蛋白質(zhì)還原糖脂肪鑒定實(shí)驗(yàn)PPT課件

1、1、實(shí)驗(yàn)原理：、實(shí)驗(yàn)原理：（1）斐林試劑斐林試劑鑒定還原糖時(shí)，溶液的顏色變化為：鑒定還原糖時(shí)，溶液的顏色變化為：由由藍(lán)色藍(lán)色變成變成磚紅色磚紅色(沉淀沉淀)。斐林試斐林試劑只能檢驗(yàn)生物組織中還原糖存在與否，而劑只能檢驗(yàn)生物組織中還原糖存在與否，而不能不能鑒定非還原性糖。鑒定非還原性糖。葡萄糖、麥葡萄糖、麥芽糖、果糖芽糖、果糖是還原糖是還原糖。 （2）蘇丹蘇丹染液染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為遇脂肪的顏色反應(yīng)為橘黃色橘黃色，蘇丹蘇丹染液染液遇脂肪的顏色反應(yīng)為遇脂肪的顏色反應(yīng)為紅色紅色。（3）蛋白質(zhì)可與蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑雙縮脲試劑產(chǎn)生產(chǎn)生紫色紫色反應(yīng)反應(yīng)（肽鍵）（肽鍵）。第1頁/共23頁（一）生物組織中

2、可溶性還原糖的鑒定（一）生物組織中可溶性還原糖的鑒定1.1.實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 當(dāng)質(zhì)量濃度為當(dāng)質(zhì)量濃度為g/mLg/mL的氫氧化鈉溶液與的氫氧化鈉溶液與質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為g/mLg/mL的硫酸銅溶液混合后，立的硫酸銅溶液混合后，立即生成淡藍(lán)色的即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)Cu(OH)2 2懸濁液。懸濁液。 Cu(OH)Cu(OH)2 2與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖與葡萄糖、果糖、麥芽糖等可溶性還原糖共熱，能夠生成磚紅色的共熱，能夠生成磚紅色的CuCu2 2O O沉淀。因此，沉淀。因此，利用該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶性還原利用該反應(yīng)，可證明樣液中含可溶性還原糖。糖。RRCHOCHO+2Cu

3、(OH)+2Cu(OH)2 2RRCOOHCOOH+ +CuCu2 2O O+2H+2H2 2O O第2頁/共23頁試劑配制試劑配制 甲液（甲液（g/mLg/mL的氫氧化鈉溶液）的氫氧化鈉溶液）斐林試劑斐林試劑 乙液（乙液（g/mL的硫酸銅溶液）的硫酸銅溶液）甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，甲液乙液等量混合，現(xiàn)用現(xiàn)配，切不可分開滴加，或者久置后切不可分開滴加，或者久置后才用。才用。第3頁/共23頁（二）生物組織中蛋白質(zhì)的鑒定（二）生物組織中蛋白質(zhì)的鑒定1 1 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 在堿性溶液（在堿性溶液（NaOHNaOH）中，雙縮脲）中，雙縮脲（H H2 2NOC-NH-CONHNOC-NH-CONH

4、2 2）能與）能與Cu Cu 2+2+作用，作用，形成紫色的絡(luò)合物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙形成紫色的絡(luò)合物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)?？s脲反應(yīng)。 由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此，蛋白質(zhì)都可脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此，蛋白質(zhì)都可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。第4頁/共23頁試劑配制試劑配制 A A液（液（g/mLg/mL的氫氧化鈉溶液）的氫氧化鈉溶液）雙縮脲試劑雙縮脲試劑 B B液（液（g/mLg/mL的硫酸銅溶液）的硫酸銅溶液）第5頁/共23頁2、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模骸?shí)驗(yàn)?zāi)康模?嘗試用化學(xué)試劑檢測(cè)生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)嘗試用化學(xué)試劑檢測(cè)

5、生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì) 3、實(shí)驗(yàn)選材、實(shí)驗(yàn)選材（1、材料應(yīng)富含相關(guān)物質(zhì)，使現(xiàn)象更加、材料應(yīng)富含相關(guān)物質(zhì)，使現(xiàn)象更加明顯；明顯；2、材料本身應(yīng)無色，以免對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾）、材料本身應(yīng)無色，以免對(duì)結(jié)果產(chǎn)生干擾）（1）做可溶性還原性糖鑒定實(shí)驗(yàn)，應(yīng)選）做可溶性還原性糖鑒定實(shí)驗(yàn)，應(yīng)選含糖高含糖高，顏色，顏色為為白色的白色的植物組織，如植物組織，如蘋果、梨，蘋果、梨，也可用白蘿卜替代也可用白蘿卜替代。（因?yàn)椤＃ㄒ驗(yàn)榻M織的顏色較淺，易于觀察。）組織的顏色較淺，易于觀察。）（2）做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)。應(yīng)選）做脂肪的鑒定實(shí)驗(yàn)。應(yīng)選富富含脂肪的種子，以含脂肪的種子，以花花生種子生種子為最好，實(shí)驗(yàn)前一般要浸泡為最好

6、，實(shí)驗(yàn)前一般要浸泡34小時(shí)。小時(shí)。（3）做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，可用富含蛋白質(zhì)的黃豆）做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，可用富含蛋白質(zhì)的黃豆(可用可用豆?jié){替代）豆?jié){替代）或雞蛋清?；螂u蛋清。第6頁/共23頁4、實(shí)驗(yàn)試劑實(shí)驗(yàn)試劑斐林試劑（包括斐林試劑（包括甲液甲液：質(zhì)量濃度為：質(zhì)量濃度為mL NaOH溶液和溶液和乙液乙液：質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為mL CuSO4溶液）、溶液）、蘇丹蘇丹或蘇丹或蘇丹染液、染液、雙縮脲試劑（包括雙縮脲試劑（包括A液液：質(zhì)量濃度為：質(zhì)量濃度為mL NaOH溶液溶液 B液液：質(zhì)量濃度為質(zhì)量濃度為mL CuSO4溶液）、溶液）、體積分?jǐn)?shù)為體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精溶液，碘液、蒸餾水。的酒精溶液，碘

7、液、蒸餾水。第7頁/共23頁5、方法步驟：方法步驟： （）（）可溶性可溶性還原糖還原糖糖的鑒定糖的鑒定 （水浴加（水浴加熱）熱）操操 作作 方方 法法 注注 意意 問問 題題 解解 釋釋 1. 制備組織樣液。制備組織樣液。（去皮去皮、切塊、研磨、過濾）、切塊、研磨、過濾） 蘋果或梨組織液必須臨時(shí)蘋果或梨組織液必須臨時(shí)制備制備 因蘋果多酚氧化酶含量高，因蘋果多酚氧化酶含量高，組組織液很易被氧化成褐色，將產(chǎn)織液很易被氧化成褐色，將產(chǎn)生的顏色掩蓋。生的顏色掩蓋。 2. 取取1支試管，向試管內(nèi)注支試管，向試管內(nèi)注入入2mL組織樣液。組織樣液。 3. 向試管內(nèi)注入向試管內(nèi)注入1mL新制新制的斐林試劑，振

8、蕩。的斐林試劑，振蕩。 應(yīng)將組成斐林試劑的應(yīng)將組成斐林試劑的甲液、甲液、乙液分別配制，使用前才乙液分別配制，使用前才將甲、乙液等量混勻成斐將甲、乙液等量混勻成斐林試劑；林試劑；切勿將甲液、乙液分別加切勿將甲液、乙液分別加入蘋果組織樣液中進(jìn)行檢入蘋果組織樣液中進(jìn)行檢測(cè)。測(cè)。 斐林試劑很不穩(wěn)定，斐林試劑很不穩(wěn)定，甲乙液分甲乙液分別加入時(shí)可能與組織樣液發(fā)生別加入時(shí)可能與組織樣液發(fā)生反應(yīng)無反應(yīng)無Cu ( OH ) 2生成。生成。甲乙液甲乙液 等量混合，現(xiàn)配先用，等量混合，現(xiàn)配先用，切不可分開滴加，或者久置后切不可分開滴加，或者久置后才用。才用。4. 試管放在盛有試管放在盛有50-65溫溫水的大燒杯中，

9、加熱約水的大燒杯中，加熱約2分分鐘，觀察到溶液顏色：淺藍(lán)鐘，觀察到溶液顏色：淺藍(lán)色色 棕色棕色 磚紅色（沉磚紅色（沉淀）淀） 最好用試管夾夾住試管上最好用試管夾夾住試管上部，使試管底部不觸及燒部，使試管底部不觸及燒杯底部，試管口不朝向?qū)嵄撞?，試管口不朝向?qū)嶒?yàn)者。驗(yàn)者。防止試管內(nèi)的溶液沖出試管，防止試管內(nèi)的溶液沖出試管，造成燙傷；造成燙傷；甲、乙液混合保存甲、乙液混合保存時(shí)生成時(shí)生成Cu ( OH ) 2在在7090下分解成黑色下分解成黑色CuO和水；和水； 第8頁/共23頁. .實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟（1 1）制備組織樣液（教師制備）制備組織樣液（教師制備）（2 2）鑒定樣液）鑒定樣液先在試管中加

10、入2mL組織樣液第9頁/共23頁再加入2mL剛配制的斐林試劑水浴煮沸2分鐘注意觀察整注意觀察整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，溶液顏中，溶液顏色的變色的變化！化！第10頁/共23頁第11頁/共23頁操操 作作 方方 法法注注 意意 問問 題題解解 釋釋花生種子浸泡、去皮、切下一些花生種子浸泡、去皮、切下一些子葉薄片，將薄片放在載玻片子葉薄片，將薄片放在載玻片的水滴中，用吸水紙吸去裝片的水滴中，用吸水紙吸去裝片中的水。中的水。干種子要浸泡干種子要浸泡3434小小時(shí)，新花生的浸時(shí)，新花生的浸泡時(shí)間可縮短。泡時(shí)間可縮短。因?yàn)橐驗(yàn)榻輹r(shí)間短，不易切片浸泡時(shí)間短，不易切片，浸泡時(shí)間過長，組織較軟，浸泡時(shí)間過長，

11、組織較軟，切下的薄片不易成形切下的薄片不易成形。切。切片要盡可能薄些，便于觀片要盡可能薄些，便于觀察。察。在子葉薄片上滴在子葉薄片上滴2323滴蘇丹滴蘇丹或蘇或蘇丹丹染液，染色染液，染色1 1分鐘。分鐘。染色時(shí)間不宜過長。染色時(shí)間不宜過長。 蘇丹蘇丹中含有酒精，染色時(shí)中含有酒精，染色時(shí)間久了，把脂肪全部溶解間久了，把脂肪全部溶解了，觀察不到脂肪粒了，觀察不到脂肪粒用吸水紙吸去薄片周圍染液，用用吸水紙吸去薄片周圍染液，用50%50%酒精洗去浮色，再用吸水酒精洗去浮色，再用吸水紙吸去酒精。紙吸去酒精。 酒精用于洗去浮色，酒精用于洗去浮色，不洗去不洗去浮色，會(huì)影響對(duì)橘黃色脂浮色，會(huì)影響對(duì)橘黃色脂肪滴

12、的觀察肪滴的觀察。同時(shí)，。同時(shí)，酒精酒精是脂溶性溶劑，是脂溶性溶劑，可將花生可將花生細(xì)胞中的脂肪顆粒溶解成細(xì)胞中的脂肪顆粒溶解成油滴。油滴。用吸水紙吸去薄片周圍酒精，滴用吸水紙吸去薄片周圍酒精，滴上上1212滴蒸餾水，蓋上蓋玻片。滴蒸餾水，蓋上蓋玻片。 滴上清水可防止蓋蓋玻片時(shí)滴上清水可防止蓋蓋玻片時(shí)產(chǎn)生氣泡。產(chǎn)生氣泡。低倍鏡低倍鏡下找到花生子葉薄片的最下找到花生子葉薄片的最薄處，可看到細(xì)胞中有染成橘薄處，可看到細(xì)胞中有染成橘黃色或紅色圓形小顆粒。黃色或紅色圓形小顆粒。裝片不宜久放裝片不宜久放。時(shí)間一長，油滴會(huì)溶解在乙時(shí)間一長，油滴會(huì)溶解在乙醇中醇中。（）脂肪的鑒定）脂肪的鑒定 （需要顯微鏡）

13、（需要顯微鏡） 第12頁/共23頁實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟（1 1）切片制作）切片制作去掉花生種皮去掉花生種皮用左手的三個(gè)手指夾住花生的一片用左手的三個(gè)手指夾住花生的一片子葉，使花生子葉高于手指之上（子葉，使花生子葉高于手指之上（為為什么？什么？）。右手持刀片，將子葉削去）。右手持刀片，將子葉削去一層，形成平面。一層，形成平面。刀口向內(nèi)，與花生斷面平行，以均勻的動(dòng)作，自左前方向右后方快速拉刀，滑行切片（注意注意要整個(gè)臂部用力，而不要腕部用力。要整個(gè)臂部用力，而不要腕部用力。）如此連續(xù)動(dòng)作，切下一些薄片。第13頁/共23頁（2 2）染色）染色 用毛筆將最用毛筆將最 薄的幾片材料移至潔凈的載玻片的薄的幾片

14、材料移至潔凈的載玻片的中央中央滴蘇丹滴蘇丹溶液溶液2-32-3滴于花生子葉薄片上滴于花生子葉薄片上2-2-1min1min后，吸去染液后，吸去染液滴滴50%50%的酒精洗去浮色的酒精洗去浮色吸去吸去多余酒精多余酒精再滴再滴1-21-2滴蒸餾水滴蒸餾水蓋上蓋玻片，制成蓋上蓋玻片，制成臨時(shí)裝片。臨時(shí)裝片。（3 3）鏡檢鑒定）鏡檢鑒定 在低倍鏡下觀察，找到花生子葉切片的在低倍鏡下觀察，找到花生子葉切片的最薄處（最薄處（），移至視野），移至視野的中心的中心換用高倍鏡觀察，調(diào)焦至最清晰。換用高倍鏡觀察，調(diào)焦至最清晰?？砂l(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)橘黃色橘黃色的圓形小顆粒，這就是的圓形小顆粒，這就是脂肪滴（油滴

15、）。脂肪滴（油滴）。若發(fā)現(xiàn)觀察物外圍也有許若發(fā)現(xiàn)觀察物外圍也有許多橘黃色小顆粒，則是脂肪跑了出來多橘黃色小顆粒，則是脂肪跑了出來。第14頁/共23頁第15頁/共23頁若用物理方法如何鑒定脂肪的存在若用物理方法如何鑒定脂肪的存在? ?烘烤種子后烘烤種子后, ,把子葉放在白紙上用手指把子葉放在白紙上用手指擠壓擠壓, ,白紙上會(huì)出現(xiàn)透明的油跡白紙上會(huì)出現(xiàn)透明的油跡, ,說明子說明子葉含有脂肪。葉含有脂肪。 第16頁/共23頁（）蛋白質(zhì)的鑒定蛋白質(zhì)的鑒定 操操 作作 方方 法法注注 意意 問問 題題解解 釋釋制備組織樣液。制備組織樣液。（浸泡、去皮研磨、過（浸泡、去皮研磨、過濾。）濾。） 黃豆浸泡黃豆

16、浸泡1 1至至2 2天，容易研磨成天，容易研磨成漿漿，也可購新鮮豆?jié){以節(jié)約，也可購新鮮豆?jié){以節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。實(shí)驗(yàn)時(shí)間。鑒定。加樣液約鑒定。加樣液約2ml2ml于試管于試管中，加入雙縮脲試劑中，加入雙縮脲試劑A A，搖勻；再加入雙縮脲試搖勻；再加入雙縮脲試劑劑B B液液3434滴，搖勻，溶滴，搖勻，溶液變紫色。液變紫色。A A液和液和B B液也要分開配液也要分開配制，儲(chǔ)存。鑒定時(shí)先制，儲(chǔ)存。鑒定時(shí)先加加A A液后加液后加B B液。液。 CuSO4CuSO4溶液不能多加。溶液不能多加。先加先加NaOHNaOH溶液溶液，為，為Cu2+Cu2+與蛋與蛋白質(zhì)反應(yīng)白質(zhì)反應(yīng)提供一個(gè)堿性的環(huán)提供一個(gè)堿性的環(huán)境境

17、。A A、B B液混裝或同時(shí)加入，液混裝或同時(shí)加入，會(huì)導(dǎo)致會(huì)導(dǎo)致Cu2+Cu2+變成變成Cu ( OH ) Cu ( OH ) 2 2沉淀，而失效。沉淀，而失效。否則否則CuSO4CuSO4的藍(lán)色會(huì)遮蓋反應(yīng)的藍(lán)色會(huì)遮蓋反應(yīng)的真實(shí)顏色。的真實(shí)顏色?？捎玫扒宕娑?jié){?？捎玫扒宕娑?jié){。蛋清要先稀釋。蛋清要先稀釋。如果如果稀釋不夠，在實(shí)驗(yàn)中蛋清稀釋不夠，在實(shí)驗(yàn)中蛋清粘在試管壁粘在試管壁，與雙縮脲試劑與雙縮脲試劑反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，反應(yīng)后會(huì)粘固在試管內(nèi)壁上，使反應(yīng)不容易徹底，并且試使反應(yīng)不容易徹底，并且試管也不易洗干凈管也不易洗干凈。附：淀粉的檢測(cè)和觀察附：淀粉的檢測(cè)和觀察用試管取用試管取2ml

18、2ml待測(cè)組織樣待測(cè)組織樣液，向試管內(nèi)滴加液，向試管內(nèi)滴加2 2滴碘滴碘液，觀察顏色變化。液，觀察顏色變化。碘液不要滴太多碘液不要滴太多以免影響顏色觀察以免影響顏色觀察第17頁/共23頁實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)步驟：（1 1）制備生物組織樣液（教師制備）制備生物組織樣液（教師制備）（2 2）鑒定）鑒定先加2mL組織樣液再加2mL雙縮脲試劑A液加3-4滴雙縮脲試劑B液第18頁/共23頁第19頁/共23頁6、討論討論: (1)選取富含還原糖的生物材料時(shí)選取富含還原糖的生物材料時(shí),能用甘蔗或者橘子嗎能用甘蔗或者橘子嗎?為什么為什么? 答答:不行不行.橘子本身富含色素橘子本身富含色素,會(huì)掩蓋顏色反應(yīng)的結(jié)果會(huì)掩蓋顏色反應(yīng)的結(jié)果;而甘蔗不含還原而甘蔗不含還原糖糖,蔗糖不是還原糖蔗糖不是還原糖. (2)斐林試劑和雙縮脲試劑有哪些區(qū)別？斐林試劑和雙縮脲試劑有哪些區(qū)別？ a溶液濃度不同溶液濃度不同:斐林試劑中斐林試劑中CuSO4溶液溶液為為mL, 雙縮脲試劑中雙縮脲試劑中CuSO4溶液溶液為為1g/ mL b使用原理不同使用原理不同:斐林試劑實(shí)質(zhì)是新制斐林試劑實(shí)質(zhì)是新制Cu(OH)2沉淀沉淀, 雙縮脲試劑實(shí)質(zhì)是堿性條件下的雙縮脲試劑實(shí)質(zhì)是堿性條件下的Cu2+ c使用方法不同使用方法不同: 斐林試劑使用時(shí)斐林試劑使用時(shí),先把先把NaOH溶液