VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)ppt課件

1、LOGOVEGF 血管內(nèi)皮生長因子血管內(nèi)皮生長因子目錄目錄u01 血管的構成血管的構成 u02 VEGF及其受體及其受體u03 VEGF誘發(fā)的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導誘發(fā)的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導u04 VEGF信號通路的作用信號通路的作用u05 作用于作用于VEGF信號通路的血管生成抑制劑信號通路的血管生成抑制劑u06 VEGF對皮膚癌發(fā)生與開展的調(diào)控對皮膚癌發(fā)生與開展的調(diào)控01 血管的構成血管的構成u 血管生成：胚胎早期成血管細胞分化構成原始血管。血管生成：胚胎早期成血管細胞分化構成原始血管。u 血管新生：即從曾經(jīng)存在的血管中構建出來新的血管，正血管新生：即從曾經(jīng)存在的血管中構建出來新的血管，正常情況下血管新

2、生僅發(fā)生在胚胎發(fā)育期，創(chuàng)傷愈合期和女常情況下血管新生僅發(fā)生在胚胎發(fā)育期，創(chuàng)傷愈合期和女性的生理周期，病理條件下也會出現(xiàn)異常的血管新生。性的生理周期，病理條件下也會出現(xiàn)異常的血管新生。u 復雜血管系統(tǒng)的構成還需求其他信號通路，如：肝配蛋白復雜血管系統(tǒng)的構成還需求其他信號通路，如：肝配蛋白、TGF-TGF-轉(zhuǎn)化生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、PDGFPDGF血小板原生長因子血小板原生長因子等信號通路等信號通路02 VEGF及其受體及其受體u VEGF: VEGFA、 VEGFB 、VEGFC、 VEGFD、PIGF胎盤生長因子、胎盤生長因子、 orf viral VEGF同系物同系物u VEGFR：VEG

3、FR1、VEGFR2、VEGFR3u 其中其中VEGFR2是血管新生和有絲分裂過程主要的是血管新生和有絲分裂過程主要的VEGF信信號轉(zhuǎn)導受體。號轉(zhuǎn)導受體。03 VEGF誘發(fā)的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導誘發(fā)的細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導絲裂原活化的蛋白激酶絲裂原活化的蛋白激酶MAPKMAPK途徑途徑u VEGF結合到結合到VEGFR2上，引起上，引起SHC磷酸化，活化的磷酸化，活化的SHC與與接頭蛋白接頭蛋白GRB2結合，結合，GRB2經(jīng)過經(jīng)過SH2構造域結合鳥苷構造域結合鳥苷酸交換蛋白酸交換蛋白SOS，使之接近，使之接近Ras，然后進一步激活，然后進一步激活PAPK級聯(lián)反響：級聯(lián)反響：Raf1MEK1/2 ERK1/2

4、。u VEGF可誘導可誘導P38-MARK活化，活化，P38-MAPK繼而活化繼而活化MAPKAPK-2/3，并使絲狀肌動蛋白，并使絲狀肌動蛋白F-Actin聚合調(diào)理聚合調(diào)理分子和熱休克蛋白分子和熱休克蛋白27HSP27發(fā)生磷酸化，引起肌動蛋發(fā)生磷酸化，引起肌動蛋白骨架的重組，產(chǎn)生白骨架的重組，產(chǎn)生EC移行。移行。PI3K-Akt/PKB途徑途徑u VEGFVEGF與與VEGFR2VEGFR2結合后，結合后，PI3KPI3K發(fā)生磷酸化，活化的發(fā)生磷酸化，活化的PI3KPI3K與底與底物物PIP2PIP2結合將其轉(zhuǎn)化為結合將其轉(zhuǎn)化為PIP3PIP3，PIP3PIP3誘導誘導Akt/PKBAkt/

5、PKB磷酸化。磷磷酸化。磷酸化的酸化的AktAkt既可經(jīng)過磷酸化既可經(jīng)過磷酸化BADBAD和和Caspase9Caspase9天冬氨酸特異天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶抑制性半胱氨酸蛋白酶抑制BADBAD和和Caspase9Caspase9的活性，誘導的活性，誘導ECEC增增生和移行，也可經(jīng)過激活生和移行，也可經(jīng)過激活eNOSeNOS產(chǎn)生產(chǎn)生NO,NO,控制造血功能和控制造血功能和AMIAMI急性骨髓白血病細胞的生長。急性骨髓白血病細胞的生長。Ca2+-Ca2+-磷脂依賴性激酶途徑磷脂依賴性激酶途徑u VEGF活化活化PLC, PLC水解膜組分水解膜組分PIP2產(chǎn)生產(chǎn)生IP3和和DAG。IP3誘

6、導細胞內(nèi)誘導細胞內(nèi)Ca2+釋放，促進前列腺素的生成，提高血管釋放，促進前列腺素的生成，提高血管浸透性。浸透性。Ca2 + 使使PKC結合并聚合至質(zhì)膜，在結合并聚合至質(zhì)膜，在DAG二酯二酯酰甘油的作用下活化，酰甘油的作用下活化，PKC也可作為也可作為eNOS和和Raf1-MEK1/2-ERK1/2的上游激活物，促進的上游激活物，促進NO的產(chǎn)生，促進基的產(chǎn)生，促進基因的表達和細胞的增殖。因的表達和細胞的增殖。04 VEGF信號通路的作用信號通路的作用u VEGF/VEGFR2所介導的信號級聯(lián)通路可以調(diào)控血管內(nèi)皮所介導的信號級聯(lián)通路可以調(diào)控血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移、存活，引起血管通透性的改動，控制細

7、胞的增殖、遷移、存活，引起血管通透性的改動，控制血管的新生。在腫瘤的生長過程中需求新生血管來供應血管的新生。在腫瘤的生長過程中需求新生血管來供應營養(yǎng)物質(zhì)和排泄代謝物。營養(yǎng)物質(zhì)和排泄代謝物。)u VEGF可以引起內(nèi)皮細胞增生，引起其浸透性加強，導致血可以引起內(nèi)皮細胞增生，引起其浸透性加強，導致血管腫瘤、血管浸透，水腫及炎癥。管腫瘤、血管浸透，水腫及炎癥。05 作用于作用于VEGF信號通路的血管生成抑制劑信號通路的血管生成抑制劑u 直接靶向直接靶向VEGFVEGF的血管生成抑制劑的血管生成抑制劑u VEGFVEGF單克隆抗體貝伐單抗，單克隆抗體貝伐單抗， 世界上首個世界上首個VEGFVEGF抑制劑

8、抑制劑) )u 可溶性可溶性VEGFRVEGFR藥物藥物AfliberceptAfliberceptu VEGFVEGF的反義寡核苷酸的反義寡核苷酸u 作用于作用于VEGFVEGF通路中其他信號傳送分子的血管生成抑制劑通路中其他信號傳送分子的血管生成抑制劑u VEGFRVEGFR酪氨酸激酶抑制劑酪氨酸激酶抑制劑( (索拉非尼，世界上首個用于臨床索拉非尼，世界上首個用于臨床的多靶點抗腫瘤藥物的多靶點抗腫瘤藥物) )u 缺氧誘導因子抑制劑缺氧誘導因子抑制劑06 VEGF06 VEGF對皮膚癌發(fā)生與開展的調(diào)控對皮膚癌發(fā)生與開展的調(diào)控u 在人類皮膚癌中，鱗狀細胞癌的發(fā)病率居第二位，世界上每年有在人類皮

9、膚癌中，鱗狀細胞癌的發(fā)病率居第二位，世界上每年有500,000500,000人發(fā)病。人發(fā)病。u DMBA/TPADMBA/TPA二羥甲基丁酸二羥甲基丁酸/ /對苯二甲酸化學誘導小鼠皮膚癌，小對苯二甲酸化學誘導小鼠皮膚癌，小鼠的鱗狀細胞癌和人類極其類似。鼠的鱗狀細胞癌和人類極其類似。u 腫瘤的生長過程中，腫瘤的生長過程中，VEGFVEGF可以促進血管內(nèi)皮細胞增殖從而添加腫可以促進血管內(nèi)皮細胞增殖從而添加腫瘤的血管密度，促進腫瘤生長。瘤的血管密度，促進腫瘤生長。u 由于血管生成在皮膚鱗狀細胞癌的發(fā)生開展有重要影響，由此推由于血管生成在皮膚鱗狀細胞癌的發(fā)生開展有重要影響，由此推斷，斷，VEGFVEG

10、F對皮膚癌的生長也有重要的促進作用。對皮膚癌的生長也有重要的促進作用。u 很多腫瘤生長過程中，血管微環(huán)境可以影響腫瘤干細胞很多腫瘤生長過程中，血管微環(huán)境可以影響腫瘤干細胞CSCCSC的的功能。但是功能。但是VEGFVEGF能否可以直接影響能否可以直接影響CSCCSC的增殖，尚未有明確結論。的增殖，尚未有明確結論。一一. .皮膚癌血管微環(huán)境中能否存在皮膚癌血管微環(huán)境中能否存在CSCsCSCs？u在腦腫瘤中，血管微環(huán)境中存在CSC并能影響其功能，但皮膚癌血管微環(huán)境中能否存在CSC尚不明確。皮膚癌中的腫瘤上皮細胞TEC具有克隆性增殖潛能，并且TEC移植到免疫缺陷的小鼠后可構成腫瘤，因此可以推斷TEC

11、即為CSCs。u 為確定皮膚癌血管微環(huán)境能否存在CSCs，進一步經(jīng)過免疫組織化學染色研討：u 三種 CSC markers:CD34+、Hmgau 免疫 TEC markers:K5、K14u 染色 EC markers:endoglin、CD31u CSC:腫瘤干細胞 TEC:腫瘤上皮細胞 u EC：血管內(nèi)皮細胞u 皮膚癌的TEC可以顯示CSC的markers CD34+,但內(nèi)皮細胞沒有顯示CSC的markers CD34+, 因此可以排除內(nèi)皮細胞的影響，證明TEC即為皮膚癌里的CSC 血管微環(huán)境中存在CSC二二.VEGF.VEGF對對CSCCSC的影響的影響 以上實驗已證明小鼠皮膚癌血管微

12、環(huán)境以上實驗已證明小鼠皮膚癌血管微環(huán)境 中存在中存在CSCCSC，并且現(xiàn)知，并且現(xiàn)知VEGFVEGF對血管對血管 微環(huán)境的構成有重要影響，但微環(huán)境的構成有重要影響，但VEGFVEGF對對 CSC CSC能否有直接影響尚未證明。能否有直接影響尚未證明。一DC101封鎖性阻斷VEGFR2二皮膚癌小鼠模型里敲除Vegfa基因三皮膚癌小鼠模型里過表達VEGF一一DC101DC101封鎖性阻斷封鎖性阻斷VEGFR2VEGFR2 經(jīng)過qRT-PCR、免疫熒光可以證明：VEGFR2存在于血管內(nèi)皮細胞。welcome to use these PowerPoint templates, New Content

13、 design, 10 years experience DC101是VEGFR2的封鎖性抗體，劇烈抑制腫瘤血管再生，DC101作用于皮膚癌小鼠模型，可見內(nèi)皮細胞增殖顯著減少、腫瘤血管密度明顯降低，CSCs的比例降低。u VEGFVEGF阻斷阻斷 血管生成血管生成 減少減少 CSC CSC比比 例降低例降低u 阻斷阻斷VEGFVEGF能經(jīng)過減少血管生成使能經(jīng)過減少血管生成使CSCsCSCs比例降低，但是比例降低，但是VEGFVEGF能否能直接影響能否能直接影響CSCsCSCs的某些基因的表達來直接調(diào)控其增殖的某些基因的表達來直接調(diào)控其增殖尚需進一步證明。尚需進一步證明。u VEGF CSC V

14、EGF CSC ？ u qRT-PCR闡明VEGFa在CD34+CSCs中的表達高于正常上皮細胞和CD34-CSCs。二皮膚癌小鼠模型里敲除二皮膚癌小鼠模型里敲除VegfaVegfa基因基因u 為了探求 CSCs 分泌的VEGF能否調(diào)控皮膚CSCs的自我更新和分化，維持腫瘤的生長，該實驗在曾經(jīng)建立皮膚癌的小鼠模型中敲除Vegfa基因，用抗癌藥三苯氧胺處置一周后，大多數(shù)腫瘤曾經(jīng)萎縮到原來的60%,兩周后大多數(shù)腫瘤完全消逝。u 在癌癥的治療的過程中，單純的血管增生抑制劑并不能使曾經(jīng)建立的腫瘤完全消逝，而上述實驗中腫瘤完全消逝，闡明：Vegfa可以經(jīng)過除促進血管增生以外的要素影響腫瘤生長。Vegfa

15、基因的缺失導致TECs即CSCs顯著減少，可以推斷：VEGF對皮膚癌的CSCs存在一定影響。u 從CSCs對稱性細胞分裂與非對稱性分裂來分析這種假設能否成立，對稱性細胞分裂代表細胞正在進展自我更新，非對稱性分裂闡明腫瘤細胞的分化。u 在腫瘤生長的過程中，大約40%的TEC處于對稱性分裂自我更新的形狀。但是在敲除VEGFa的小鼠皮膚癌模型里，處于增殖的TEC比例大幅度降低。因此VEGF對皮膚CSCs的增殖和自我更新有重要影響。三皮膚癌小鼠模型里過表達三皮膚癌小鼠模型里過表達VegfaVegfau 在曾經(jīng)建立皮膚癌的小鼠模型里，特異性使TEC內(nèi)Vegfa基因過表達，來研討VEGF的添加能否添加CS

16、Cs的自我更新才干。u Vegfa基因過表達后，可見CSCs大量增殖，對稱性細胞分裂的CSC比例添加。u 結果闡明：VEGF可以經(jīng)過添加CSC的自我更新，促進血管內(nèi)皮細胞的增殖和血管密度的添加促進腫瘤的生長。u VEGFVEGF改動改動CSCsCSCs的自我更新和分化才干以及其分子機制，我的自我更新和分化才干以及其分子機制，我們從基因程度研討獲得：們從基因程度研討獲得：u 1 1、regulate stemness:Soxregulate stemness:Sox、HmgaHmgau 2 2、 proliferation:Ccnd1 proliferation:Ccnd1、Ccng1Ccng1u 3 3、經(jīng)過血管微環(huán)境調(diào)控腫瘤細胞、經(jīng)過血管微環(huán)境調(diào)控腫瘤細胞之之 u Genes Genes 間的相互作用：間的相互作用：Col1Col1、Col3a1 Col3a1 u 4 4、鱗狀細胞癌中表達的基因：、鱗狀細胞癌中表達的基因：u Krt13 Krt13、Ano1 Ano1 u 在Vegfa基因過表達的皮膚癌小鼠