動物細胞工程ppt課件分享

1、動物細胞工程ppt(課件分享)作者：作者：dr.fengdr.feng動物細胞工程ppt(課件分享)2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)2動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合動物細胞融合單克隆抗體制備單克隆抗體制備細胞核移植細胞核移植動物細動物細胞工程胞工程技術技術動物細胞工程的基動物細胞工程的基礎礎2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)32020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)4動物細胞培養(yǎng)2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)5（一）、概念（一）、概念 是指從動物機體內取出相關的組織，將它分散成單個細胞，是指從動物機體內取出相關的組織，將它分

2、散成單個細胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。（二）、原理（二）、原理細胞分裂增殖細胞分裂增殖2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)6（三）、過程（三）、過程幼齡動物幼齡動物剪碎組織剪碎組織原代細胞培養(yǎng)原代細胞培養(yǎng)取動物器官取動物器官和組織和組織細胞懸浮液細胞懸浮液傳代細胞培養(yǎng)傳代細胞培養(yǎng)胰蛋白酶處理胰蛋白酶處理單個細胞單個細胞胰蛋白酶處理胰蛋白酶處理單個細胞單個細胞2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)7細胞貼壁細胞貼壁:培養(yǎng)貼附性細胞時,細胞要能貼附于底物上才能生長繁殖.2020-12-24動物細胞工程pp

3、t(課件分享)8細胞接觸抑制細胞接觸抑制 細胞在貼壁生長過細胞在貼壁生長過程中，隨著細胞分裂，程中，隨著細胞分裂，數量不斷增加，最后形數量不斷增加，最后形成一個單層，此時細胞成一個單層，此時細胞間相互接觸，細胞分裂間相互接觸，細胞分裂和生長停止，數量不再和生長停止，數量不再增加。增加。2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)9有關概念有關概念 原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。一般培養(yǎng)的從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。一般培養(yǎng)的第第1 1代細胞與傳代細胞與傳1010代以內的細胞稱為原代細胞培養(yǎng)。代以內的細胞稱為原代細胞培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶

4、中取出，配制成細胞懸浮液，分裝傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)10歸納歸納過程過程取取 的組織、器官的組織、器官細胞懸浮液細胞懸浮液 酶酶 貼滿瓶壁的細胞貼滿瓶壁的細胞單個細胞單個細胞加入加入 液液動物胚胎或幼齡動物動物胚胎或幼齡動物胰蛋白胰蛋白培養(yǎng)培養(yǎng)接觸抑制接觸抑制原代原代 培培養(yǎng)養(yǎng)( (分裝前分裝前) )1-10代細胞代細胞2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)11遺傳物質遺傳物質 改變改變原代細胞原代

5、細胞培養(yǎng)培養(yǎng)加加 液液4050代細胞代細胞(細胞株細胞株)未未遺傳物質遺傳物質 改變改變無限傳代（細胞系）無限傳代（細胞系）已已傳代傳代培養(yǎng)培養(yǎng)胰蛋白胰蛋白 酶酶 2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)12有關概念有關概念細胞株：細胞株：原代細胞一般傳至原代細胞一般傳至1010代左右細胞生長停滯，大部分細胞代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數細胞存活到衰老死亡，少數細胞存活到40504050代，這種傳代細胞為細胞株。代，這種傳代細胞為細胞株。 細胞系：細胞系：細胞株傳代至細胞株傳代至5050代后又出現細胞生長停滯狀態(tài)，只有部代后又出現細胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物

6、質的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這分細胞由于遺傳物質的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。種傳代細胞為細胞系。 細胞株和細胞系的區(qū)別：細胞株和細胞系的區(qū)別： 細胞系的遺傳物質改變，具有癌細胞的細胞系的遺傳物質改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)13思考題：思考題：1 1、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？2 2、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？、為什么培養(yǎng)前要將組織細

7、胞分散成單個細胞？因為這些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。因為這些組織或器官，分裂能力旺盛，易于培養(yǎng)。成塊組織使細胞靠在一起限制了細胞的生長和增殖，且細胞不能與培養(yǎng)成塊組織使細胞靠在一起限制了細胞的生長和增殖，且細胞不能與培養(yǎng)液充分接觸，不利于培養(yǎng)。液充分接觸，不利于培養(yǎng)。2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)143、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什么成份？、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什么成份？催化蛋白質水解。細胞間的物質主要是蛋白質催化蛋白質水解。細胞間的物質主要是蛋白質( (膠原蛋白等膠原蛋白等) )。4、細胞膜的主要成份是什么？、細

8、胞膜的主要成份是什么？蛋白質和磷脂蛋白質和磷脂5、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？能能2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)156 6、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？意什么問題呢？7 7、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？注意時間的控制注意時間的控制 不能，因為兩者的最適不能，因為兩者的最適phph不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適白酶的最適phph較接近較接近2020-

9、12-24動物細胞工程ppt(課件分享)161 1、無菌、無毒的環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境 保證細胞順保證細胞順利的生長增利的生長增殖殖 添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、動物血添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素、動物血清等。清等。（四）、動物細胞培養(yǎng)的條件（四）、動物細胞培養(yǎng)的條件2 2、營養(yǎng)、營養(yǎng)2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)173 3、溫度和、溫度和phph 培養(yǎng)室中控制培養(yǎng)室中控制, ,使之達到使之達到36.5 36.5 0.5, 7.27.4 0.5, 7

10、.27.4培養(yǎng)箱中提供培養(yǎng)箱中提供o o2 2和和coco2 2（95%95%空氣和空氣和5% co5% co2 2 ）4 4、氣體環(huán)境：、氣體環(huán)境：2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)18植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較比較項目比較項目植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理原理細胞的細胞的 細胞細胞培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分 、植物激素、植物激素葡萄糖、葡萄糖、 培養(yǎng)結果培養(yǎng)結果植物體植物體培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植快速繁殖、培育無病毒植株株獲得獲得全能性全能性增殖增殖蔗糖蔗糖動物血清動物血清細胞株、細胞系細胞株、細胞

11、系細胞細胞, ,某些蛋白質某些蛋白質2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)19（五）、動物細胞培養(yǎng)技術的應用（五）、動物細胞培養(yǎng)技術的應用（3）細胞的生理、藥理、病理研究）細胞的生理、藥理、病理研究 （1） 培養(yǎng)健康細胞用于燒傷病人皮膚移植培養(yǎng)健康細胞用于燒傷病人皮膚移植（2） 基因工程的受體細胞基因工程的受體細胞2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)20前景展望前景展望資料一：資料一：2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)21 培養(yǎng)的動物細胞可以用于檢測有毒物質。許多致畸、致癌物培養(yǎng)的動物細胞可以用于檢測有毒物質。許多致畸、致癌物質加入培養(yǎng)液后，培養(yǎng)細胞會

12、發(fā)生染色體結構和數目的變異。根質加入培養(yǎng)液后，培養(yǎng)細胞會發(fā)生染色體結構和數目的變異。根據變異細胞占全部培養(yǎng)細胞的百分數，可以判斷某種物質的毒性。據變異細胞占全部培養(yǎng)細胞的百分數，可以判斷某種物質的毒性?，F在動物細胞培養(yǎng)已經成為檢測有毒物質的快速而靈敏的有效手現在動物細胞培養(yǎng)已經成為檢測有毒物質的快速而靈敏的有效手段。段。 資料二：資料二：2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)22人工關節(jié)人工關節(jié)軟骨再生軟骨再生1.1.第一次手第一次手術術: : 從從病人病人關節(jié)軟骨關節(jié)軟骨中未中未 受力的部分，取出一片受力的部分，取出一片約為約為葡萄葡萄干干大小的大小的健康健康軟軟骨骨組織組織。2

13、.2.分分離軟離軟骨骨細胞并經細胞并經三星期的三星期的體體外外 培培養(yǎng)養(yǎng)，使，使細胞數細胞數增加增加約約10102020倍。倍。3.3.第二次手第二次手術術: : 清理清理軟軟骨受骨受損損的部分，的部分，從從下方骨下方骨頭頭部位取出一片部位取出一片約與傷約與傷口口大大小相同小相同的骨膜，的骨膜，縫縫在在傷傷口上方，再口上方，再將軟將軟骨骨細胞細胞注注射到骨膜下方。射到骨膜下方。資料三：資料三：結果結果: : 經過復健經過復健一年一年后后即可即可恢復恢復正常的生活。正常的生活。2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)23動物體細胞核移植技術和克隆動物2020-12-24動物細胞工程pp

14、t(課件分享)24（一）、動物細胞核移植的概念：（一）、動物細胞核移植的概念： 動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核, ,移入一個已經去掉移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中細胞核的卵母細胞中. .使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎, ,這個新的這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體胚胎最終發(fā)育為動物個體. .克隆動物：用核移植的方法得到的動物?？寺游铮河煤艘浦驳姆椒ǖ玫降膭游铩?020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)25動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核,移入一個已經去掉細胞核的移入一個已經去掉

15、細胞核的卵母細胞中卵母細胞中.使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎,這個新的胚胎最終發(fā)育為這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體動物個體2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)26（二）、分類：（二）、分類：胚胎細胞核移植胚胎細胞核移植：體細胞核移植體細胞核移植：細胞分化程度低，恢復細胞分化程度低，恢復全能性容易全能性容易 細胞分化程度高，恢復細胞分化程度高，恢復全能性困難全能性困難克隆動物克隆動物:用核移植方法得到的動物用核移植方法得到的動物.克?。寺。╟lone）是指通過無性生殖而產生的遺傳上均一的生物群，即具有）是指通過無性生殖而產生的遺傳上均一的生物群，即具有完

16、全相同的遺傳組成的一群細胞或者生物的個體?？寺≡谙ＥD語中是完全相同的遺傳組成的一群細胞或者生物的個體。克隆在希臘語中是“小樹小樹枝葉枝葉”的意思，用以指無性增殖物。的意思，用以指無性增殖物。 2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)272020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)282020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)29去核卵去核卵細胞細胞供體供體細胞細胞電刺激使電刺激使兩細胞融兩細胞融合合重組細胞重組細胞重組胚胎重組胚胎新個體新個體代孕母牛代孕母牛c胚胎移植胚胎移植卵細卵細胞培胞培養(yǎng)養(yǎng)無性生殖無性生殖（三）、體細胞的核移植過程（三）、體細胞的核移植過程高產奶牛

17、高產奶牛a供體供體細胞細胞培養(yǎng)培養(yǎng)供卵奶牛供卵奶牛b2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)30（四）、體細胞核移植技術的應用前景（四）、體細胞核移植技術的應用前景 1、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進程、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進程2、保護瀕危物種、保護瀕危物種3、生產醫(yī)用蛋白質、生產醫(yī)用蛋白質及組織器官的移植的供體及組織器官的移植的供體2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)31（五）、體細胞核移植技術存在的問題（五）、體細胞核移植技術存在的問題 1、克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚。、克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚。2、克隆技術效率低，畸形率高、死

18、亡率高、易出、克隆技術效率低，畸形率高、死亡率高、易出 現早衰等問題。現早衰等問題。3、生產克隆動物費用昂貴。、生產克隆動物費用昂貴。2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)32 2 2、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改變的細胞是、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改變的細胞是 （ ） a a獲得不死性的細胞獲得不死性的細胞 b b1010代以內細胞代以內細胞 c c原代細胞原代細胞 d d傳代細胞傳代細胞1 1、動物細胞工程技術的基礎是、動物細胞工程技術的基礎是 （ ） a.a.動物細胞融合動物細胞融合 b.b.單克隆抗體單克隆抗體 c.c.胚胎移植胚胎移植 d.d.動物細胞培養(yǎng)動

19、物細胞培養(yǎng)a ad d課堂反饋練習課堂反饋練習2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)333 3、在動物細胞培養(yǎng)的有關敘述中正確的是：（、在動物細胞培養(yǎng)的有關敘述中正確的是：（ ）a a、動物細胞培養(yǎng)的目的只是為了獲得大量的細胞、動物細胞培養(yǎng)的目的只是為了獲得大量的細胞 分泌蛋白分泌蛋白b b、動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細胞分散、動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶使細胞分散c c、細胞的癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡、細胞的癌變發(fā)生在原代培養(yǎng)向傳代培養(yǎng)的過渡 過程中過程中d d、培養(yǎng)至、培養(yǎng)至5050代后傳代細胞遺傳物質沒有發(fā)生改變代后傳代細胞遺傳物質沒有發(fā)生改變b b2020-12-

20、24動物細胞工程ppt(課件分享)344 4、一般說來，動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件（、一般說來，動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足以下條件（ ）無毒的環(huán)境無毒的環(huán)境 無菌的環(huán)境無菌的環(huán)境 培養(yǎng)基需要加入血清培養(yǎng)基需要加入血清 溫度與動溫度與動物體溫相似物體溫相似 需要需要o o2 2，不需要，不需要coco2 2 coco2 2能調節(jié)培養(yǎng)液能調節(jié)培養(yǎng)液phpha a、 b b、 c c、 d d、 d d2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)355 5、動物細胞培養(yǎng)的特點、動物細胞培養(yǎng)的特點 （ ）細胞貼壁細胞貼壁 有絲分裂有絲分裂 細胞分化細胞分化 接觸抑制接觸抑制 減數分裂減數分裂

21、 原原代培養(yǎng)一般傳代培養(yǎng)一般傳1 11010代代a a、 b b、c c、 d d、a a2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)366 6、下圖是動物細胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據此回答：、下圖是動物細胞培養(yǎng)的基本過程示意圖。請據此回答：（1 1）容器）容器a a中放置的是動物器官或組織。它一般取自中放置的是動物器官或組織。它一般取自_。（2 2）容器）容器a a中的動物器官或組織首先要進行的處理中的動物器官或組織首先要進行的處理是是 ，然后用，然后用 酶處理，這是為了使細胞分散酶處理，這是為了使細胞分散開來，這樣做的目的是開來，這樣做的目的是 。動物胚胎或幼齡動物動物胚胎或幼齡動

22、物剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白使細胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)使細胞與培養(yǎng)液充分接觸，便于培養(yǎng)2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)37（3 3）培養(yǎng)首先在）培養(yǎng)首先在b b瓶中進行，瓶中的培養(yǎng)基成分有瓶中進行，瓶中的培養(yǎng)基成分有 _等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，有許多細胞等。在此瓶中培養(yǎng)一段時間后，有許多細胞衰老死亡，這是培養(yǎng)到第衰老死亡，這是培養(yǎng)到第 代，到這時的培養(yǎng)稱為代，到這時的培養(yǎng)稱為_ _ 。（4 4）為了把）為了把b b瓶中的細胞分裝到瓶中的細胞分裝到c c瓶中，用瓶中，用 處理，然后配置成處理，然后配置成 ，再分裝。，再分裝。 動物血清動物血清10原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)胰蛋白酶胰蛋

23、白酶細胞懸浮液細胞懸浮液2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)382020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)392020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)40動物細胞融動物細胞融合合2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)41細胞細胞a細胞細胞b雜種細胞雜種細胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學法化學法2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)42用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程細胞核細胞核病毒顆粒病毒顆粒細胞核細胞核2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)43細胞融合與融合誘導細胞融合物質細胞融合與融合

24、誘導細胞融合物質誘導劑：病毒、聚乙二醇誘導劑：病毒、聚乙二醇誘導細胞融合的病毒必須滅活。誘導細胞融合的病毒必須滅活。思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？2020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)442020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)452020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)462020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)472020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)482020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)492020-12-24動物細胞工程ppt(課件分享)50二、單克隆抗體二、單克隆抗體什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機體受抗原