高中生物實(shí)驗(yàn)13DNA片段的PCR擴(kuò)增預(yù)習(xí)導(dǎo)航浙科版

1、高中生物 實(shí)驗(yàn)13dna片段的pcr擴(kuò)增預(yù)習(xí)導(dǎo)航 浙科版一、pcr技術(shù)1pcr的全稱(chēng)是：_。2pcr技術(shù)是用于dna片段復(fù)制、擴(kuò)增的生化技術(shù)。3pcr技術(shù)用途：除用于基因擴(kuò)增外，還用于_。4pcr技術(shù)的具體應(yīng)用：在法學(xué)、醫(yī)學(xué)、食品和考古學(xué)上也是重要的實(shí)用工具，如_鑒定、_鑒定、食品質(zhì)量的確定、_病診斷、腫瘤病和其他疾病的診斷以及考古中人種的確定等。答案：1.聚合酶鏈反應(yīng)3測(cè)定dna序列4親子犯罪遺傳二、dna的體內(nèi)自我復(fù)制與pcr技術(shù)dna聚合酶在有_的存在時(shí)，利用4種_，可從_末端向_末端合成新鏈。pcr技術(shù)還需要_作為_(kāi)，這一段叫_。答案：dna模板脫氧核苷三磷酸53與dna模板互補(bǔ)的一段

2、單鏈dna聚合酶作用的起點(diǎn)引物三、pcr作用的過(guò)程11個(gè)循環(huán)的操作：步驟具體操作雙鏈dna_將雙鏈dna加熱至_，dna_，dna之間的_打開(kāi)，雙鏈分離(也叫做_)續(xù)表步驟具體操作與_結(jié)合雙鏈分離后，將溫度_，這一降溫過(guò)程叫_。退火后，引物可與2個(gè)_分別結(jié)合dna新鏈的_ _下，聚合酶可利用_組裝模板的互補(bǔ)鏈，從引物延伸至_末端2.一般大約需要重復(fù)上述3步驟_個(gè)循環(huán)。3結(jié)果：一個(gè)循環(huán)形成_個(gè)雙鏈dna，在20個(gè)循環(huán)后(大約1h),1個(gè)dna片段可擴(kuò)增上百萬(wàn)個(gè)拷貝，30個(gè)循環(huán)可產(chǎn)生10億個(gè)拷貝。答案：1.分開(kāi)95變性氫鍵解鏈引物迅速降至4060退火單鏈的dna模板延伸724種dntp321530

3、32四、實(shí)驗(yàn)操作1設(shè)備、用品(略)2材料：凝膠、dna標(biāo)樣、pcr試劑盒、tbe緩沖液、0.1%亞甲藍(lán)3.步驟：文字說(shuō)明：取3個(gè)0.5 ml微量離心管，分別記做1、2、3號(hào)。用取樣器按表一加入試劑，關(guān)閉上蓋并在振蕩器上振蕩20 s，使之混合均勻?qū)?個(gè)微量離心管放在固定器上，保證每管中的液面在水浴中的水面以下。依表二的時(shí)間依次放入3個(gè)水浴進(jìn)行pcr將tbe緩沖液加入到電泳槽中，使緩沖液高出凝膠面34 mm，再將樣品加入凝膠板的加樣孔中。所加順序內(nèi)容依次為：凝膠板中的加樣情況說(shuō)明表加樣孔編號(hào)（對(duì)應(yīng)右圖所示）1234離心管中樣品標(biāo)號(hào)sa1a2a3所加樣品1號(hào)樣品20微升dna標(biāo)準(zhǔn)溶液pcr產(chǎn)物1（7

4、2 1min后得到的）pcr產(chǎn)物2（72 1min、70 2min后得到的）對(duì)照組產(chǎn)物2號(hào)樣品2微升藍(lán)色緩沖液1號(hào)樣品與2號(hào)樣品必須充分混勻后再加入開(kāi)始進(jìn)行電泳，若用18 v電池的電泳46 h；若甲直流電泳儀電源，80 v可電泳40 min電泳后將凝膠緩沖液倒出，緩沖液可再利用。將10 ml染色劑（亞甲藍(lán)）覆蓋在凝膠表面，1520 min后移去（可再利用），再加入5 ml70%乙醇，不斷搖動(dòng)12 min，使其分布均勻，再除去，加入冷水，幾分鐘后看到藍(lán)色的區(qū)帶出現(xiàn)，這就是擴(kuò)增的dna比較、判斷膠片結(jié)果圖表輔助：表一：試劑1號(hào)管(12個(gè)循環(huán))2號(hào)管(14個(gè)循環(huán))3號(hào)管(對(duì)照)pcr混合液2020蒸餾水20引物202020模板dna101010總體積505050表二：時(shí)間溫度目的