項(xiàng)目：維生素B12注射液含量測(cè)定ppt課件

1、1維生素維生素B12注射液含量測(cè)定注射液含量測(cè)定 2 2 一、 任務(wù)依據(jù) 【中國(guó)藥典】2015版 二部 P1236 維生素維生素B B1212注射液注射液本品為維生素本品為維生素B B1212的滅菌水溶液。含維生素的滅菌水溶液。含維生素B B1212（C C6363H H8888CoNCoN1414O O1414P P）應(yīng)為標(biāo)示量的）應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%90.0% 110.0%110.0%【含量測(cè)定】避光操作。精密量取本品適量，用水定【含量測(cè)定】避光操作。精密量取本品適量，用水定量稀釋成每量稀釋成每1mL1mL中約含維生素中約含維生素B B1212 25g 25g的溶液，照紫的溶液，照紫外外

2、- -可見(jiàn)分光光度法（可見(jiàn)分光光度法（通則通則04010401），在），在361nm361nm的波長(zhǎng)處的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，按測(cè)定吸光度，按C C6363H H8888CoNCoN1414O O1414P P的吸收系數(shù)（的吸收系數(shù)（ ）為）為207207計(jì)算，即得。計(jì)算，即得。1%1cmE 3 3 二、 任務(wù)分解 1. 實(shí)驗(yàn)原理 紫外紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)可見(jiàn)分光光度計(jì) 紫外紫外-可見(jiàn)分光光度法是通過(guò)被測(cè)物質(zhì)在紫可見(jiàn)分光光度法是通過(guò)被測(cè)物質(zhì)在紫外光區(qū)或可見(jiàn)光區(qū)的特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范外光區(qū)或可見(jiàn)光區(qū)的特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的的吸光度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分圍內(nèi)的的吸光度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定

3、量分析的光學(xué)分析方法。析的光學(xué)分析方法。 定量分析通常選擇物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)處定量分析通常選擇物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)出吸光度，然后用對(duì)照品或吸收系數(shù)求算出測(cè)出吸光度，然后用對(duì)照品或吸收系數(shù)求算出被測(cè)物質(zhì)的含量，多用于制劑的含量測(cè)定。被測(cè)物質(zhì)的含量，多用于制劑的含量測(cè)定。 4 4 二、 任務(wù)分解 2.計(jì)算計(jì)算稀釋倍數(shù) 根據(jù)維生素根據(jù)維生素B12注射液【含量測(cè)定】中內(nèi)容要求注射液【含量測(cè)定】中內(nèi)容要求描述，描述，“用水定量稀釋成用水定量稀釋成每每1mL中約含維生素中約含維生素B12 25g的溶液的溶液”?！疽?guī)格】（【規(guī)格】（1）1ml：0.05mg （2）1ml：0.1mg （3）1ml：0.25

4、mg （4）1ml：0.5mg （5）1ml：1mg （6）2ml：0.5mg 5 5 10mlmg025. 0mlmg25. 0ml1ug25ml2mg5 . 0供試品溶液濃度樣品溶液濃度稀釋倍數(shù) 以下均以規(guī)格2ml：0.5mg為例樣品溶液：實(shí)際使用的維生素B12注射液供試品溶液：按要求配制的每1mL中約含維生素B12 25g的溶液。 6 6 二、 任務(wù)分解3. 制定計(jì)劃(1)填寫(xiě)所需溶液、藥品及儀器藥品名稱規(guī)格數(shù)量用途及可用量維生素B12注射液2ml：0.5mg/2盒2盒藥品，1人水純化水500ml，1人儀器清洗、溶劑表表1 維生素維生素B12注射液含量測(cè)定所需藥品注射液含量測(cè)定所需藥品

5、7 7 二、 任務(wù)分解3. 制定計(jì)劃(1)填寫(xiě)所需溶液、藥品及儀器表表2 維生素維生素B12注射液含量測(cè)定所需儀器注射液含量測(cè)定所需儀器儀器名稱規(guī)格型號(hào)數(shù)量用途紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)北京通用T61臺(tái)含量測(cè)定石英比色皿石英1套含量測(cè)定移液管10ml1支溶液配制容量瓶100ml2支溶液配制洗瓶500ml1支洗滌、稀釋小燒杯100ml1個(gè)稀釋膠頭滴管2ml1支定容大燒杯500ml1個(gè)廢液杯洗耳球塑料1個(gè)移液 8 8 二、 任務(wù)分解 9 9 二、 任務(wù)分解3. 制定計(jì)劃(3)操作步驟測(cè)定步驟操作內(nèi)容數(shù)據(jù)記錄1.儀器檢定1. 雜散光的檢查2.波長(zhǎng)準(zhǔn)確度、吸光度準(zhǔn)確度檢定。3. 雜散光的檢查 定期檢查2.配

6、制供試品溶液精密量取一定體積定量稀釋成規(guī)定濃度的溶液。供試品的名稱、批號(hào)、生產(chǎn)廠家。3.比色皿配對(duì)使用的石英吸收池必須潔凈。當(dāng)吸收池中裝入同一溶劑，在規(guī)定波長(zhǎng)測(cè)定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配對(duì)使用，否則必須加以校正。 10 10 二、 任務(wù)分解3. 制定計(jì)劃(3)操作步驟測(cè)定步驟操作內(nèi)容數(shù)據(jù)記錄4.溶劑空白吸收將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質(zhì)）測(cè)定其吸收光度溶劑空白吸收=5.確定測(cè)定波長(zhǎng) 除另有規(guī)定外，在規(guī)定的吸收峰2nm處，再測(cè)幾點(diǎn)的吸光度，吸光度最大的波長(zhǎng)應(yīng)在規(guī)定的波長(zhǎng)2nm以內(nèi)，并以吸光度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。測(cè)定波長(zhǎng)= nm 6

7、.吸光度測(cè)定1.將參比液、測(cè)定液裝于吸收池中。2.以參比液為空白，測(cè)定吸光度，記錄。A1= A2=7.記錄與計(jì)算1.計(jì)算供試品的百分含量%2.計(jì)算平均百分含量%標(biāo)示量%= 平均百分含量%8.結(jié)果與判定1.將測(cè)得的含量與藥典規(guī)定值比較，得出結(jié)論。2.相對(duì)偏差均應(yīng)在0.5%以內(nèi)。相對(duì)偏差= 結(jié)論： 11 11 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （一）.使用前儀器的校正和檢定1.波長(zhǎng)準(zhǔn)確度1.1 波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的允差范圍 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)波長(zhǎng)準(zhǔn)確度允許誤差，紫外區(qū)為1nm，500nm處2nm。 P55-56（通則0401） 12 12 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （一）.使用前儀器的校正和檢定1.2 波長(zhǎng)準(zhǔn)確度檢定方法 1.用低壓汞

8、燈檢定 2.用儀器固有的氘燈檢定 3.用氧化鈥玻璃檢定 4.用高氯酸鈥溶液檢定 P55-56（通則0401） 13 13 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （一）.使用前儀器的校正和檢定2.吸光度準(zhǔn)確度 精密稱取在120干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，置1000ml量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀釋至1000ml，用配對(duì)的1cm石英池，以0.005mol/L硫酸液為空白，在235、257、313、350nm分別測(cè)定吸光度，然后換算成 ，測(cè)得值應(yīng)符合表1中規(guī)定的允差范圍。P56（通則0401）1%1cmE 14 14 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （一）.使用前儀器的校正和檢定表1 分光光度法允差范圍 波長(zhǎng)吸收強(qiáng)度

9、吸收系數(shù)允差范圍235最小124.5123.0126.0257最大144.0142.8146.2313最小48.647.050.3350最大106.6105.5108.51%1cmEP56（通則0401） 15 15 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （一）.使用前儀器的校正和檢定 3 .雜散光的檢查 可按表2所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英池中，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定透光率，應(yīng)符合表2中規(guī)定。表2 雜散光的檢查及限度試劑濃度（%，g/ml）測(cè)定用波長(zhǎng)（nm） 透光率（%）碘化鈉1.002200.8亞硝酸鈉5.003400.8P56（通則0401） 16 16 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （二）. 供試品溶液的配制 維

10、生素維生素 B12注射液注射液 10.00ml 100ml平行配制平行配制2份份水水 17 17 1.移液管使用 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 18 18 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 1.移液管使用移液管、刻度吸管 移液管的的拿持 潤(rùn)洗 19 19 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 1.移液管使用 吸液 調(diào)節(jié)液面 放出液體 20 20 配制測(cè)定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋時(shí)取容配制測(cè)定溶液時(shí)稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋時(shí)取容積一般不少于積一般不少于5ml。含量測(cè)定時(shí)供試品應(yīng)稱取。含量測(cè)定時(shí)供試品應(yīng)稱取2份，如為對(duì)照品比份，如為對(duì)照品比較法，對(duì)照品一般也應(yīng)稱取較法，對(duì)照品一般也應(yīng)稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱取供試品份。吸收系數(shù)檢查

11、也應(yīng)稱取供試品2份，平行操作，每份結(jié)果對(duì)平均值的偏差應(yīng)在份，平行操作，每份結(jié)果對(duì)平均值的偏差應(yīng)在0.5%以內(nèi)。作鑒以內(nèi)。作鑒別或檢查可取樣品別或檢查可取樣品1份。份。三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （二）. 供試品溶液的配制 P57-58 21 21 2.容量瓶的使用 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 用移液管移取一定體積的溶液于容量瓶中，加水至距標(biāo)線約用移液管移取一定體積的溶液于容量瓶中，加水至距標(biāo)線約1cm處處，等，等12分鐘，使附在瓶頸內(nèi)壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至彎分鐘，使附在瓶頸內(nèi)壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至彎液面下緣與標(biāo)線相切，然后蓋上瓶塞，左手用食指按住塞子，其余手液面下緣與標(biāo)線相切，然后蓋上瓶塞，左手用食指

12、按住塞子，其余手指拿住瓶頸標(biāo)線以上部分，右手指尖托住瓶底，將容量瓶倒轉(zhuǎn)，使氣指拿住瓶頸標(biāo)線以上部分，右手指尖托住瓶底，將容量瓶倒轉(zhuǎn)，使氣泡上升到頂，使瓶振蕩，正立后再次倒轉(zhuǎn)進(jìn)行振蕩，如此反復(fù)泡上升到頂，使瓶振蕩，正立后再次倒轉(zhuǎn)進(jìn)行振蕩，如此反復(fù)1520次以上，使瓶?jī)?nèi)溶液混合均勻。次以上，使瓶?jī)?nèi)溶液混合均勻。 22 22 2.容量瓶的使用 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 容量瓶 容量瓶的檢漏 轉(zhuǎn)移 初混 定容 23 23 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （二）. 供試品溶液的配制 加水至距標(biāo)線約1cm處，等12分鐘，使附在瓶頸內(nèi)壁的溶液流下后，再用滴管滴加水至彎液面下緣與標(biāo)線相切 24 24 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光

13、光度計(jì)的使用 1 .實(shí)驗(yàn)儀器的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器的準(zhǔn)備 開(kāi)機(jī)自檢開(kāi)機(jī)自檢 25 25 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 1開(kāi)機(jī)自檢結(jié)束，按開(kāi)機(jī)自檢結(jié)束，按Enter 鍵進(jìn)入儀器界面鍵進(jìn)入儀器界面按按Start鍵進(jìn)入測(cè)量界面鍵進(jìn)入測(cè)量界面1 .實(shí)驗(yàn)儀器的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器的準(zhǔn)備 進(jìn)入測(cè)量界面進(jìn)入測(cè)量界面按按GOTO 鍵輸入測(cè)鍵輸入測(cè)量波長(zhǎng)，輸入數(shù)字量波長(zhǎng)，輸入數(shù)字“361”按按Enter 鍵確鍵確認(rèn)輸入認(rèn)輸入23 26 26 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 2. 吸收池（比色皿）的配對(duì)檢查吸收池（比色皿）的配對(duì)檢查 清洗清洗比色皿的操作比色皿的操作裝液裝液擦拭擦拭放置放

14、置 27 27 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 2.吸收池（比色皿）的配對(duì)檢查吸收池（比色皿）的配對(duì)檢查 取吸收池時(shí)，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝樣品溶液的體積以池體積的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時(shí)應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無(wú)殘留溶劑。吸收池放入樣品室時(shí)應(yīng)注意每次放入方向相同。 28 28 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 2. 吸收池（比色皿）的配對(duì)檢查吸收池（比色皿）的配對(duì)檢查 比色皿的配對(duì)（測(cè)透光率）比色皿的配對(duì)（測(cè)透光率）進(jìn)入透光率測(cè)量界面進(jìn)入透光率測(cè)量界面透光率相差應(yīng)在透光率相差應(yīng)在0.3%0.3%以下，以下，否則必須加以校正值

15、否則必須加以校正值 29 29 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 2. 吸收池（比色皿）的配對(duì)檢查吸收池（比色皿）的配對(duì)檢查 使用后用溶劑及水沖洗干凈，晾干，防塵保存，吸收池如污染不易洗凈時(shí)可用硫酸發(fā)煙硝酸（3：1V/V）混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時(shí)，吸收池不宜在清潔液中長(zhǎng)時(shí)間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結(jié)晶會(huì)損壞吸收池的光學(xué)表面，并應(yīng)充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。P57 30 30 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 3. 溶劑空白吸收溶劑空白吸收對(duì)溶劑的要求 含有雜原子的有機(jī)溶劑，通常均具有很強(qiáng)的末端吸收。因此，當(dāng)作溶劑使用

16、時(shí)，它們的使用范圍均不能小于截止使用波長(zhǎng)。例如甲醇、乙醇。另外，當(dāng)溶劑不純時(shí)，也可能增加干擾吸收。因此，在檢查所用的溶劑在供試品所用的波長(zhǎng)附近是否符合要求，即將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質(zhì)）測(cè)定其吸收光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)符合表3規(guī)定。 P57（通則0401） 31 31 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 3. 溶劑空白吸收溶劑空白吸收 表表3 以空氣為空白測(cè)定溶劑在不同波長(zhǎng)處的吸光度的規(guī)定以空氣為空白測(cè)定溶劑在不同波長(zhǎng)處的吸光度的規(guī)定波長(zhǎng)范圍（nm） 220240 241250 251300 300以上吸光度 0.40 0.20 0

17、.10 0.05每次測(cè)定時(shí)應(yīng)采用同一廠牌批號(hào)，混合均勻的同批溶劑。P57（通則0401） 32 32 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 3. 溶劑空白吸收溶劑空白吸收 33 33 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 3. 溶劑空白吸收溶劑空白吸收 34 34 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 4.確定測(cè)定波長(zhǎng)確定測(cè)定波長(zhǎng) 123在給定波長(zhǎng)2nm處測(cè)樣品吸光度，選擇實(shí)際最大吸收波長(zhǎng)測(cè)定波長(zhǎng)是多少？測(cè)定波長(zhǎng)是多少？ 35 35 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用4.確定測(cè)定波長(zhǎng)確定測(cè)定波長(zhǎng) 測(cè)定時(shí)除另有規(guī)定者外，應(yīng)在規(guī)定的吸收峰2

18、nm處，再測(cè)幾點(diǎn)的吸光度，以核對(duì)供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸光度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)，除另有規(guī)定外吸光度最大波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)加減2nm以內(nèi)，否則應(yīng)考慮試樣的同一性、純度以及儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度。 P58（通則0401） 36 36 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 5. 供試品溶液的吸光度值的測(cè)定供試品溶液的吸光度值的測(cè)定 37 37 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 5. 供試品溶液的吸光度值的測(cè)定供試品溶液的吸光度值的測(cè)定 關(guān)于皿差問(wèn)題： 由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，或由儀器自動(dòng)扣除空白讀數(shù)

19、后再計(jì)算含量。 （通則0401） 38 38 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （三）. 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的使用 5.供試品溶液的吸光度值的測(cè)定供試品溶液的吸光度值的測(cè)定 供試品溶液的濃度，除各品種項(xiàng)下已有注明者外，供試品溶液的吸光度以在0.30.7之間為宜，吸光度讀書(shū)在此范圍誤差較小，并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸光度線性范圍，配制合適的讀數(shù)濃度。 P58（通則0401） 39 39 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （四）. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄與計(jì)算 1. 公式 %100b%1cm1標(biāo)供稀釋倍數(shù)百分含量CEA 40 40 三、實(shí)驗(yàn)實(shí)施 （四）. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄與計(jì)算 2.原始數(shù)據(jù)記錄表紫外可見(jiàn)分光光度法：記錄儀器型號(hào)，檢查溶劑是否符合要求的數(shù)據(jù)，吸收池的配對(duì)情況，供試品與對(duì)照品的稱量（平行試驗(yàn)各2份）及其溶解和稀釋情況，核對(duì)供試品溶液的最大吸收峰波長(zhǎng)是否正確，測(cè)定波長(zhǎng)及其吸光度值（或附儀器自動(dòng)打印記錄），計(jì)算式及結(jié)