生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)1-糖類的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)n一、糖類的性質(zhì)實(shí)驗(yàn) n二、可溶性蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 n三、粗脂肪的提取和定量測(cè)定 n四、維生素C含量測(cè)定 n五、氨基酸的分離與鑒定濾紙層析法n六、蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn) 課程任務(wù)n對(duì)理論知識(shí)的鞏固和應(yīng)用，培養(yǎng)理論聯(lián)系實(shí)際的意識(shí)，培養(yǎng)用基礎(chǔ)知識(shí)分析問題、解決問題的能力n復(fù)習(xí)鞏固實(shí)驗(yàn)基本技能，學(xué)習(xí)新的實(shí)驗(yàn)方法和操作技能，學(xué)習(xí)儀器設(shè)備的使用n培養(yǎng)進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)應(yīng)具備的基本素質(zhì)：誠(chéng)實(shí)、科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)、探索創(chuàng)新精神、能吃苦耐勞等。紀(jì) 律n每批次人員、分組固定，上課準(zhǔn)時(shí)點(diǎn)名，遲到5min以上者拒絕進(jìn)入教室n實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得高聲閑談嬉笑，必須保持安靜的實(shí)驗(yàn)環(huán)境。n愛護(hù)儀器，不浪費(fèi)藥品，節(jié)約水電，遵守實(shí)驗(yàn)室的安全

2、措施。n濾紙、火柴棒、碎玻璃等固體廢棄物切勿丟入水池內(nèi)，有毒有害試劑應(yīng)統(tǒng)一回收入廢液桶。n儀器或?qū)嶒?yàn)器材如有損壞，應(yīng)自行登記，并立即向指導(dǎo)老師報(bào)告。n 保持實(shí)驗(yàn)室的整齊清潔，個(gè)人所帶與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的東西，不得亂放在實(shí)驗(yàn)桌上。n實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一切物品，未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)老師批準(zhǔn)嚴(yán)禁帶出室外，借物必須辦理登記手續(xù)。n 每次實(shí)驗(yàn)后各小組清洗干凈實(shí)驗(yàn)器材、打掃本組實(shí)驗(yàn)臺(tái)桌、提每次實(shí)驗(yàn)后各小組清洗干凈實(shí)驗(yàn)器材、打掃本組實(shí)驗(yàn)臺(tái)桌、提交實(shí)驗(yàn)記錄，老師驗(yàn)收合格后方可離開實(shí)驗(yàn)室；每次留下一個(gè)大交實(shí)驗(yàn)記錄，老師驗(yàn)收合格后方可離開實(shí)驗(yàn)室；每次留下一個(gè)大組負(fù)責(zé)當(dāng)天實(shí)驗(yàn)室的地面衛(wèi)生和公用儀器設(shè)備整理復(fù)位，以及一組負(fù)責(zé)當(dāng)天實(shí)驗(yàn)室的地面

3、衛(wèi)生和公用儀器設(shè)備整理復(fù)位，以及一些其它服務(wù)性工作。最后離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)檢查水、電、門窗等些其它服務(wù)性工作。最后離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)，應(yīng)檢查水、電、門窗等是否關(guān)好。是否關(guān)好。n實(shí)驗(yàn)課上禁止播放音樂、禁止玩游戲。實(shí)驗(yàn)室禁止飲食和吸煙。實(shí)驗(yàn)要求n每次實(shí)驗(yàn)前必須詳細(xì)預(yù)習(xí)預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)教材，明了實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理方法及操作步驟，并在記錄本上擬出簡(jiǎn)單的操作步驟、儀器使用方法及實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)。n在實(shí)驗(yàn)過程中，要聽從老師的指導(dǎo)，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行，不能任意更改，不熟悉的儀器設(shè)備，切勿隨意亂動(dòng)不熟悉的儀器設(shè)備，切勿隨意亂動(dòng)，應(yīng)先請(qǐng)老師指導(dǎo)后使用n實(shí)驗(yàn)時(shí)如有問題發(fā)生，應(yīng)首先用自己學(xué)過的知識(shí)，獨(dú)立思考加以解決，努力培養(yǎng)獨(dú)立分析

4、問題和解決問題的能力，如自己不能解決可與指導(dǎo)老師共同討論研究，提出解決問題的辦法。 n實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)，必須隨時(shí)把觀察到的現(xiàn)象和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，如實(shí)地記錄在記錄本上，不得記在散頁(yè)紙上，要養(yǎng)成良好的做原始記錄的習(xí)慣養(yǎng)成良好的做原始記錄的習(xí)慣。n環(huán)境和儀器的清潔整齊是搞好實(shí)驗(yàn)的重要條件，實(shí)驗(yàn)臺(tái)面試劑藥品架上必須保持整潔，儀器藥品要井然有序，所用的試劑，用完應(yīng)立即蓋嚴(yán)放回原處。用完應(yīng)立即蓋嚴(yán)放回原處。注意瓶塞切勿張冠李戴。勿使試劑藥品灑在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和地上。實(shí)驗(yàn)完畢后，實(shí)驗(yàn)完畢后，需將藥品試劑排列整齊，儀器設(shè)備要恢復(fù)原狀。將實(shí)驗(yàn)臺(tái)面打掃干凈，經(jīng)教需將藥品試劑排列整齊，儀器設(shè)備要恢復(fù)原狀。將實(shí)驗(yàn)臺(tái)面打掃干凈，經(jīng)教師驗(yàn)

5、收儀器后，方可離開實(shí)驗(yàn)室。師驗(yàn)收儀器后，方可離開實(shí)驗(yàn)室。n對(duì)實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容和安排不合理的地方可提出改進(jìn)意見對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的一切反常現(xiàn)象應(yīng)進(jìn)行討論，并大膽提出自己的看法，做到生動(dòng)活潑，主動(dòng)地學(xué)習(xí)。實(shí)驗(yàn)記錄n實(shí)驗(yàn)課前應(yīng)認(rèn)真預(yù)習(xí)，將實(shí)驗(yàn)名稱、目的和要求、原理、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容、操作方法和步驟簡(jiǎn)單扼要地寫在記錄本上 n實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象，結(jié)果和數(shù)據(jù)應(yīng)及時(shí)如實(shí)地記在記錄本上。絕對(duì)不可以用單片紙做記錄或草稿。原始記錄必須準(zhǔn)確、簡(jiǎn)練詳盡、清楚。從實(shí)驗(yàn)開始就應(yīng)養(yǎng)成這種良好的習(xí)慣。n記錄時(shí)應(yīng)做到正確記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，切勿夾雜主觀因素，并根據(jù)儀器的精確度準(zhǔn)確記錄有效數(shù)字。重復(fù)觀測(cè)時(shí)即使數(shù)據(jù)完全相同也應(yīng)如實(shí)記錄下來 n實(shí)驗(yàn)中使用儀器

6、的類型，編號(hào)以及試劑的規(guī)格、化學(xué)式、分子量準(zhǔn)確的濃度等，都應(yīng)記錄清楚，以便總結(jié)實(shí)驗(yàn)時(shí)，進(jìn)行核對(duì)和作為查找失敗原因的參考依據(jù) 實(shí)驗(yàn)報(bào)告的格式 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)整理和總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，寫出實(shí)驗(yàn)報(bào)告，報(bào)告的形式可參照下列方式： n實(shí)驗(yàn)時(shí)間 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn) n一、目的和要求： n二、原理：n三、實(shí)驗(yàn)材料及預(yù)處理n四、試劑及配制n五、實(shí)驗(yàn)儀器：n 六、操作步驟：n七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(數(shù)據(jù)記錄及處理)： n八、討論：報(bào)告書寫總體說明n在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中，目的和要求、原理以及操作步驟部分應(yīng)簡(jiǎn)單扼要的敘述。但是，對(duì)于實(shí)驗(yàn)條件(試劑配制及儀器)和操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)必須寫清楚。n實(shí)驗(yàn)結(jié)果部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果部分：應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的要求將

7、一定實(shí)驗(yàn)條件下獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、歸納，分析和對(duì)比，并盡量總結(jié)成各種圖表，如原始數(shù)據(jù)及其處理的表格，標(biāo)準(zhǔn)曲線圖以及比較實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照實(shí)驗(yàn)結(jié)果的圖表等。另外，還針對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行必要的說明和分析。n討論部分：討論部分：可以包括關(guān)于實(shí)驗(yàn)方法(或操作技術(shù))的一些問題、實(shí)驗(yàn)的正常結(jié)果和異常現(xiàn)象以及思考題進(jìn)行探討，對(duì)于實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的認(rèn)識(shí)、體會(huì)和建議，對(duì)實(shí)驗(yàn)課的改進(jìn)意見等?？己朔绞絥實(shí)驗(yàn)操作占35%，實(shí)驗(yàn)報(bào)告占60%，考勤占5%n操作分主要根據(jù)預(yù)習(xí)記錄和實(shí)驗(yàn)過程記錄，結(jié)合課堂表現(xiàn)評(píng)分實(shí)驗(yàn)一 糖的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 糖類的性質(zhì)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)?zāi)康模簄了解某些糖類顏色反應(yīng)的原理n學(xué)習(xí)用糖的顏色反應(yīng)鑒別糖類的

8、方法n通過實(shí)驗(yàn)手段了解糖的基本性質(zhì)及還原糖的鑒定方法n為后續(xù)課程中有關(guān)糖類的知識(shí)的學(xué)習(xí)打下基礎(chǔ)；為后續(xù)設(shè)計(jì)行、研究性實(shí)驗(yàn)提供定性檢測(cè)的方法與手段Molish反應(yīng)10Molish（紫環(huán)）反應(yīng)原理n糖在濃無機(jī)酸作用下脫水生成糠醛及糠醛衍生物，后者與-萘酚生成紫紅色物質(zhì)。n該反應(yīng)不是糖類的特異性反應(yīng)（丙酮、甲酸、乳酸、草酸和葡萄糖醛酸 ）n對(duì)葡萄糖的檢出極限可達(dá)0.001，對(duì)蔗糖的檢出極限可達(dá)0.0001。Molish反應(yīng)Molish反應(yīng)操作注意事項(xiàng)n添加Molish試劑時(shí)切記充分搖勻n加濃硫酸時(shí)用移液管沿管壁緩慢加入，切勿搖動(dòng)n注意觀察各管紫色環(huán)出現(xiàn)時(shí)間的先后、環(huán)的寬度、顏色的深淺，并做好記錄。操

9、作方法操作方法n在試管中加入1 mL 樣品水溶液，滴入4滴10%的-萘酚乙醇溶液，混合均勻后將試管傾斜約45度，沿管壁慢慢加入1 mL濃硫酸(勿搖動(dòng))。此時(shí)樣品在上層，硫酸在下層、若在兩層交界處出現(xiàn)紫色的環(huán)，表明樣品中含有糖類化合物。-萘酚反應(yīng)(Molisch Test)Seliwanoff反應(yīng)Seliwanoff（謝里瓦諾夫）反應(yīng)（間苯二酚反應(yīng)） n酮糖脫水生成羥甲基糠醛，后者與間苯二酚作用生成紅色物質(zhì)n醛糖在同樣條件下反應(yīng)緩慢，只有在糖濃度較高或煮沸時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)才呈微弱的陽(yáng)性反應(yīng)Seliwanoff反應(yīng)Seliwanoff反應(yīng)操作要點(diǎn)n注意試劑添加量：糖溶液0.5ml，塞氏試劑5mln混勻，

10、同時(shí)同時(shí)放入沸水浴n注意觀察各管顏色變化的時(shí)間及顏色的變化過程，并做好記錄 塞氏試劑：塞氏試劑： 溶解50mg間苯二酚（resorcinol）于100mL鹽酸（鹽酸：水=1:2v/v）中 操作方法操作方法n在試管中加入1滴2% (5滴5%)的樣品溶液，再加人10滴(1 mL)間苯二酚鹽酸試劑，在沸水浴中加熱，記錄溶液轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色所需要的時(shí)間。若溶液在12分鐘內(nèi)變?yōu)榧t色，說明樣品為酮糖。否則為醛糖。還原糖的鑒定還原糖的鑒定原理n糖類分子中的還原性基團(tuán)在堿性條件下將Cu2+還原成Cu+，生成Cu2O沉淀。n沉淀顏色與沉淀顆粒大小有關(guān)，沉淀顆粒大小與反應(yīng)速度有關(guān)：速度慢顆粒大顏色偏紅，速度快顆粒小顏色

11、偏黃。n反應(yīng)速度取決于糖的濃度和還原性的強(qiáng)弱還原糖的鑒定還原糖鑒定實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)n實(shí)驗(yàn)前鑒定試劑有效性：試劑與水1：4，加熱煮沸無沉淀方可使用。n先加鑒定試劑后加糖n從沸水浴（2-3min）中同時(shí)取出后取出后觀察試管中的變化n注意Benedict試劑與Fehling試劑在反應(yīng)時(shí)間和沉淀生成量等方面的區(qū)別。 操作方法操作方法取取FehlingFehling試劑試劑A,BA,B兩種溶液各兩種溶液各1.0mL1.0mL在試管中混勻，在試管中混勻，再加入再加入4 4滴滴1%1%的樣品溶液，在沸水浴中加熱的樣品溶液，在沸水浴中加熱2 23 3分分鐘，若有鐘，若有紅色或黃綠色沉淀紅色或黃綠色沉淀生成，表明樣品為還原生成，表明樣品為還原性糖。性糖。Fehling試劑試劑A,B：試劑A：稱取3.5g五水合硫酸銅溶于100mL蒸餾水中。試劑B：稱取17g五結(jié)晶水酒石酸鉀鈉溶于20mL熱水中，然后加入20mL含5g NaOH 水溶液，稀釋到100mL Benedic試劑：試劑：400m