免疫組化染色機種類介紹

1、自動化免疫組化染色機種類介紹免疫組化的傳統(tǒng)技術(shù)正在受到新的快速高敏的新技術(shù)的挑戰(zhàn)，一方面是新試劑的推出，如sp、epos、envision和csa，另一方面是自動免疫組化染色機的問世。免疫組化技術(shù)正進入一個新的發(fā)展階段。從先進國家免疫組化規(guī)范化或標(biāo)準(zhǔn)化的進程來看，自動免疫組化染色機的應(yīng)用幾乎貫穿始終，早在20世紀(jì)末已得到極大的普及，然而國內(nèi)的自動免疫組化染色機應(yīng)用則在近幾年才得以發(fā)展。浙江省腫瘤醫(yī)院作為省內(nèi)較早應(yīng)用的少數(shù)單位之一，在自動化免疫組化染色的使用和質(zhì)量控制方面獲得些許經(jīng)驗，在此做簡單的介紹交流。自動化免疫組化染色技術(shù)是由電腦控制整個染色程序的免疫組化染色機，具有自動加抗體、自動沖洗、

2、顯色、復(fù)染及預(yù)處理等功能，有全自動和半自動、封閉型和半開放型之分。根據(jù)不同儀器大小，每次染色20240張切片不等，整個染色程序約需6090min左右，它不僅可以應(yīng)用于免疫組化染色，某些儀器還可應(yīng)用于組織化學(xué)染色、特殊染色及原位分子雜交染色。目前較為理想的儀器為roche公司、lecia公司及thermo公司的產(chǎn)品等。下面對不同機型的自動免疫組化染色機的特點分述如下。thermo公司的labvision autostainer該機型屬開放式半自動系統(tǒng)類型，用戶可任意編輯所需試劑及模板，內(nèi)建試劑兼容性檢測。切片特殊染色模板可任意調(diào)整試劑量、孵育時間。體系開放保證可適就性強，即可同時運行不同檢測試劑

3、盒和不同的染色程序及不同廠商生的的一抗。使用單一探頭，探頭材料為特氟倫包被不銹鋼，檢測探頭交叉污染殘留物 <10-6 ，且分樣精度>99%(總體積)。聯(lián)合使用配套的抗原修復(fù)儀，可實現(xiàn)脫蠟與抗原修復(fù)一步完成。dako公司的 autostainer系labvision autostainer貼牌產(chǎn)品，配合使用dako的flex檢測系統(tǒng)可獲得極為敏感的免疫組化結(jié)果。早期的biogenex i6000tm全自動染色儀亦屬該類型產(chǎn)品，不同的是其加樣頭采用標(biāo)準(zhǔn)的tip頭加樣，完全避免交叉污染的風(fēng)險。lecia公司的bond-max 該機型屬半開放式全自動系統(tǒng)類型，僅針對一抗完全開放，用戶可以根

4、據(jù)個人的偏好使用任何品牌的一抗。獨有的檢測系統(tǒng)內(nèi)包含專利的compact polymer技術(shù)（緊湊型聚合物）相比傳統(tǒng)方法而言，信號放大作用、穿透力能力更強。該檢測系統(tǒng)類似于增強型的polymer技術(shù)，可以使陽性顯色密度更高，背景更清晰。獨特的covertile專利技術(shù)在玻片表面增加一個塑料罩，為免疫反應(yīng)提供一個封閉的孵育環(huán)境，防止試劑揮發(fā)，既確保樣品的安全也進一步節(jié)省抗體的實用。covertile會輕輕將液滴鋪散到玻片的規(guī)定區(qū)域，確保試劑均勻分布到組織的表面，既可防止組織的損傷，又使抗體的作用更均勻，染色結(jié)果更可靠。尤其是獨特的溫控技術(shù)可實現(xiàn)每張切片獨立溫控，提供最佳的反應(yīng)動力學(xué)環(huán)境。免疫組化

5、的所有步驟從烤片、脫蠟、抗原修復(fù)、阻斷、標(biāo)記一炕、標(biāo)記二抗、顯色直到復(fù)染都可以由bond-max自動完成，真正實現(xiàn)全自動操作。由于lecia公司收購了novocastra試劑公司，該平臺可能最優(yōu)化組合兩者的優(yōu)點，有利于最大限度降低假陽性或假陰性以提高診斷質(zhì)量。 roche公司的benchmark ultra 該機型亦屬半開放式全自動系統(tǒng)類型，該免疫組化和原位雜交染色儀由ventana medical systems公司（美國亞利桑那州，tucson）生產(chǎn)并提交。該成熟的臨床檢測用儀器及相關(guān)試劑，已獲美國fda或歐洲ce相關(guān)認(rèn)證，并于2009年獲醫(yī)療設(shè)計杰出獎。該平臺需配備原廠的相關(guān)試劑，儀器和

6、試劑同屬一套系統(tǒng)，更加保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性和溯源性。較有特色的是具有專利液體封蓋膜技術(shù)（lcs），可有效防止試劑揮發(fā)，防止干片，提供穩(wěn)定反應(yīng)環(huán)境，保證染色均一。并且專利空氣渦流混勻技術(shù)，可保證組織全層覆蓋，試劑充分混勻，避免“邊緣效應(yīng)”及“階梯效應(yīng)”。 類似的專利thermopad溫控技術(shù)也可實現(xiàn)每張切片獨立溫控，提供最佳的反應(yīng)動力學(xué)環(huán)境。尤為可貴的是可支持多種實驗方案 （ihc, ish, sish, if），是目前可實現(xiàn)較為齊全的多樣化及個性化方案的檢測平臺。 綜上，從大多數(shù)儀器的特點來看，自動免疫組化染色機規(guī)范了免疫組化染色的操作步驟和方法，方法穩(wěn)定，結(jié)果重復(fù)性較佳；部分機型由于使用了增敏

7、試劑，提高了敏感性；由于采用獨特的抗體覆蓋系統(tǒng)，抗原抗體反應(yīng)較為均勻，反應(yīng)時間相應(yīng)縮短；緩沖液的均一穩(wěn)定洗滌，降低了非特異性背景染色；自動控制各種抗體和試劑加樣，減少了人工操作?，F(xiàn)代化的病理科實驗室對效率、成本、效益、質(zhì)量和結(jié)果重復(fù)性等方面的要求愈來愈高，解決方案就是免疫組化試劑的標(biāo)準(zhǔn)化和染色的自動化。 需要指出的是，國內(nèi)往往僅局限于使用自動化免疫組化染色儀器，而非從整體上構(gòu)架建立一套完整的自動化免疫組化染色網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)。因此，建立在自動化免疫組化染色基礎(chǔ)上的質(zhì)量控制尚顯稚嫩，從病理診斷醫(yī)師發(fā)出指令直至完成制片并形成反饋，實現(xiàn)信息流的網(wǎng)絡(luò)化管理將是未來的方向。再者，冰冷機器背后人的因素永遠(yuǎn)是最根本

8、的要素。儀器的正確使用，離不開使用者的維修與保養(yǎng)。比如儀器放置環(huán)境的溫度，不間斷電源的配備。使用前檢查緩沖液、蒸餾水、一抗和檢測系統(tǒng)是否足量。嚴(yán)格按照程序要求清洗機器的加樣系統(tǒng)及液流系統(tǒng)等等，對確保免疫組化結(jié)果的穩(wěn)定性極為重要。做好ihc并非易事，自動化也好手工操作也好，其基本的要素是一致的。ihc所用抗體是最核心的試劑?？贵w的質(zhì)量直接影響免疫組織化學(xué)的結(jié)果評估，甚至影響診斷。因此，在選擇抗體時，應(yīng)嚴(yán)格認(rèn)真選擇所用抗體，應(yīng)選擇有良好資質(zhì)的經(jīng)銷商和廠家的產(chǎn)品；應(yīng)該有規(guī)范的抗體貯存方法和防污染措施。新近購入的抗體和不同批號的抗體必須有探索最佳染色條件的預(yù)實驗。對于每一種抗體均應(yīng)有陰性和陽性對照。同時，應(yīng)根據(jù)其特點確定抗原修復(fù)的方法，既保證能充分暴露所要檢測的抗原，又要避免過度修復(fù)而導(dǎo)致假陽性結(jié)果。在染色方法的選擇上，也應(yīng)該考到內(nèi)源性物質(zhì)(生物素、過氧化物酶、堿性磷酸酶等)的干擾。只有在各個環(huán)節(jié)、細(xì)節(jié)都認(rèn)真研究，然后以常規(guī)的形式相對固定下來，才能確保ihc的結(jié)果可靠。也就是說，ihc的從業(yè)人員和實驗室應(yīng)逐漸建立認(rèn)證制度。目前的臨床病理診斷已離不開免疫組織化學(xué)技術(shù)，而沒有免疫組織化學(xué)技術(shù)亦很難說有現(xiàn)代的臨床診斷病理學(xué)。另外，隨著法制觀念的普及和增強，患者的法律意識