而 在 動(dòng) 力 學(xué) 基 礎(chǔ) 上 較 好地 解 釋 了影 響 板 高 的 各 種因 素 。該 理 論 模 型 對(duì) 氣 相 、 液 相 色 譜 都 適 用。 van Dee mt er 方 程 的 數(shù) 學(xué) 簡(jiǎn) 化 式 為H = A + B / u + C u式 中 u 為 流 動(dòng) 相 的 線 速 度 ； A、 B、 C、 為 常 數(shù) ， 分 別 代 表 渦 流 擴(kuò) 散系數(shù)、分子擴(kuò)散項(xiàng)系數(shù)、傳質(zhì)阻力項(xiàng)系數(shù)。第 三 節(jié)色 譜 法 基 本 原 理1. 渦 流 擴(kuò) 散 項(xiàng) A在 填 充 色 譜 柱 中 ，當(dāng) 組 分 隨 流 動(dòng) 相 向 柱 出口 遷 移 時(shí)，流

27、動(dòng) 相 由 于 受 到 固 定 相 顆 粒 障礙 ，不 斷改 變 流 動(dòng) 方 向 ，使 組 分 分 子 在 前 進(jìn) 中 形 成紊亂的類似渦流的流動(dòng)，故稱渦流擴(kuò)散。由于填充物顆粒大小的不同及填充物的不均勻性，使組分在色譜柱 中 路 徑 長(zhǎng) 短 不 一 ， 因 而 同 時(shí) 進(jìn) 色 譜 柱 的 相 同 組 分 到 達(dá) 柱 口 時(shí) 間并不一致，引起了色譜峰的變寬。色譜峰變寬的程度由下式?jīng)Q定：A =2 入 dp上 式 表 明 ，A 與 填 充 物的 平 均 直徑 d p 的大 小 和 填 充 不 規(guī) 則 因 子 入有關(guān)，與 流動(dòng)相的性質(zhì)、線 速度和組分性質(zhì)無(wú)關(guān)。為了減少渦流擴(kuò) 散，提高柱效，使用細(xì)而均勻

28、的顆粒，并且填充均勻是十分必要的。 對(duì) 于 空 心 毛 細(xì) 管 ， 不存 在 渦 流擴(kuò) 散 。 因 此 A = 0。2. 分 子 擴(kuò) 散 項(xiàng) B / u ( 縱 向 擴(kuò) 散 項(xiàng) )縱 向 分 子 擴(kuò) 散是 由 濃 度 梯 度 造 成 的 。組 分 從 柱 入 口 加入 ，其 濃 度 分 布 的 構(gòu) 型 呈“ 塞 子 ”狀 。它 隨 著 流動(dòng) 相 向 前 推 進(jìn) ，由 于 存 在 濃 度 梯 度 ，“ 塞 子 ” 必 然 自 發(fā) 的 向 前 和 向 后 擴(kuò) 散 ， 造 成 譜 帶 展 寬 。 分 子 擴(kuò) 散 項(xiàng)系數(shù)為 B = 2 yDgY是填充柱內(nèi)流動(dòng)相擴(kuò)散路徑彎曲的因素，也稱彎曲因子，它 反

29、映 了 固 定 相 顆 粒 的 幾 何 形 狀對(duì) 自 由 分 子 擴(kuò) 散 的 阻 礙 情況 。Dg為組分在流動(dòng)相中擴(kuò)散系數(shù)(cm3 s-1),分子擴(kuò)散項(xiàng)與組分 在 流 動(dòng) 相 中 擴(kuò) 散系 數(shù) Dg 成 正 比 .Dg 與 流 動(dòng) 相 及 組 分 性 質(zhì) 有 關(guān) ：( a) 相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 大 的 組 分 Dg 小 ， Dg 反 比 于 流 動(dòng) 相 相 對(duì) 分 子 質(zhì) 量 的 平 方 根，所 以采 用相 對(duì)分子質(zhì)量 較大的流 動(dòng)相，可使B 項(xiàng)降 低；( b) D g隨柱 溫增 高而 增加，但 反 比于柱壓 。另 外 縱 向 擴(kuò) 散 與 組 分 在 色 譜 柱 內(nèi) 停 留 時(shí) 間 有 關(guān)

30、 ，流 動(dòng) 相 流 速 小 ， 組 分 停留時(shí) 間長(zhǎng) ，縱 向擴(kuò)散就 大 。因 此為 降低 縱向擴(kuò) 散 影 響 ，要 加大流 動(dòng) 相速度 。對(duì) 于液相色譜， 組 分在流動(dòng) 相中縱 向擴(kuò)散 可以 忽略。3. 傳 質(zhì) 阻 力 項(xiàng) Cu由 于 氣 相 色 譜 以 氣 體 為 流 動(dòng) 相 ， 液 相 色 譜 以 液 體 為 流 動(dòng) 相 ， 它 們 的 傳 質(zhì) 過(guò) 程 不 完 全相 同 。1) 氣 液 色 譜傳質(zhì)阻力系數(shù)C包括氣相傳質(zhì)阻力系數(shù)Cg和液相傳質(zhì)阻力系數(shù) Ci兩項(xiàng)，即C = C g + C i氣相傳質(zhì)過(guò)程是指試樣組分從氣相移動(dòng)到固定相表面的過(guò)程。這 一過(guò)程中試樣組分將在兩相間進(jìn)行質(zhì)量交換，即進(jìn)

31、行濃度分配。有的 分子還來(lái)不及進(jìn)入兩相界面，就被氣相帶走；有的則進(jìn)入兩相界面又來(lái)不及返回氣相。這樣使得試 樣在兩相界面上不 能瞬間達(dá)到分 配平衡，引 起滯后現(xiàn)象，從而使色譜 峰變寬。對(duì)于填充柱，氣相傳質(zhì)阻力系數(shù)Cg為：Cg= 0. 01 k2 / (1+ k) 2 dp /Dg式中k為容量因子。由上式看出，氣相傳質(zhì)阻力與填充物粒度 dp的平方成正比，與組分在載氣流中的擴(kuò)散系數(shù)Dg成反比。因此， 采用粒度小的填充物和相對(duì)分子質(zhì)量小的氣體(如氫氣)做載氣，可 使Cg減小，提高柱效。液相傳質(zhì)過(guò)程是指試樣組分從固定相的氣/液界面移動(dòng)到液相 內(nèi)部，并發(fā)生質(zhì)量交換，達(dá)到分配平衡，然后又返回氣/液界面的傳

32、質(zhì)過(guò)程。這個(gè)過(guò)程也需要一定的時(shí)間，此時(shí)，氣相中組分的其它分子 仍隨載氣不斷向柱口運(yùn)動(dòng)，于是造成峰形擴(kuò)張。液相傳質(zhì)阻力系數(shù) Ci 為：Ci = 2 /3 k / (1 + k )2* d f2 / Di由上式看出，固定相的液膜厚度df薄，組分在液相的擴(kuò)散系數(shù) Di大，則液相傳質(zhì)阻力就小。降低固定液的含量，可以降低液膜厚度， 但k值隨之變小，又會(huì)使Ci增大。當(dāng)固定液含量一定時(shí)，液膜厚度 隨載體的比表面積增加而降低，因此，一般采用比表面積較大的載體 來(lái)降低液膜厚度。但比表面太大，由于吸附造成拖尾峰，也不利于分離。雖然提高柱溫可增大Di,但會(huì)使k值減小，為了保持適當(dāng)?shù)腃i 值，應(yīng)控制適宜的柱溫。（2

33、）液液分配色譜傳質(zhì)阻力系數(shù)（C）包含流動(dòng)相傳質(zhì)阻力系數(shù)（Cm）和固定相傳 質(zhì)阻力系數(shù)（Cs），即Cm +其中Cm又包含流動(dòng)的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力和滯留的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力，即：Cm =Dm +2s md p/ D式中右邊第一項(xiàng)為流動(dòng)的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力。當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)色 譜柱內(nèi)的填充物時(shí)，靠近填充物顆粒的流動(dòng)相流速比在流路中間的稍 慢一些，故柱內(nèi)流動(dòng)相的流速是不均勻的。這種傳質(zhì)阻力對(duì)板高的影響與固定相粒度dp的平方成正比， 與試樣分子在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)Dm成反比，3 m是由柱和填充的性 質(zhì)決定的因子。右邊第二項(xiàng)為滯留的流動(dòng)相中的傳質(zhì)阻力。這是由 于固定相的多孔性，會(huì)造成某部分流動(dòng)相滯留在一個(gè)局部

34、，滯留在固 定相微孔內(nèi)的流動(dòng)相一般是停滯不動(dòng)的流動(dòng)相中的試樣分子要與固 定相進(jìn)行質(zhì)量交換，必須首先擴(kuò)散到滯留區(qū)。如果固定相的微孔既小 又深，傳質(zhì)速率就慢，對(duì)峰的擴(kuò)展影響就大（如教材P. 302圖15.6 所示）。式中3 m是一常數(shù)，它與顆粒微孔中被流動(dòng)相所占據(jù)部分的 分?jǐn)?shù)及容量因子有關(guān)。顯然，固定相的粒度愈小，微孔孔徑愈大，傳 質(zhì)速率就愈快，柱效就高。對(duì)高效液相色譜固定相的設(shè)計(jì)就是基于這液液色譜中固定相傳質(zhì)阻力系數(shù)（Cs）可用下式表示：2Cs=. s df / Ds公式說(shuō)明試樣分子從流動(dòng)相進(jìn)入固定液內(nèi)進(jìn)行質(zhì)量交換的傳質(zhì)過(guò)程 與液膜厚度df平方成正比，與試樣分子在固定液的擴(kuò)散系數(shù)Ds成反 比。式

35、中3 s是與容量因子k有關(guān)的系數(shù)。氣相色譜速率方程和液相色譜速率方程的形式基本一致，主要 區(qū)別在液液色譜中縱向擴(kuò)散項(xiàng)可忽略不計(jì)，影響柱效的主要因素是傳 質(zhì)阻力項(xiàng)。4. 流動(dòng)相線速度對(duì)板高的影響(1 ) LC 和 GC 的 H-u 圖根據(jù)va n Dee mt er公式作LC和 GC的 H-u圖，LC和 GC的 H- u圖十分相似，對(duì)應(yīng)某一流速都有一個(gè)板高的極小值，這個(gè)極小值就是 柱效最高點(diǎn)；LC板高極小值比GC的極小值小一個(gè)數(shù)量級(jí)以上，說(shuō)明 液相色譜的柱效比氣相色譜高得多；LC的板高最低點(diǎn)相應(yīng)流速比起 GC的流速亦小一個(gè)數(shù)量級(jí)，說(shuō)明對(duì)于LC,為了取得良好的柱效，流 速不一定要很高。(2 )分子

36、擴(kuò)散項(xiàng)和傳質(zhì)阻力項(xiàng)對(duì)板高的貢獻(xiàn)較低線速時(shí)，分子擴(kuò)散項(xiàng)起主要作用；較高線速時(shí)，傳質(zhì)阻 力項(xiàng)起主要作用；其中流動(dòng)相傳質(zhì)阻力項(xiàng)對(duì)板高的貢獻(xiàn)幾乎是一個(gè)定 值。在高線速度時(shí)，固定相傳質(zhì)阻力項(xiàng)成為影響板高的主要因素，隨 著速度增高，板高值越來(lái)越大，柱效急劇下降。5. 固定相粒度大小對(duì)板高的影響粒度越細(xì)，板高越小，并且受線速度影響亦小 這就是為什么在HPLC中采用細(xì)顆粒作固定相的根據(jù)。當(dāng)然，固定相 顆粒愈細(xì)，柱流速愈慢。只有采取高壓技術(shù)，流動(dòng)相流速才能符合實(shí) 驗(yàn)要求。第四節(jié)分離度分離度R是一個(gè)綜合性指標(biāo)。分離度是既能反映柱效率又能反映選擇性的指標(biāo)，稱總分離效 能指標(biāo)。分離度又叫分辨率，它定義為相鄰兩組分色譜

37、峰保留值之差 與兩組分色譜峰底寬總和之半的比值，即R =2 （t r 2 - t rl）/ W 1 +W2R值越大，表明相鄰兩組分分離越好。一般說(shuō)，當(dāng)R<1時(shí)，兩 峰有部分重疊；當(dāng)R=1時(shí)，分離程度可達(dá)98% ；當(dāng)R=1.5時(shí)，分離程 度可達(dá)99.7 %0通常用R=1.5作為相鄰兩組分已完全分離的標(biāo)志。第五節(jié) 基本色譜分離方程式分離度受柱效（n ）、選擇因子（a）和容量因子(k)三個(gè)參數(shù)的控制。對(duì)于難分離物質(zhì)對(duì)，由于它們的分配系數(shù)差別小，可合理地假設(shè) k 1k2=k , WW2 =Wo由n =1 6( t r/W2得：1/ W=(n /4)(1 /t r )分離度R為：R =(n /4

38、)* (a- 1/a)(k /1+ k) - ( 1 )上式即為基本色譜分離方程式在實(shí)際應(yīng)用中，往往用neff代替n 。2 n =( 1 + k/k)neff基本的色譜方程的表達(dá)式：R =(盜 n ef f /4)* ( a - 1/ a )-(2 )1. 分離度與柱效的關(guān)系由公式(2 )可以看出，具有一定相對(duì)保留值a的物質(zhì)對(duì)，分離度直接和有效塔板數(shù)有關(guān)，說(shuō)明有效塔板數(shù)能正確地代表柱效能。由公式(1 )說(shuō)明分離度與理論塔板數(shù)的關(guān)系還受熱力學(xué)性質(zhì)的影響。當(dāng)固定相確定，被分離物質(zhì)對(duì)的a確定后，分離度將取決于n<這時(shí)，對(duì)于一定理論板高的柱子，分離度的平方與柱長(zhǎng)成正比，即2(R1 /R2)= n

39、 / n 2 = L1 / L 2說(shuō)明用柱長(zhǎng)的色譜柱可以提高分離度，但延長(zhǎng)了分析時(shí)間。因 此，提 高分離度的好方法是制備出一根性能優(yōu)良的柱子，通過(guò)降低板 高，以提高分離度。2. 分離度與選擇因子的關(guān)系由基本色譜方程式判斷，當(dāng) a = 1時(shí)，R = 0。這時(shí)，無(wú)論怎樣 提高柱效也無(wú)法使兩組分分離。顯然，a大，選擇性好。研究證明a 的微小變化，就能引起分離度的顯著變化。一般通過(guò)改變固定相和流 動(dòng)相的性質(zhì)和組成或降低柱溫，可有效增大a值3. 分離度與容量因子的關(guān)系如果設(shè) Q=( n /4)( a - 1/ a )，那么：R = Q ( k /1 + k )當(dāng)k>10時(shí)，隨容量因子增大，分離度的

40、增長(zhǎng)是微乎其微的。一般取k為2 10最宜。對(duì)于GC,通過(guò)提高溫度，可選擇合適的k值， 以改進(jìn)分離度。而對(duì)于LC,只要改變流動(dòng)相的組成，就能有效地控 制k值。它對(duì)LC的分離能起到立竿見(jiàn)影的效果。4. 分離度與分析時(shí)間的關(guān)系當(dāng)k在25時(shí)，可在較短的分析時(shí)間，取得良好的分離度。第六節(jié) 色譜定性和定量分析一、色譜的定性分析色譜定性分析就是要確定各色譜峰所代表的化合物。由于各種 物質(zhì)在一定的色譜條件下均有確定的保留值，因此保留值可作為一種 定性指標(biāo)。目前各種色譜定性方法都是基于保留值的。但是不同物質(zhì) 在同一色譜條件下，可能具有相似或相同的保留值，即保留值并非專 屬的。因此僅根據(jù)保留值對(duì)一個(gè)完全未知的樣品

41、定性是困難的。如果 在了解樣品的來(lái)源、性質(zhì)、分析目的的基礎(chǔ)上，對(duì)樣品組成作初步的 判斷，再結(jié)合下列的方法則可確定色譜峰所代表的化合物。(一) 利用純物質(zhì)對(duì)照定性在一定的色譜條件下，一個(gè)未知物只有一個(gè)確定的保留時(shí)間。 因此將已知純物質(zhì)在相同的色譜條件下的保留時(shí)間與未知物的保留 時(shí)間進(jìn)行比較，就可以定性鑒定未知物。若二者相同，則未知物可能 是已知的純物質(zhì)；不 同，則未知物就不是該純物質(zhì)。純物質(zhì)對(duì)照法定 性只適用于組分性質(zhì)已有所了解，組成比較簡(jiǎn)單，且有純物質(zhì)的未知 物。（二）相對(duì)保留值法相對(duì)保留值a is是指組分i與基準(zhǔn)物質(zhì)S調(diào)整保留值的比值a is = t ri / t rs '= Vr

42、i / Vr s它僅隨固定液及柱溫變化而變化，與其它操作條件無(wú)關(guān)。相對(duì)保留值測(cè)定方法：在某一固定相及柱溫下，分別測(cè)出組分 i和基準(zhǔn)物質(zhì)s的調(diào)整保留值，再按上式計(jì)算即可。用已求出的相對(duì)保留值與文獻(xiàn)相應(yīng)值比較即可定性。通常選容易得到純品的，而且與被分析組分相近的物質(zhì)作基準(zhǔn) 物質(zhì)，如正丁烷、環(huán)己烷、正戊烷、苯、對(duì)二甲苯、環(huán)己醇、環(huán)己酮 等。（三）加入已知物增加峰高法當(dāng)未知樣品中組分較多，所得色譜峰過(guò)密，用上述方法不易辨 認(rèn)時(shí)，或僅作未知樣品指定項(xiàng)目分析時(shí)均可用此法。首先作出未知樣 品的色譜圖，然后在未知樣品加入某已知物，又得到一個(gè)色譜圖。峰 高增加的組分即可能為這種已知物。第六節(jié) 色譜定性和定量分析

43、（四）保留指數(shù)定性法保留指數(shù)又稱為柯瓦(Kov at s )指數(shù)，它表示物質(zhì)在固定液上 的保留行為，是目前使用最廣泛并被國(guó)際上公認(rèn)的定性指標(biāo)。它具有 重現(xiàn)性好、標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一及溫度系數(shù)小等優(yōu)點(diǎn)。保留指數(shù)也是一種相對(duì)保留值，它是把正構(gòu)烷烴中某兩個(gè)組分 的調(diào)整保留值的對(duì)數(shù)作為相對(duì)的尺度，并假定正構(gòu)烷烴的保留指數(shù)為 n 10 0。被測(cè)物的保留指數(shù)值可用內(nèi)插法計(jì)算。例如，若確定物質(zhì)i在某固定液X上的保留指數(shù)I 1 x的數(shù)值。 先選取兩個(gè)正構(gòu)烷烴作為基準(zhǔn)物質(zhì)，其中一個(gè)的碳數(shù)為Z，另一個(gè)為 Z+1 ，它們的調(diào)整保留時(shí)間分別為t R(Z)和t R( Z + 1 )，使被測(cè)物質(zhì)i 的調(diào)整保留時(shí)間t R( i )恰好

44、于兩者之間，即t R( Z) : t R ( i ): t R( Z+ 1 )0將含物質(zhì)i和所選的兩個(gè)正構(gòu)烷烴的混合物注入其固定液X的色譜 柱，在一定溫度條件下繪制色譜圖。大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，化合物調(diào)整 保留時(shí)間的對(duì)數(shù)值與其保留指數(shù)間的關(guān)系基本上是一條直線關(guān)系。據(jù) 此，可用內(nèi)插法求算X 0I x = 100 Z + ( Igt R(i)- lg t r(z) /( lg t R(z+i)-lg t r(z)保留指數(shù)的物理意義在于：它是與被測(cè)物質(zhì)具有相同調(diào)整保留 時(shí)間的假想的正構(gòu)烷烴的碳數(shù)乘以100 o保留指數(shù)僅與固定相的性 質(zhì)、柱溫有關(guān)，與其它實(shí)驗(yàn)條件無(wú)關(guān)。其準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性都很好。只 要柱溫與固

45、定相相同，就可應(yīng)用文獻(xiàn)值進(jìn)行鑒定，而不必用純物質(zhì)相 對(duì)照。(五) 其它方法二、定量分析定量分析的任務(wù)是求出混合樣品中各組分的百分含量。色譜定 量的依據(jù)是，當(dāng)操作條件一致時(shí)，被測(cè)組分的質(zhì)量(或濃度)與檢測(cè) 器給出的響應(yīng)信號(hào)成正比。即 :- i = f i Ai式中 '為被測(cè)組分i的質(zhì)量；Ai為被測(cè)組分i的峰面積；f 為被測(cè)組分i的校正因子?？梢?jiàn)，進(jìn)行色譜定量分析時(shí)需要：（1）準(zhǔn)確測(cè)量檢測(cè)器的響應(yīng)信號(hào)一峰面積或峰高；（2）準(zhǔn)確求得比例常數(shù)一校正因子；（3）正確選擇合適的定量計(jì)算方法，將測(cè)得的峰面積或 峰高換算 為組分的百分含量。（一）峰面積測(cè)量方法峰面積是色譜圖提供的基本定量數(shù)據(jù)，峰面積測(cè)

46、量的準(zhǔn)確與否 直接影響定量結(jié)果。對(duì)于不同峰形的色譜峰采用不同的測(cè)量方法。（1）對(duì)稱形峰面積的測(cè)量一一峰高乘以半峰寬法對(duì)稱峰的面積 A = 1. 06 5 h W/2（2）不對(duì)稱形峰面積的測(cè)量一一峰高乘平均峰寬法對(duì)于不對(duì)稱峰的測(cè)量如仍用峰高乘以半峰寬，誤差就較大，因 此采用峰高乘平均峰寬法。A = 1/ 2* h（ W0. 15 + Wo.85）式中W0. 15和W0.85分別為峰高0.15 倍和0. 85倍處的峰寬。（二）定量校正因子色譜定量分析的依據(jù)是被測(cè)組分的量與其峰面積成正比。但是 峰面積的大小不僅取決于組分的質(zhì)量，而且還與它的性質(zhì)有關(guān)。即當(dāng) 兩個(gè)質(zhì)量相同的不同組分在相同條件下使用同一檢

47、測(cè)器進(jìn)行測(cè)定時(shí)， 所得的峰面積卻不相同。因此，混合物中某一組分的百分含量并不等 于該組分的峰面積在各組分峰面積總和中所占的百分率。這樣，就不 能直接利用峰面積計(jì)算物質(zhì)的含量。為了使峰面積能真實(shí)反映出物質(zhì) 的質(zhì)量，就要對(duì)峰面積進(jìn)行校正，即在定量計(jì)算是引入校正因子。校正因子分為絕對(duì)校正因子和相對(duì)校正因子。f i = m / Ai式中f i值與組分i質(zhì)量絕對(duì)值成正比，所以稱為絕對(duì)校正因子。 在定量分析時(shí)要精確求出fi值是比較困難的。一方面由于精確測(cè)量 絕對(duì)進(jìn)樣量困難；另一方面峰面積與色譜條件有關(guān)，要保持測(cè)定fi 值時(shí)的色譜條件相同，既不可能又不方便。另外即便能夠得到準(zhǔn)確的 fi值，也由于沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)

48、準(zhǔn)而無(wú)法直接應(yīng)用。為此提出相對(duì)校正因 子的概念來(lái)解決色譜定量分析中的計(jì)算問(wèn)題。1. 相對(duì)校正因子相對(duì)校正因子定義為f i= f i / f s即某組分i的相對(duì)校正因子f為組分i與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)s的絕對(duì)校 正因子之比。f i =（ m/Ai）/ （ ms/As） = （ m / m s）* （ As / A、）可見(jiàn)，相對(duì)校正因子f i就是當(dāng)組分i的質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)s相等時(shí)， 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積是組分i峰面積的倍數(shù)。若某組分質(zhì)量為m ,峰 面積Ai，則fJ Ai的數(shù)值與質(zhì)量為m的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積相等。也就是說(shuō)，通過(guò)相對(duì)校正因子，可以把各個(gè)組分的峰面積分別換算成與 其質(zhì)量相等的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的峰面積，于是比較標(biāo)準(zhǔn)就

49、統(tǒng)一了。這就是歸 一法求算各組分百分含量的基礎(chǔ)。2. 相對(duì)校正因子的表示方法上面介紹的相對(duì)校正因子中組分和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)都是以質(zhì)量表示 的，故又稱為相對(duì)質(zhì)量校正因子；若以摩爾為單位，相對(duì)摩爾校正因 子；另外相對(duì)校正因子的倒數(shù)還可定義為相對(duì)響應(yīng)值S'(分別為相對(duì) 質(zhì)量響應(yīng)值Sw 相對(duì)摩爾響應(yīng)值Sn )。通常所指的校正因子都是相 對(duì)校正因子。3. 相對(duì)校正因子的測(cè)定方法相對(duì)校正因子值只與被測(cè)物和標(biāo)準(zhǔn)物以及檢測(cè)器的類型有關(guān)， 而與操作條件無(wú)關(guān)。因此，f值可自文獻(xiàn)中查出引用。若文獻(xiàn)中 查不到所需的f值，也可以自己測(cè)定。常用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，對(duì)熱導(dǎo)檢 測(cè)器(TCD)是苯，對(duì)氫焰檢測(cè)器(FI D)是正庚烷。測(cè)定相對(duì)校正因子最好是用色譜純?cè)噭Ｈ魺o(wú)純品，也要確知 該物質(zhì)的百分含量。測(cè)定時(shí)首