第三章分子熒光光

1、第三章 分子熒光光譜法 第一節(jié) 概述 一、熒光的發(fā)現(xiàn)第一次記錄熒光現(xiàn)象的是16世紀(jì)西班牙的內(nèi)科醫(yī)生和植物學(xué)家N.Monardes，他于1575年提到，在含有一種稱為“Lignum Nephriticum”的木頭切片的水溶液中，呈現(xiàn)出極為可愛的天藍(lán)色。以后逐步有一些學(xué)者也觀察和描述過熒光現(xiàn)象，但對其本質(zhì)及含義的認(rèn)識都沒有明顯的進(jìn)展。直到1852年，對熒光分析法具有開拓性工作的Stokes在考察奎寧和綠色素的熒光時，用分光計觀察到其熒光的波長比入射光的波長稍為長些，而不是由光的漫反射引起的，從而導(dǎo)入熒光是光發(fā)射的概念，并提出了“熒光”這一術(shù)語，他還研究了熒光強度與熒光物質(zhì)濃度之間的關(guān)系，并描述了在

2、高濃度或某些外來物質(zhì)存在時的熒光猝滅現(xiàn)象?？梢哉f，他是第一個提出應(yīng)用熒光作為分析手段的人。1867年，Goppelsrde應(yīng)用鋁一桑色素配位化合物的熒光測定鋁，這是歷史上首次進(jìn)行的熒光分析工作。 進(jìn)入二十世紀(jì)以來，熒光現(xiàn)象被研究得更多了，在理論和實驗技術(shù)上都得到極大的發(fā)展。特別是近幾十年來，在其他學(xué)科迅速發(fā)展的影響下，隨著激光、計算機和電子學(xué)的新成就等一些新的科學(xué)及技術(shù)的引入，大大推動了熒光分析法在理論上及實驗技術(shù)上的發(fā)展，出現(xiàn)了許多新的理論和新的方法。 在我國，二十世紀(jì)五十年代初期僅有極少數(shù)的分析工作者從事熒光分析方面的研究工作。到了七十年代以后，已逐步形成一支在這個研究領(lǐng)域中的工作隊伍。目

3、前，研究內(nèi)容已從經(jīng)典的熒光分析方法擴展到新近發(fā)展起來的一些新方法和新技術(shù)。 磷光也是某些物質(zhì)在紫外光照射下所發(fā)射的光，早期并沒有與熒光明確的區(qū)分。1944年Lewis和Kasha提出了磷光與熒光的不同概念，指出磷光是分子從亞穩(wěn)的激發(fā)三重態(tài)躍遷回基態(tài)所發(fā)射出的光，它有別于從激發(fā)單重態(tài)躍遷回基態(tài)所發(fā)射的熒光。磷光分析法由于其有某些特點，幾十年來的理論研究及應(yīng)用也不斷得到發(fā)展。二、光致發(fā)光在一般溫度下，大多數(shù)分子處在基態(tài)的最低振動能級。處于基態(tài)的分子吸收能量(電能、熱能、化學(xué)能或光能等)后被激發(fā)為激發(fā)態(tài)。激發(fā)態(tài)是很不穩(wěn)定的，它將很快地釋放出能量又重新躍遷回基態(tài)。若分子返回基態(tài)時以發(fā)射電磁輻射(即光)

4、的形式釋放能量，就稱為“發(fā)光”。如果物質(zhì)的分子吸收了光能而被激發(fā)，躍遷回基態(tài)所發(fā)射的電磁輻射，稱為熒光和磷光。 第二節(jié) 基本原理一、熒光的產(chǎn)生（一）分子的激發(fā)每個分子中都具有一系列嚴(yán)格分立相隔的能級，稱為電子能極，而每個電子能級中又包含有一系列的振動能級和轉(zhuǎn)動能級。分子中電子的運動狀態(tài)除了電子所處的能級外，還包含有電子的多重態(tài)，用M=2S+1表示，S為各電子自旋量子數(shù)的代數(shù)和，其數(shù)值為0或1 。根據(jù)Pauli不相容原理，分子中同一軌道所占據(jù)的兩個電子必須具有相反的自旋方向，即自旋配對。若分子中所有電子都是自旋配對的，則S=0,M=1,該分子便處于單重態(tài)(或叫單重線)，用符號S表示。大多數(shù)有機化

5、合物分子的基態(tài)都處于單重態(tài)?；鶓B(tài)分子吸收能量后，若電子在躍遷過程中，不發(fā)生自旋方向的變化，這時仍然是M=1，分子處于激發(fā)的單重態(tài)激發(fā)的單重態(tài)；如果電子在躍遷過程中伴隨著自旋方向的變化自旋方向的變化，這時分子中便具有兩個自旋不配對的電子， 即S=1,M=3，分子處于激發(fā)的三重態(tài)三重態(tài)，用符號T表示。下圖為電子重態(tài)示意圖。（a）基態(tài)單重態(tài) （S0）（b）激發(fā)單重態(tài)（S） （c）激發(fā)三重態(tài)（T） 能量激發(fā)單重態(tài)與激發(fā)三重態(tài)的區(qū)別1、激發(fā)單重態(tài)分子是抗磁性分子，而激發(fā)三重態(tài)分子則是順磁性2、激發(fā)單重態(tài)的平均壽命大約為10-8s，而激發(fā)三重態(tài)的平均壽命長達(dá)10-4s3、電子由S0S1、S2等的躍遷較容易

6、，屬于允許躍遷，而由S0T1、T2等的躍遷很難發(fā)生，屬于禁阻躍遷。4、激發(fā)三重態(tài)比相應(yīng)的激發(fā)單重態(tài)能級稍低一些。處于激發(fā)態(tài)的分子是很不穩(wěn)定的，它可能通過輻射躍遷和非輻射躍遷的形式去活化(去激發(fā))釋放出多余的能量而返回基態(tài)。 輻射躍遷主要涉及到熒光，延遲熒光或磷光的發(fā)射；無輻射躍遷是指以熱的形式釋放多余的能量，包括振動弛豫、內(nèi)部轉(zhuǎn)移、系間跨越及外部轉(zhuǎn)移等過程。 振動弛豫(簡寫為VR)當(dāng)分子吸收光輻射(為圖中的1、2)后可能從基態(tài)的最低振動能級(V=0)躍遷到激發(fā)單重態(tài)Sn(如圖中S1、S2)的較高振動能級上。然后，在液相或壓力足夠高的氣相中，分子間的碰撞幾率很大，分子可能將過剩的振動能量以熱的形

7、式傳遞給周圍環(huán)境，而自身從激發(fā)態(tài)的高振動能級躍遷至該電子能級的最低振該電子能級的最低振動能級動能級上，這個過程稱為振動弛豫。發(fā)生振動弛豫的時間為1012s數(shù)量級。 內(nèi)部轉(zhuǎn)移(IC)當(dāng)高電子能級中的低振動能級與低電子能級中的高振動能級發(fā)生重疊時，常發(fā)生電子從高電子能級以無輻射躍遷形式轉(zhuǎn)移至低電子能級。如中，S2和T2中的低振動能級與S1和T1中的高振動能級重疊，電子可以通過振動能級的重疊從S2躍遷至S1，或從T2躍遷至T1。這個過程稱為內(nèi)部轉(zhuǎn)移。內(nèi)部轉(zhuǎn)移的時間為1011s1013s數(shù)量級。振動弛豫及內(nèi)部轉(zhuǎn)移的速率比由高激發(fā)態(tài)直接發(fā)射光子的速率快得多，所以，分子吸收輻射能后不管激發(fā)到哪一個激發(fā)單重

8、態(tài)，都能通過振動弛豫及內(nèi)部轉(zhuǎn)移而躍遷到最低(第一)激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級。 系間跨躍(ISC)系間跨躍是指不同多重態(tài)之間的無輻射躍遷過程，它涉及到受激發(fā)電子自旋狀態(tài)的改變。如由第一激發(fā)單重態(tài)S1躍遷至第一激發(fā)三重態(tài)T1，使原來兩個自旋配對的電子不再配對。這種躍遷是禁阻的(不符合光譜選律)，但如果兩個能態(tài)的能層有較大重疊時，如圖中S1的最低振動能級與T1的較高振動能級重疊，就有可能通過自旋一軌道耦合等作用實現(xiàn)這一躍遷。系間跨躍的速度較慢，經(jīng)歷的時間較長。 熒光發(fā)射(FE)處于激發(fā)單重態(tài)的電子經(jīng)振動弛豫及內(nèi)部轉(zhuǎn)移后到達(dá)第一激發(fā)單重態(tài)(S1)的最低振動能級(V=0)后，以輻射的形式躍遷回基態(tài)(S0

9、)的各振動能級，這個過程為熒光發(fā)射，發(fā)射的熒光波長為。由于經(jīng)過振動弛豫和內(nèi)部轉(zhuǎn)移的能量損失，因此熒光發(fā)射的能量比分子吸收的能量要小，熒光發(fā)射的波長比分子吸收的波長要長，即。第一激發(fā)單重態(tài)最低振動能級的平均壽命約為109104s，因此熒光壽命也在這一數(shù)量級。 磷光發(fā)射(PE)激發(fā)態(tài)的電子經(jīng)系間跨躍后到達(dá)激發(fā)三重態(tài)，經(jīng)過迅速的振動弛豫而躍遷至第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動能級，然后以輻射形式躍遷回基態(tài)的各振動能級，這個過程為磷光發(fā)射。磷光發(fā)射的躍遷仍然是自旋禁阻的，所以發(fā)光速度很慢。磷光的壽命為104100s。因此，外光源照射停止后，磷光仍可持續(xù)一短時間。由于經(jīng)過系間跨躍及T1 中振動弛豫丟失了一部分能

10、量，所以磷光波長比熒光波長要長，即。 必須指出的是 T1還可能通過熱激發(fā)而重新躍回S1 即T1S1，然后再由S1經(jīng)輻射躍遷回S0，即S1S0，發(fā)出熒光，這種熒光稱為延遲熒光，其壽命與磷光相近，但波長比磷光短。 外部轉(zhuǎn)移(EC)激發(fā)態(tài)分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子相互碰撞，并發(fā)生能量轉(zhuǎn)移的過程稱為外部轉(zhuǎn)移。外部轉(zhuǎn)移能使熒光或磷光的強度減弱甚至消失，這種現(xiàn)象稱為猝滅或熄滅。 熒光和磷光均屬于光致發(fā)光，所以都涉及到兩種輻射，即激發(fā)光(吸收)和發(fā)射光，因而也都具有兩種特征光譜，即激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。它們是熒光和磷光定性和定量分析的基本參數(shù)及依據(jù)。1. 激發(fā)光譜 通過測量熒光(或磷光)體的發(fā)光通量(即強度

11、)隨激發(fā)光波長的變化而獲得的光譜，稱為激發(fā)光譜。激發(fā)光譜的具體測繪方法是，通過掃描激發(fā)單色器，使不同波長的入射光照射激發(fā)熒光(磷光)體，發(fā)出的熒光(磷光)通過固定波長的發(fā)射單色器而照射到檢測器上，檢測其熒光(磷光)強度，最后通過記錄儀記錄光強度對激發(fā)光波長的關(guān)系曲線，即為激發(fā)光譜。通過激發(fā)光譜，選擇最佳激發(fā)波長發(fā)射熒光(磷光)強度最大的激發(fā)光波長，常用ex表示。二、激發(fā)光譜和發(fā)射光譜2. 發(fā)射光譜，也稱熒光光譜或磷光光譜 通過測量熒光(或磷光)體的發(fā)光通量(強度)隨發(fā)射光波長的變化而獲得的光譜，稱為發(fā)射光譜。其測繪方法是，固定激發(fā)光的波長，掃描發(fā)射光的波長，記錄發(fā)射光強度對發(fā)射光波長的關(guān)系曲線

12、，即為發(fā)射光譜。通過發(fā)射光譜選擇最佳的發(fā)射波長發(fā)射熒光(磷光)強度最大的發(fā)射波長，常用em表示。磷光發(fā)射波長比熒光來得長，圖為萘的激發(fā)光譜及熒光和磷光的發(fā)射光譜。 萘的激發(fā)光譜、熒光和磷光光譜 斯托克斯位移斯托克斯位移 ：在溶液熒光光譜中，所觀察到的熒光發(fā)射波長總是大于激發(fā)波長，emex 。Stokes于1852年首次發(fā)現(xiàn)這種波長位移現(xiàn)象，故稱Stokes位移。 斯托克斯位移說明了在激發(fā)與發(fā)射之間存在著一定的能量損失。激發(fā)態(tài)分子由于振動弛豫及內(nèi)部轉(zhuǎn)移的無輻射躍遷而迅速衰變到S1電子激發(fā)態(tài)的最低振動能級，這是產(chǎn)生其位移的主要原因；其次，熒光發(fā)射時，激發(fā)態(tài)的分子躍遷到基態(tài)的各振動能級，此時，不同振

13、動能級也發(fā)生振動弛豫至最低振動能級，也造成能量的損失；第三，溶劑效應(yīng)和激發(fā)態(tài)分子可能發(fā)生的某些反應(yīng)，也會加大斯托克斯位移。 熒光發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長無關(guān)熒光發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長無關(guān) 由于熒光發(fā)射是激發(fā)態(tài)的分子由第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級躍遷回基態(tài)的各振動能級所產(chǎn)生的，所以不管激發(fā)光的能量多大，能把電子激發(fā)到哪種激發(fā)態(tài)，都將經(jīng)過迅速的振動弛豫及內(nèi)部轉(zhuǎn)移躍遷至第一激發(fā)單重態(tài)的最低能級，然后發(fā)射熒光。因此除了少數(shù)特殊情況，如S1與S2的能級間隔比一般分子大(如)及可能受溶液性質(zhì)影響的物質(zhì)外，熒光光譜只有一個發(fā)射帶，且發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長無關(guān)。 熒光激發(fā)光譜的形狀與發(fā)射波長無關(guān)熒光激發(fā)光

14、譜的形狀與發(fā)射波長無關(guān) 由于在稀溶液中，熒光發(fā)射的效率(稱為量子產(chǎn)率)與激發(fā)光的波長無關(guān)，因此用不同發(fā)射波長繪制激發(fā)光譜時，激發(fā)光譜的形狀不變，只是發(fā)射強度不同而已。 熒光激發(fā)發(fā)光譜與吸收光譜的形狀相近似，熒光發(fā)射光譜與吸收光譜成鏡像關(guān)系 物質(zhì)的分子只有對光有吸收，才會被激發(fā)，所以，從理論上說，某化合物的熒光激發(fā)光譜的形狀，應(yīng)與它的吸收光譜的形狀完全相同。然而實際并非如此，由于存在著測量儀器的因素或測量環(huán)境的某些影響，使得絕大多數(shù)情況下，“表觀”激發(fā)光譜與吸收光譜兩者的形狀有所差別。只有在校正儀器因素后，兩者才非常近似，而如果也校正了環(huán)境因素后，兩面的形狀才相同。 如果把某種物質(zhì)的熒光發(fā)射光譜

15、和它的吸收光譜相比較低，便會發(fā)現(xiàn)兩者之間存在著“鏡像對稱”關(guān)系。如圖分別表示苝的苯溶液和硫酸奎寧的稀硫酸溶液的吸收光譜和熒光發(fā)射光譜。三、影響熒光的因素（一）熒光效率熒光效率越大，表示分子產(chǎn)生熒光的能力越強，熒光效率在01之間影響熒光效率的因素主要取決與分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)，同時也與外界環(huán)境有關(guān)（二）影響熒光的因素1、分子結(jié)構(gòu)（1）躍遷類型 實驗表明，大多數(shù)能發(fā)熒光的化合物都是由 *躍遷或n *躍遷激發(fā)，然后經(jīng)過振動弛豫等無輻射躍遷，再發(fā)生* n 躍遷或* 躍遷而產(chǎn)生熒光。 *躍遷通常產(chǎn)生較強的熒光效率1、其中 *躍遷吸收時躍遷的摩爾吸光系數(shù)比n *躍遷的大102103倍，（ *躍遷幾率大，為允許躍

16、遷），對激發(fā)光吸收較多，激發(fā)效率高 2、 *躍遷的壽命(107109)比n *躍遷的壽命(105107)短，在各種去激發(fā)過程的競爭中，激發(fā)態(tài)壽命短，其他非熒光過程發(fā)生幾率小，熒光效率高3、 *躍遷能級差比n *躍遷的大，體系間跨越的發(fā)生幾率小，對熒光過程有利。（2）共軛效應(yīng) 發(fā)生熒光(或磷光)的物質(zhì)，其分子都含有共軛雙鍵(鍵)的結(jié)構(gòu)體系。共軛體系越大， 電子的離域性越大，越容易被激發(fā)，熒光也就越容易發(fā)生，且熒光光譜向長波移動。大部分熒光物質(zhì)都具有芳環(huán)或雜環(huán)，芳環(huán)越大，其熒光(或磷光)峰越向長波移動，且熒光強度往往也較強。 如苯、萘、蒽三者的共軛程度依次增大，其熒光效率分別為0.11、0.29、

17、0.36.（三）剛性結(jié)構(gòu)和共平面效應(yīng) 實驗發(fā)現(xiàn)，多數(shù)具有剛性平面結(jié)構(gòu)的有機化合物分子都具有強烈的熒光，因為這種結(jié)構(gòu)可以減少分子的振動，使分子與溶劑或其他溶質(zhì)分子之間的相互作用減少，即可減少能量外部轉(zhuǎn)移的損失，有利于熒光的發(fā)射。而且平面結(jié)構(gòu)可以增大分子的吸光截面，增大摩爾吸光系數(shù)，增強熒光強度。酚酞與熒光黃(亦稱熒光素)的結(jié)構(gòu)十分相近，只是由于熒光黃分子中的氧橋使其具有剛性平面結(jié)構(gòu)，因而在溶液中呈現(xiàn)強烈的熒光，在0.1molL-1的NaOH溶液中，熒光效率達(dá)0.92，而酚酞卻沒有熒光。又如芴與聯(lián)二苯，由于芴中的亞甲基使分子的剛性平面增加，導(dǎo)致兩者在熒光性質(zhì)上的顯著差別，前者熒光產(chǎn)率接近于1，后者

18、僅為0.18萘與維生素A都具有5個共軛鍵，而前者為平面結(jié)構(gòu)，后者為非剛性結(jié)構(gòu)，因而前者的熒光強度為后者的5倍。 （4）取代基效應(yīng) 取代基的性質(zhì)(尤其是生色基團(tuán))對熒光體的熒光特性和強度均有強烈的影響。芳烴及雜環(huán)化合物的熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜及熒光效率常隨取代基的不同而異，由于目前對于激發(fā)態(tài)分子的性質(zhì)了解還很不夠，尚不能真正從機制上揭開其影響的秘密。其影響規(guī)律多出自實驗總結(jié)和推測。給電子取代基使熒光加強 屬于這類基團(tuán)的有NH2，NHR，NR2，OH，OR，CN等。由于這些基團(tuán)上的n電子云幾乎與芳環(huán)上的電子軌道平行，因而實際上它們共享了共軛電子，形成了p共軛，擴大共軛體系。因此，這類化合物的熒光波

19、長變長，熒光強度增大?？疾爝@類取代基對熒光特性的影響時必需注意，這類基團(tuán)中的n電子容易與極性溶劑相互作用，甚至形成氫鍵；另一方面，這類基團(tuán)往往是酸基或堿基，在堿或酸介質(zhì)中容易轉(zhuǎn)化為其鹽(共軛堿或共軛酸)，如酚在NaOH中，OH轉(zhuǎn)化為O ，苯胺在酸中，NH2轉(zhuǎn)化為NH3+，它們的熒光均大為減弱。 吸電子基團(tuán)使熒光減弱而磷光增強 屬于這類基團(tuán)的有如羰基(COOH，CHO，)，硝基(NO2)及重氮基等。這類基團(tuán)都會發(fā)生 躍遷，屬于禁阻躍遷，所以摩爾吸光系數(shù)小，熒光發(fā)射也弱，而 的系間跨躍較為強烈，同樣使熒光減弱，相應(yīng)磷光增強。 取代基位置的影響 取代基位置對芳烴熒光的影響通常為：鄰位，對位取代者增強

20、熒光，間位取代者抑制熒光(CN取代基例外)。取代基的空間阻礙對熒光也有明顯的影響。如下面化合物萘環(huán)上的8位引入SO3基時，由于空間阻礙使NR2與萘之間的鍵扭轉(zhuǎn)而減弱了平面構(gòu)型，影響了p共軛，導(dǎo)致熒光的減弱。同樣，1,2二苯乙烯的反式異構(gòu)體是強熒光物質(zhì)，而順式異構(gòu)體不發(fā)射熒光。 2、環(huán)境因素的影響(1)溫度的影響 溫度對于溶液的熒光強度有著顯著的影響。通常，隨著溫度的增高，熒光物質(zhì)溶液的熒光量子產(chǎn)率及熒光強度將降低，下圖為不同溫度下鄰菲啰啉的熒光光譜。（2）溶劑的影響 對于熒光發(fā)射的主要電子躍遷類型 *躍遷躍遷來說，電子激發(fā)態(tài)比基態(tài)具有更大的極性，所以隨著溶劑極性的增大，對激發(fā)態(tài)比對基態(tài)產(chǎn)生更大

21、的穩(wěn)定作用，因此降低了躍遷的能量，熒光光譜發(fā)生紅移，而且熒光增強。 溶劑的粘度增大，會增強熒光強度 含有重原子的溶劑，會使分子熒光強度減弱 （3）溶液pH值 帶有酸性基團(tuán)或堿性基團(tuán)的大多數(shù)芳香族化合物，其熒光特性都與溶液的酸度(pH)有關(guān)。這是因為在不同酸度介質(zhì)條件下，熒光體的存在型體不同，不同的型體(分子與其離子)在電子構(gòu)型上有所不同，而且基態(tài)和激發(fā)態(tài)所表現(xiàn)出來的酸、堿性也有所差別。因此不同酸度下，熒光光譜和熒光強度都可能發(fā)生變化。所以在熒光分析中一般都要較嚴(yán)格地控制溶液的pH值。 （4）熒光熄滅劑能引起熒光熄滅的物質(zhì)稱為熒光熄滅劑。如常用的有鹵素離子、重金屬離子、氧分子、硝基化合物、重氮化

22、合物、羰基化合物等。3、熒光物質(zhì)的濃度 當(dāng)?shù)蜐舛葧r，溶液的熒光強度與物質(zhì)的濃度呈正比。當(dāng)濃度高到一定程度時，因為分子間碰撞增多而使熒光強度減弱，稱為“自熄滅”4、其他方面比如氫鍵的原因（對熒光強度的影響有兩方面）、表面活性劑的原因（一般來講使熒光強度增加）第三節(jié) 熒光光度計組成：激發(fā)光源、單色器、樣品池、檢測器、放大顯示系統(tǒng)激發(fā)光源、單色器、樣品池、檢測器、放大顯示系統(tǒng)特殊點：兩個單色器、光源與檢測器通常呈直角兩個單色器、光源與檢測器通常呈直角激發(fā)光源激發(fā)光源：激發(fā)光源應(yīng)具有足夠的強度、適用波長范圍寬、穩(wěn)定等特點。常用的光源有高壓汞燈和氙弧燈。高壓汞燈：高壓汞燈是以汞蒸氣放電發(fā)光的光源，主要有

23、365、405、436nm 的三條譜線，尤以365nm譜線最強，一般濾光片式的熒光計多采用它為激發(fā)光源。 氙弧燈：是目前熒光分光分度計中應(yīng)用最廣泛的一種光源。它是一種短弧氣體放電燈，外套為石英，內(nèi)充氙氣，室溫時其壓力為506625Pa，工作時壓力為2026500Pa，具有光強度大，在200800nm 范圍內(nèi)是連續(xù)光源的特點。氙燈的燈內(nèi)氣壓高，啟動時的電壓高（2040KV），因此使用時一定要注意安全。 單色器單色器：熒光分析儀中應(yīng)用最多的單色器為光柵單色器光柵單色器，稱為熒光分光光度計。光柵有兩塊，第一塊為激發(fā)單色器，用于選擇激發(fā)光的波長，第二塊為發(fā)射單色器，用于選擇熒光發(fā)射波長，一般是后者的光

24、柵閃耀波長比前者來得長一些。在比較低檔次的熒光計中，采用濾光片作為單色器，多使用干涉濾光片以獲得純度較好的“單色光”。第一濾光片用以分離出所需用的激發(fā)光，第二濾光片用以濾去雜散光、瑞利光、拉曼光和雜質(zhì)所發(fā)射的熒光。樣品池樣品池：熒光分析的樣品池通常用石英材料做成，它與吸光分析法的液池不同在于，熒光樣品池的四面均為磨光透明面四面均為磨光透明面，同時一般僅有一種厚度為1cm的液池。檢測器檢測器：現(xiàn)在的熒光計多采用光電倍增管光電倍增管進(jìn)行檢測。檢測器的方向應(yīng)與激發(fā)光的方向成直角直角，以消除樣品池中透射光和雜散光的干擾。 第四節(jié) 定量分析方法原理：在一定條件下，熒光強度與濃度呈線性關(guān)系 If=Kc一、標(biāo)準(zhǔn)曲線法二、標(biāo)準(zhǔn)對比法：如果熒光物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線通過零點0,0,0,0,0,0,fxffsfxxsfxffsfxfxfsfsfIIIIcccIIIIKcIIKcIII為空白溶液的熒光強度0,fI