劉秀梵我國新城疫的防控實(shí)踐和基因VII型新城疫疫苗的研發(fā)116-2

1、我國新城疫的防控實(shí)踐和我國新城疫的防控實(shí)踐和基因基因VIIVII型新城疫疫苗的研發(fā)型新城疫疫苗的研發(fā) 劉秀梵劉秀梵 揚(yáng)州大學(xué)揚(yáng)州大學(xué) 獸醫(yī)學(xué)院獸醫(yī)學(xué)院新城疫是新城疫是國家中長期動物疫國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（病防治規(guī)劃（2012-20202012-2020）優(yōu)先防治的優(yōu)先防治的5 5種一類動物疫病種一類動物疫病之一，在我國也是使用疫苗頻之一，在我國也是使用疫苗頻率最高的動物疫病。率最高的動物疫病。 一、一、NDND流行病學(xué)研究和我國流行病學(xué)研究和我國 的防控實(shí)踐的防控實(shí)踐19261926年年 最早發(fā)現(xiàn)于印尼爪哇和英國新城最早發(fā)現(xiàn)于印尼爪哇和英國新城19281928年年 我國最早有疑似病例報告

2、我國最早有疑似病例報告19461946年年 梁英和馬聞天首次分離鑒定梁英和馬聞天首次分離鑒定NDVNDV強(qiáng)毒（強(qiáng)毒（F48F48）19501950年代年代 引進(jìn)引進(jìn)NDVNDV疫苗毒：疫苗毒：MakteswarMakteswar, B1, F, B1, F和和 LaSotaLaSota株（株（I I、 IIII、 IIIIII、IVIV系）系）后來后來 又引進(jìn)其他又引進(jìn)其他NDVNDV疫苗毒，如疫苗毒，如V4 V4 株等。株等。 新城疫（新城疫（ ND ND）次數(shù)次數(shù)持續(xù)時間持續(xù)時間流行毒株的基因型流行毒株的基因型第一次第一次19201920年代年代- -19601960年前年前基因基因III

3、I、IIIIII、IVIV型（早期基因型）型（早期基因型）第二次第二次19601960年代年代- -19701970年代初年代初基因基因V V和和VIVI（晚期基因型）（晚期基因型）第三次第三次19701970年代后期年代后期- -19801980年代前期年代前期基因基因VIbVIb亞型（晚期基因型）亞型（晚期基因型）第四次第四次19801980年代后期年代后期至今至今基因基因VIIVII型（晚期基因型）型（晚期基因型）新城疫的四次大流行新城疫的四次大流行分子流行病學(xué)研究分子流行病學(xué)研究 近近2020年來新城疫在我國家禽年來新城疫在我國家禽中流行的特點(diǎn)主要表現(xiàn)為免疫雞中流行的特點(diǎn)主要表現(xiàn)為免疫

4、雞群中常發(fā)生群中常發(fā)生非典型新城疫非典型新城疫和對家和對家養(yǎng)水禽的毒力增強(qiáng)養(yǎng)水禽的毒力增強(qiáng)在鵝引起在鵝引起嚴(yán)重臨床疾病。嚴(yán)重臨床疾病。這兩個流行特點(diǎn)這兩個流行特點(diǎn)都與新出現(xiàn)的基因都與新出現(xiàn)的基因VIIVII型病毒有型病毒有關(guān)。關(guān)。19971997年前后在中國出現(xiàn)鵝大批發(fā)病的新傳染病年前后在中國出現(xiàn)鵝大批發(fā)病的新傳染病- -鵝副粘病毒病。鵝副粘病毒病。 * *確定鵝副粘病毒病是由基因確定鵝副粘病毒病是由基因VIIVII型病毒引起的，是鵝的型病毒引起的，是鵝的NDND； * *確定近年來我國鵝群和雞群流行的確定近年來我國鵝群和雞群流行的NDVNDV強(qiáng)毒強(qiáng)毒95%95%以上是基因以上是基因 VIId

5、VIId亞型；亞型； * *確定從鵝分離到的和從雞分離到的基因確定從鵝分離到的和從雞分離到的基因VIIdVIId亞型病毒沒有亞型病毒沒有 宿主特異性和致病差異，可以交叉感染發(fā)病，互相傳播；宿主特異性和致病差異，可以交叉感染發(fā)病，互相傳播； * *常規(guī)常規(guī)NDND疫苗對鵝的疫苗對鵝的NDND保護(hù)性差保護(hù)性差，而用分離的野毒（基因，而用分離的野毒（基因 VIIdVIId亞型）制成的自家疫苗效果較好，但存在散毒風(fēng)險。亞型）制成的自家疫苗效果較好，但存在散毒風(fēng)險。 Liu X F et al. Arch Virol, 2003; Wan H et al. Avian Pathol, 2004; Hua

6、ng Y et al. Arch Virol, 2004; Wang Y et al. Virol J ,2012免疫雞群中的非典型免疫雞群中的非典型NDND，自，自1980-19901980-1990年代以來就普遍發(fā)生，年代以來就普遍發(fā)生，而分離到的而分離到的NDVNDV也都是基因也都是基因VIIdVIId亞型。亞型。問題問題1 1：新城疫病毒只有一個血：新城疫病毒只有一個血 清型常規(guī)的疫苗還能不清型常規(guī)的疫苗還能不 能對流行強(qiáng)毒提供有效能對流行強(qiáng)毒提供有效 保護(hù)？保護(hù)？ 疫苗免疫保護(hù)的疫苗免疫保護(hù)的3 3個水平：個水平：1.1.保護(hù)不發(fā)生死亡，但有部分有臨床癥狀，保護(hù)不發(fā)生死亡，但有部分有

7、臨床癥狀， 帶毒排毒嚴(yán)重；帶毒排毒嚴(yán)重；2.2.保護(hù)不發(fā)生死亡，也不出現(xiàn)任何臨床癥保護(hù)不發(fā)生死亡，也不出現(xiàn)任何臨床癥 狀，一定比例的短時間有帶毒、排毒；狀，一定比例的短時間有帶毒、排毒；3.3.保護(hù)不發(fā)生死亡，也不出現(xiàn)任何臨床癥保護(hù)不發(fā)生死亡，也不出現(xiàn)任何臨床癥 狀（包括產(chǎn)蛋下降），很少排毒。狀（包括產(chǎn)蛋下降），很少排毒。這是一個有爭議的問題，經(jīng)過全世界科學(xué)界和這是一個有爭議的問題，經(jīng)過全世界科學(xué)界和產(chǎn)業(yè)界近產(chǎn)業(yè)界近3030年的努力，現(xiàn)在已基本搞清楚了。年的努力，現(xiàn)在已基本搞清楚了。Cross-protection efficacy in chickens immunized with the

8、 LaSota vaccine after challenge with virulent strains of different genotypes(From Qin et al. J clin Microbiol , 2008) 實(shí)驗(yàn)室研究和現(xiàn)場觀察表明，一般情況實(shí)驗(yàn)室研究和現(xiàn)場觀察表明，一般情況下，常規(guī)疫苗免疫后中等水平抗體（下，常規(guī)疫苗免疫后中等水平抗體（HI 6-8 HI 6-8 log2log2）只能達(dá)到第一種保護(hù)水平，高抗體水）只能達(dá)到第一種保護(hù)水平，高抗體水平（平（HI 9 log2HI 9 log2以上）可達(dá)到第二種保護(hù)水以上）可達(dá)到第二種保護(hù)水平，但達(dá)不到第三種保護(hù)水平。

9、平，但達(dá)不到第三種保護(hù)水平。在第一種保護(hù)水平情況下，在第一種保護(hù)水平情況下，就發(fā)生所謂的非典型新城疫。就發(fā)生所謂的非典型新城疫。 為了保護(hù)不發(fā)生死亡也不出現(xiàn)包括為了保護(hù)不發(fā)生死亡也不出現(xiàn)包括產(chǎn)蛋下降在內(nèi)的臨床癥狀，自產(chǎn)蛋下降在內(nèi)的臨床癥狀，自19801980年代年代以來，我國的規(guī)?；碾u場就采用的對以來，我國的規(guī)?；碾u場就采用的對NDND的的高頻率密集型免疫程序高頻率密集型免疫程序。 種雞和蛋雞一生接種種雞和蛋雞一生接種NDND疫苗疫苗在在1010次次甚至甚至2020次以上，但即使這樣，免疫雞群次以上，但即使這樣，免疫雞群仍頻繁發(fā)生非典型仍頻繁發(fā)生非典型NDND。因此，常規(guī)疫苗。因此，常規(guī)疫

10、苗對流行的基因?qū)α餍械幕騐IIVII型已不能提供有效保型已不能提供有效保護(hù)。護(hù)。問題問題2 2：為什么常規(guī)疫苗不能提供：為什么常規(guī)疫苗不能提供 對基因?qū)騐IIVII型型NDVNDV強(qiáng)毒的有強(qiáng)毒的有 效保護(hù)？效保護(hù)？1 1、基因型差異基因型差異：常規(guī)疫苗為基因：常規(guī)疫苗為基因I I、IIII、IIIIII型，屬早期基因型，而當(dāng)前優(yōu)型，屬早期基因型，而當(dāng)前優(yōu)勢流行株為基因勢流行株為基因VIIVII型，屬晚期基因型，型，屬晚期基因型，遺傳差異大；遺傳差異大；2 2、抗原差異性、抗原差異性：交叉血凝抑制和病毒：交叉血凝抑制和病毒中和試驗(yàn)證明，疫苗毒和基因中和試驗(yàn)證明，疫苗毒和基因VIIVII型流

11、型流行毒之間抗原性有顯著差異（行毒之間抗原性有顯著差異（R R0.20.2）；）； 基因型基因型IIIVIVIIcVIIdReference數(shù)數(shù)量量13164Liu H et al. J Virol Methods，2007277Liu H et al. Res Vet Sci, 200813Rui ZP et al. Vet Microbiol, 20093W etal. Virus Gene, 20102457Wu X et al. Arch Virol, 201148Zhu J et al. 2013總計(jì)總計(jì)571262275(其中其中VII型毒株型毒株263)2006年來我國年來我國N

12、DV強(qiáng)毒分離株的基因型分布強(qiáng)毒分離株的基因型分布 進(jìn)一步分析顯示，進(jìn)一步分析顯示，2006年至年至2013年間共報道分離新城疫強(qiáng)毒年間共報道分離新城疫強(qiáng)毒216株，其中株，其中VII型毒株型毒株206株，占到了分離株的株，占到了分離株的96%左右，表明基因左右，表明基因VII型毒株的分離率正呈上型毒株的分離率正呈上升趨勢升趨勢。NDV流行株與常規(guī)疫苗株的遺傳關(guān)系流行株與常規(guī)疫苗株的遺傳關(guān)系 基因基因VIIdVIId亞型亞型NDVNDV分離株與分離株與IIII型型疫苗株的遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)。疫苗株的遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)?；蚧騀HN同源性同源性84.1%84.4%78.7%83.0% a Not teste

13、d b R value = 頭頭 當(dāng)當(dāng)R值值120h0.3108.810log2E5120h0.16109.1711log2E10120h0.22109.311log2E15120h0.17108.810log2重組病毒重組病毒A-VIIA-VII生物學(xué)特性的鑒定生物學(xué)特性的鑒定 根據(jù)根據(jù)ICPIICPI和和MDT MDT 指標(biāo)，指標(biāo)，A-VIIA-VII株的毒力比株的毒力比La La SotaSota低，用作疫苗毒株低，用作疫苗毒株安安全全性好。性好。以以雞胚繁殖病毒，尿囊液中雞胚繁殖病毒，尿囊液中A-VIIA-VII株的株的HAHA10log210log2。免疫后不同時間抗體免疫后不同時間

14、抗體HI效價上升曲線效價上升曲線均以自身免疫毒株作為均以自身免疫毒株作為4單位病毒單位病毒 效檢試驗(yàn)結(jié)果顯示，致弱株效檢試驗(yàn)結(jié)果顯示，致弱株A-VII免疫原性強(qiáng)，其滅活苗以較低劑量免疫原性強(qiáng)，其滅活苗以較低劑量（20ul）免疫）免疫SPF雞時即可產(chǎn)生高滴度的雞時即可產(chǎn)生高滴度的HI抗體，且其誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生的速抗體，且其誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生的速度較度較LaSota快?？?。0 02 24 46 68 810107 7天天1414天天2121天天HI效價效價(log2)A-VII-kA-VII-kLaSota-kLaSota-kImmune efficacy of NDV/A-VII in chickensF

15、requency of isolation of challenge virus in commercial chickensa C: challenged with 105 ELD50 JS2/06.bO: Oropharyngeal swabs.cC: Cloacal swabs.dNS: no survivors.(A) Mean virus titers of oropharyngeal swabs of immunized groups on all sampling days. (B) Comparison of oropharyngeal virus titers at 2 da

16、y post-challenge. (A) Mean virus titers of cloacal swabs of immunized groups on all sampling days. (B) Comparison of cloacal virus titers at 4 day post-challenge. * * A-VII A-VII株的株的MDTMDT120h120h，ICPIICPI0.30.3，毒力比，毒力比LaSotaLaSota低；低；* * A-VII A-VII株在雞胚上毒價高達(dá)株在雞胚上毒價高達(dá)10109.39.3EIDEID5050/0.1mL/0.1mL

17、，HA10log2HA10log2；* * A-VII A-VII株與流行株完全匹配，免疫原性很強(qiáng)，產(chǎn)生的株與流行株完全匹配，免疫原性很強(qiáng)，產(chǎn)生的HI HI 抗體比抗體比LaSotaLaSota高高2-3 log22-3 log2，抗體上升提前，抗體上升提前1 1星期，減少星期，減少 排毒滴度比排毒滴度比LaSotaLaSota低低10-10010-100倍；倍；* * A-VII A-VII株的論文株的論文20092009年在國際年在國際疫苗（疫苗（VaccineVaccine） 雜雜 志發(fā)表。志發(fā)表。OIEOIE出版的出版的 陸生動物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊陸生動物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊 連續(xù)連續(xù)5

18、 5年引用。年引用。A-VIIA-VII株種毒的優(yōu)良特性株種毒的優(yōu)良特性 中間試制、臨床試驗(yàn)中間試制、臨床試驗(yàn) 和新制品的注冊申報階段和新制品的注冊申報階段*2009年年2011年完成重組新城疫病毒（年完成重組新城疫病毒（A-VII株）滅株）滅 活疫苗中間試制、質(zhì)量研究，申請臨床試驗(yàn)；活疫苗中間試制、質(zhì)量研究，申請臨床試驗(yàn)；* 2010年年9月月8日日基因基因VII型新城疫病毒致弱株型新城疫病毒致弱株A-新新城城 疫病毒疫病毒-VII及其構(gòu)建方法及其構(gòu)建方法獲國家發(fā)明專利授權(quán)；獲國家發(fā)明專利授權(quán)；*2011年年2012年獲得農(nóng)業(yè)部臨床試驗(yàn)批件，進(jìn)入臨床年獲得農(nóng)業(yè)部臨床試驗(yàn)批件，進(jìn)入臨床 試驗(yàn)執(zhí)

19、行期；試驗(yàn)執(zhí)行期；*2013年年2014年完成新獸藥注冊初審；年完成新獸藥注冊初審；2014年完成新年完成新 獸藥注冊質(zhì)量復(fù)核、復(fù)審；獸藥注冊質(zhì)量復(fù)核、復(fù)審；*2014年年11月月17日獲得國家一類新獸藥注冊證書。日獲得國家一類新獸藥注冊證書。 該疫苗具有與當(dāng)前新城疫病毒優(yōu)勢流行株匹配性該疫苗具有與當(dāng)前新城疫病毒優(yōu)勢流行株匹配性 好的優(yōu)點(diǎn)，不僅可用于雞，還可用于鵝和其他禽好的優(yōu)點(diǎn)，不僅可用于雞，還可用于鵝和其他禽 類，是第一個有效防控鵝新城疫的疫苗；類，是第一個有效防控鵝新城疫的疫苗； 與常規(guī)疫苗相比，不僅提供死亡保護(hù)，而且提供與常規(guī)疫苗相比，不僅提供死亡保護(hù)，而且提供 有效的臨床保護(hù)和防止傳播；有效的臨床保護(hù)和防止傳播； 與常規(guī)疫苗相比，免疫原性強(qiáng)，產(chǎn)生的抗體滴度與常規(guī)疫苗相比，免疫原性強(qiáng)，產(chǎn)生的抗體滴度 高，產(chǎn)生時間快，能有效降低強(qiáng)毒攻擊后的病毒高，產(chǎn)生時間快，能有效降低強(qiáng)毒攻擊后的病毒 載量和排毒率；載量和排毒率； 與常規(guī)疫苗相比，能有效控制免疫雞群中的非典與常規(guī)疫苗相比，能有效控制免疫雞群中的非典 型新城疫。型新城疫。2 2、