【2017年整理】實驗三聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳分離血清脂蛋白

1、1教案首頁2、了解血清脂蛋白各組分的分離情況大體內容與時間安排，教學方法:1、聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理5mi n2、聚丙烯酰胺凝膠電泳的操作步驟及示范10mi n3、聚丙烯酰胺凝膠電泳的注意事項4、學生做實驗5mi n140min教學方法：實驗+示教教學重點、難點：重點：1、聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理2、聚丙烯酰胺凝膠電泳的操作步驟難點：1、聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理2、實驗操作中的灌膠和點樣教研室審閱意見:課程名稱生物化學與分子生物學實驗課年級2005專業(yè)、層次臨床醫(yī)學本科授課教師符偉玉職稱講師課型（大、?。┬W時3授課題目（章、節(jié)）實驗三 聚丙烯酰胺凝膠盤狀電泳分離血清脂蛋白基本教材或主要參考

2、書自編生物化學與分子生物學實驗指導第_3_次課教學目的與要求：1、掌握聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理，了解其操作方法。授課時間：2006年11月13日11月17日2教研室主任簽名:年 月曰3基本內容一、實驗原理（一）濃縮效應在pH=6.7的濃縮膠中帶電粒子的泳動速度為：Cl- proteinGly，蛋白質樣品夾在Cl-和Gly之間被擠壓成一條狹窄的區(qū)帶，使蛋白質樣品濃縮。（二）電荷效應不同蛋白質pI不同，在相同pH值下所帶電荷不同，因此在相同電場強度 作用下，在電場中的移動（泳動）速度不同，可以根據(jù)這一效應把蛋白質分成 不同的區(qū)帶。（三）分子篩效應所聚合形成的PAG為多孔網(wǎng)狀結構，對大分子物質的穿透

3、有一定阻力，蛋 白質在通過具有均一孔徑的凝膠時，因顆粒大小不同，形狀規(guī)則程度不同，所 受阻力也不相同。利用本效應也可以將蛋白質分離為不同的區(qū)帶。顆粒大形狀不規(guī)則的分子T阻力fT電泳vJ顆粒小，球形分子T阻力JT電泳vf將血清脂蛋白用蘇丹黑B丙二醇預染，加于聚丙烯酰胺凝膠柱上進行電泳。由于聚丙烯酰胺凝膠電泳具有濃縮效應、電荷效應和分子篩效應， 因此它的分辨率高，可將血清脂蛋白各組分清晰分開。二、操作步驟（改動）1、 第1步改為：將清潔的0.5X7.5cm玻璃管（1支/2人）,一端套上帶有玻璃 珠的橡皮管（同時滴入2滴蔗糖并檢查有無漏水） 垂直插在小試管上， 以備制 膠。從冰箱中取出下列試劑，在室

4、溫中平衡，然后在一小燒杯中依此加入。2、 第2步：迅速用吸管吸取上述混合液沿管柱注入玻管中，每管0.8ml-1.0ml,隨即用滴管經(jīng)針頭沿管壁緩慢加入蒸餾水約0.5cm高度以隔氧；改為迅速用吸管吸取上述混合液沿管壁柱注入玻管中至離管口1cm，加滿蒸餾水以隔氧。3、 第3步然后取預染血清50卩I加在凝膠面上，再沿管壁緩慢加入電泳液直至管的頂端，改為沿管壁緩慢加入電泳液直至管的頂端，用200卩l(xiāng)槍取預染血清50卩I加在凝膠面上；刪除取血清0.2ml，加蘇丹黑B丙二醇液0.02ml，加25%蔗糖溶液0.02ml，混勻，室溫放置45min后，2000r/min離心5min。4、 第4步，電流為25mA

5、/管，待第一色帶到達膠管下段約1cm時停止電泳；改為電流為6mA/管，待第一色帶到達膠管下段約2cm時停止電泳。三、注意事項1、 丙烯酰胺和甲叉雙丙烯胺是神經(jīng)性毒劑，過硫酸銨為有毒成份，并對皮膚有刺激作用，注意避免直接接觸（漏膠時不要用手接觸）。大量操作時應在通風櫥中進行。2、 丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺溶液應裝在棕色瓶中，置冰箱內（4C）保存?？少A 存12月。測定pH值（4.95.2）可檢查其是否失效。失效液不能聚合。3、TEMED要密封保存，過硫酸銨溶液最好當天配制，以防止氧化失效。4、 配膠取樣要準確，最后加過硫酸銨，加完后輕輕混合（關鍵）；5、 配好膠后應于盡快灌膠（不要形成氣泡），5分

6、鐘內完成裝柱，清洗儀器；6、 切記裝柱后立即用蒸餾水封閉；灌膠和電泳時要注意排除氣泡；7、 加樣時注意不能損傷已聚合的凝膠表面；8、 電泳時凝膠管不能漏水，并且與電泳槽垂直；凝膠和濾紙請放入垃圾桶中，勿 直接倒入水池9、 電泳時間不能過久，待第一條色帶到達玻璃管下端約2cm時停止電泳，否則 色帶會變寬。輔助手段和時間分配5min示意圖示意圖示意圖10min5min實驗+示教140mi n4小結實驗利用聚烯酰胺凝膠作電泳支持物。電荷和分子大小不一的各種血清蛋白質 通過濃縮效應、電荷效應、分子篩效應而被精細地分離。由于具有以上三種效應， 所以此方法分離效果好，分辨率高。兔血清蛋白在聚丙烯酰胺凝膠盤

7、狀電泳中可分 出34個組份。復習思 考題、 作業(yè)題1、正?？崭寡逯鞍纂娪究沙霈F(xiàn)哪些區(qū)帶？將本實驗的電泳圖譜與血清瓊脂糖 凝膠電泳圖譜比較并解釋。2、聚烯酰胺凝膠電泳分離出的各種血清脂蛋白是否為均一物質？為什么？下次課 預習 要點分子篩層析（凝膠過濾）的原理、操作過程及注意事項。實施 情況及 分析5總黃酮生物總黃酮是指黃酮類化合物，是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界，是許多中草藥的有效成分。在自 然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃（醇）、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等。簡介近年來，由于自由基生命科學的進展，使具有很強的抗氧化和消除自由基作用的類黃酮受到空前

8、的重視。類黃酮參與了磷酸與花生四烯酸的代謝、蛋白質的磷酸化、鈣離子的轉移、自由基的清除、抗氧化活力的增強、氧化還原作用、螯合作用和基因的表達。它們對健康的好處有：（1）抗炎癥 （2） 抗過敏 （3） 抑制細菌 （4） 抑制寄生蟲（5） 抑制病毒（6） 防治肝病 （7）防治血管疾病 （8）防治血管栓塞（9）防治心與腦血管疾?。?0）抗腫瘤 （11） 抗化學毒物 等。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血 腦屏障，能時入脂肪組織，進而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護血管、防動脈硬化、擴張毛細血管、疏通微循環(huán)、活化大腦及其他臟器細胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。 _近年來國內外對茶多酚、

9、銀杏類黃酮等的藥理和營養(yǎng)性的廣泛深入的研究和臨床試驗，證實類黃酮既是藥理因子， 又是重要的營養(yǎng)因子為一種新發(fā)現(xiàn)的營養(yǎng)素，對人體具有重要的生理保健功效。目前，很多著名的 抗氧化劑和自由基清除齊熾是類黃酮。例如，茶葉提取物和銀杏提取物。葛根總黃酮在國內外研究 和應用也已有多年，其防治動脈硬化、治偏癱、防止大腦萎縮、降血脂、降血壓、防治糖尿病、突 發(fā)性耳聾乃至醒酒等不乏數(shù)例較多的臨床報告。從法國松樹皮和葡萄籽中提取的總黃酮”碧蘿藏-（英文稱PYCNOGENOL）在歐洲以不同的商品名實際行銷應用25年之久，并被美國FDA認可為食用黃酮類營養(yǎng)保健品，所報告的保健作用相當廣泛，內用稱之為”類維生素”或抗自

10、由基營養(yǎng)素，外用稱之為”皮膚維生素”。進一步的研究發(fā)現(xiàn)碧蘿藏的抗氧化作用比VE強50倍，比VC強20倍，而且能通過血腦屏障到達腦部，防治中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，尤其對皮膚的 保健、年輕化及血管的健康抗炎作用特別顯著。在歐洲碧蘿藏已作為保健藥物，在美國作為膳食補 充品（相當于我國的保健食品） ，風行一時。隨著對生物總黃酮與人類營養(yǎng)關系研究的深入，不遠的將來可能證明黃酮類化合物是人類必需的微營養(yǎng)素或者是必需的食物因子。性狀：片劑。功能主治與用法用量功能主治：本品具有增加腦血流量及冠脈血流量的作用，可用于緩解高血壓癥狀（頸項強痛）治療心絞痛及突發(fā)性耳聾，有一定療效。用法及用量：口服：每片含總黃酮6 0m

11、g，每次5片，1日3次。不良反應與注意不良反應和注意：目前，暫沒有發(fā)現(xiàn)任何不良反應6洛伐他丁【中文名稱】： 洛伐他丁【英文名稱】：Lovastat in【化學名稱】：(S)-2-甲基丁酸-(1S,3S,7S,8S,8aR)-1,2,3,7,8,8a-六氫-3,7-二甲基-8-2-(2R,4R)-4-羥基-6氧代-2-四氫吡喃基 卜乙基卜1-萘酯【化學結構式】：洛伐他丁結構式【作用與用途】 洛伐他丁胃腸吸收后，很快水解成開環(huán)羥酸，為催化膽固醇合成的早期限速酶(HMG-coA還原酶)的競爭性抑制劑。可降低血漿總膽固醇、低密度脂蛋白和極低密度脂蛋白的膽固醇含量。亦可中度增加高密度脂蛋白膽固醇和降低血

12、漿甘油三酯?？捎行Ы档蜔o并發(fā)癥及良好控制的糖尿病人的高膽固醇血癥，包括了胰島素依賴性及非胰島素依賴性糖尿病。【用法用量】口服：一般始服劑量為每日20mg，晚餐時1次頓服，輕度至中度高膽固醇血癥的病人，可以從10mg開始服用。最大量可至每日80mg。【注意事項】 病人既往有肝臟病史者應慎用本藥，活動性肝臟病者禁用。副反應多為短暫性的:胃腸脹氣、腹瀉、便秘、惡心、消化不良、頭痛、肌肉疼痛、皮疹、失眠等。洛伐他丁與香豆素 抗凝劑同時使用時，部分病人凝血酶原時間延長。使用抗凝劑的病人，洛伐他丁治療前后均應檢查 凝血酶原時間，并按使用香豆素抗凝劑時推薦的間期監(jiān)測。7他汀類藥物他汀類藥物(statins)

13、是羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，此類藥物通過競爭性抑制內源性膽固醇合成限速酶(HMG-CoA)還原酶，阻斷細胞內羥甲戊酸代謝途徑，使細胞內膽固醇合成減少，從而反饋性刺激細胞膜表面(主要為肝細胞)低密度脂蛋白(low de nsity lipoprote in,LDL)受體數(shù)量和活性增加、使血清膽固醇清除增加、水平降低。他汀類藥物還可抑制肝臟合成載脂蛋白B-100，從而減少富含甘油三酯AV、脂蛋白的合成和分泌。他汀類藥物分為天然化合物(如洛伐他丁、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀)和完全人工合成化合物(如氟伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、羅伐他汀、pitavastat in)是最

14、為經(jīng)典和有效的降脂藥物，廣泛應用于高脂血癥的治療。他汀類藥物除具有調節(jié)血脂作用外，在急性冠狀動脈綜合征患者中早期應用能夠抑制血管內皮的炎癥反應，穩(wěn)定粥樣斑塊，改善血管內皮功能。延緩動脈粥樣硬化(AS)程度、抗炎、保護神經(jīng)和抗血栓等作用。結構比較辛伐他汀(Simvastatin)是洛伐他汀(Lovastatin)的甲基化衍化物。美伐他汀(Mevastatin又稱康百汀，Compacti n)藥效弱而不良反應多，未用于臨床。目前主要用于制備它的羥基化衍化物普伐他汀(Pravastatin)。體內過程洛伐他汀和辛伐他汀口服后要在肝臟內將結構中的其內酯環(huán)打開才能轉化成活性物質。 相對于洛伐他汀和辛伐他

15、汀，普伐他汀本身為開環(huán)羥酸結構，在人體內無需轉化即可直接發(fā)揮藥理作用，且該結構具有親水性，不易彌散至其他組織細胞，極少影響其他外周細胞內的膽固醇合成。除氟伐他汀外，本類藥物吸收不完全。除普伐他汀外，大多與血漿蛋白結合率較高。用藥注意大多數(shù)患者可能需要終身服用他汀類藥物，關于長期使用該類藥物的安全性及有效性的臨床研究已經(jīng)超過10年。他汀類藥物的副作用并不多，主要是肝酶增高，其中部分為一過性，并不引起持 續(xù)肝損傷和肌瘤。定期檢查肝功能是必要的，尤其是在使用的前3個月，如果病人的肝臟酶血檢查值高出正常上線的3倍以上，應該綜合分析病人的情況，排除其他可能引起肝功能變化的可能，如 果確實是他汀引起的，有

16、必要考慮是否停藥；如果出現(xiàn)肌痛，除了體格檢查外，應該做血漿肌酸肌 酸酶的檢測，但是橫紋肌溶解的副作用罕見。另外，它還可能引起消化道的不適，絕大多數(shù)病人可 以忍受而能夠繼續(xù)用藥。8紅曲米天然降壓降脂食品一一紅曲米紅曲 紅曲米又稱紅曲、紅米，主要以秈稻、粳稻、糯米等稻米為原料，用紅曲霉菌發(fā)酵而成，為棕紅色或紫紅色米粒。紅曲米是中國獨特的傳統(tǒng)食品，其味甘性溫，入肝、脾、大腸經(jīng)。早在明代，藥學家李時珍所著本 草綱目中就記載了紅曲的功效：營養(yǎng)豐富、無毒無害，具有健脾消食、活血化淤的功效。上世紀七十年 代，日本遠藤章教授從紅曲霉菌的次生級代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)了能夠降低人體血清膽 固醇的物質莫納可林K(Monac

17、olin-k) 或稱洛伐他汀，(Lovastatin)，引起醫(yī)學界對性曲米 的關注。1985年，美國科學家Goldstein和Brown進一步找出了Monacolin-k抑制膽固醇合成的作用 機理，并因此獲得諾貝爾獎，紅曲也由此名聲大噪。紅曲米的醫(yī)療保健功效如下：1降壓降脂：研究表明，紅曲米中所含的Monacolin-K能有效地抑制肝臟羥甲基戊二酰輔酶還原酶的作用，降低人體膽固醇合成，減少細胞內膽固醇貯存；加強低密度脂蛋白膽固醇的攝取與代謝，降低血中低密度脂蛋白膽固醇的濃度，從而有效地預防動脈粥樣硬化；抑制肝臟內脂肪酸及甘油三酯的合成，促進脂質的排泄，從而降低血中甘油三酯的水平；升高對人體有益

18、的高密度脂蛋白膽固醇的水平，從而達到預防動脈粥樣硬化，甚至能逆轉動脈粥樣硬化的作用。2降血糖：遠藤章教授等人曾直接以紅曲菌的培養(yǎng)物做飼料進行動物試驗，除確定含有紅曲 物的飼料可以有效地使兔子的血清膽固醇降低18%25%以上外，又發(fā)現(xiàn)所有試驗兔子在食 入飼料之后的0.5小時內血糖降低23%33%，而在1小時之后的血糖量比對照組下降了19%29%。說明紅曲降糖功能顯著。3防癌功效：紅曲橙色素具有活潑的羥基，很容易與氨基起作用，因此不但可以治療胺血癥且是優(yōu)良的防癌物質。4保護肝臟的作用：紅曲中的天然抗氧化劑黃酮酚等具有保護肝臟的作用。9壓樂膠囊壓樂膠囊成分壓樂膠囊”唯一成分 紅曲酵素”大紀事1970

19、:紅曲米提取6種他汀，制成降脂藥世界第一紅曲，是寄生在紅曲米上，發(fā)酵提取壓樂膠囊的活性生物菌。70年代日本科學家遠藤根據(jù)本草綱目上記載紅曲的活血”功效的啟示，從紅曲營養(yǎng)液中分離出優(yōu)良的6種含膽固醇抑制劑和甘油三酯分解劑的紅曲菌，被命名為 莫納可林”即 他汀類”此后30多年來，紅曲米提取的他汀”被世界醫(yī)學界公認為最好的降脂藥，在臨床上大量使用。2002:降壓史上歷史性突破-6種他丁+2種紅曲降壓素=紅曲酵素”2002年，震驚世界的生物領域重大發(fā)明，紅曲中的降糖、降壓、抗癌成分(GABA-GLUCOSAMINE)通過發(fā)酵提取，在原來6種他丁的基礎上合成紅曲酵素(Monacolin-R)，經(jīng)大量的臨

20、床試驗，這種復合酵素不僅保留了生物他丁的降脂功效，而且它的降血壓效果堪比任何藥物，藥日新聞撰文品論，紅曲酵素的出現(xiàn)，將開辟降壓藥新時代。2008:6年臨床證實 紅曲酵素”降血壓、治心腦、防猝死、能停藥隨后的6年，5萬名高血壓患者臨床運用證實：紅曲酵素”對調理器官微血循環(huán)、幫助血液進行重新分配，迅速降壓，修復受損心腦肝腎作用顯著。而且紅曲酵素”降壓同時、養(yǎng)心、護腦、清肝、活腎的功效，達到了降壓藥的頂峰！紅曲酵素”也被世界醫(yī)學界譽為可以媲美青霉素的曠世發(fā)現(xiàn)！”紅曲酵素”摘取美國醫(yī)學界最高榮譽拉斯克獎”紅曲酵素”的發(fā)現(xiàn)者日本Biopharm研究所所長遠藤章 (74歲)，因此項發(fā)明被授予美國醫(yī)學界最高

21、榮譽拉斯克獎”紐約市長布隆博格將頒獎理由歸結于數(shù)千萬10人因此得以延長生命!通知各地消費者：為了打擊假冒偽劣產(chǎn)品，保護消費者利益，公司從2011年4月起,正式委托國家GM臥證企業(yè) 吉林市隆泰參茸制品有限責任公司 生產(chǎn)我公司產(chǎn)品壓樂牌鑫康延平膠囊（以下簡稱壓樂）。按照國家規(guī)定，壓樂產(chǎn)品盒子和說明書做以下相應調整：1.委托生產(chǎn)企業(yè)由原來的“山西天特鑫保健食品有限公司”， 改為“吉林市隆泰參茸制品有限責任公司”。2.生產(chǎn)地址由原來的“山西省大同縣馬連莊”，改為“吉林 省樺甸市經(jīng)濟開發(fā)區(qū)”。3.產(chǎn)品企業(yè)標準由“Q140200TTX0092010” 改為“Q/HDLTS.09-2011.4.衛(wèi)生許可證由

22、“晉衛(wèi)食證字 （2007）140000-110039號”，改為吉衛(wèi)食證字 （2008）第220282-SC4348號。5.增加了食品流通許可證號SP1101051010090481（ 1-1）。6.盒子上增加了 “數(shù)碼鈔票花紋防偽”技術，包裝上的花紋清晰，仔細觀看，花紋中間有“壓樂”字樣。北京鑫康勝生物技術開發(fā)有限公司2011年4月6日11本店鄭重聲明：不賣假貨 每天解釋防偽碼的問題真的很累！請顧客買之前先看完。廠家因為不讓在網(wǎng)上出售，所以我們的防偽碼都 要刮掉，那個防偽碼對于顧客來講是查詢真?zhèn)斡玫?，但是對于代理來講是廠家用來查串貨用的，所以我們 網(wǎng)上出售一定要撕掉，希望您理解！如果您不能接受

23、的話，請不要拍，免得沒有必要的麻煩！以后凡是因 為防偽碼被撕申請退貨的顧客，本店一律不支持！請您考慮好了再拍！我們盒子上的防偽挖掉了一部分，是查不了的，因為廠家嚴查網(wǎng)上低價串貨，廠家可以從防偽數(shù)字查出貨 源，不能接受的請不要拍！絕對正品，收到可以試用幾天滿意在確認，不滿意可以全額退款!誰能詳細給我介紹一下藥品串貨。謝謝！瀏覽次數(shù)：697次懸賞分：0 |解決時間：2010-9-12 16:15 |提問者:yanyecc最佳答案藥品串貨是一種違規(guī)操作。一般來說藥品的經(jīng)營，在地方都是有代理商，代理商是負責獨家供貨，而藥品的生產(chǎn)廠家也會給予市場保護，每個地區(qū)不能出現(xiàn)同樣品種的經(jīng)營代理商。串貨是指 通過

24、廠家發(fā)貨到其他的地方，再把藥品流通到有生產(chǎn)廠家代理商的地方市場去銷售，形成了市場沖撞！ 分享給你的朋友吧： 新浪微博回答時間：2010-9-2 22:29藥品串貨對藥廠有什么害處瀏覽次數(shù)：607次懸賞分：0 |解決時間：2010-10-22 11:52 |提問者：匿名最佳答案首先明確什么是串貨。串貨的種類有以下3種：1良性串貨：廠商在市場開發(fā)的初期，有意或者無意地選中了市場中流通性強的經(jīng)銷商，使其產(chǎn)品迅速流 向市場空白區(qū)域和非重要區(qū)域。2惡性串貨：經(jīng)銷商為了獲得非正常利潤，蓄意向自己轄區(qū)外的市場傾銷商品。惡意串貨形成的5個大的原因：1市場飽和；2廠商給予的優(yōu)惠政策不同；3.通路發(fā)展的不平衡；4

25、品牌拉力過大而通路建設沒跟上；5.運輸成本不同導致經(jīng)銷商投機取巧。對廠家來說： 害處 可追溯性差，出了事搞不清狀況。 價格體系混亂長遠看影響品牌發(fā)展。 消費者得不到應有保證，經(jīng)銷商受到打擊，不利于渠道建設。 當然也有好處。所以竄貨屢禁不止 這里學問不小，可以慢慢交流。新浪微博回答時間：2010-10-22 10:20 |我來評論壓樂膠囊 ”唯一成分 “紅曲酵素 ”大紀事1970：紅曲米提取6種他汀，制成降脂藥世界第一 紅曲，是寄生在紅曲米上，發(fā)酵提取的活性生物菌。70年代日本科學家遠藤根據(jù)本草綱目上記載紅曲 的“活血”功效的啟示， 從紅曲營養(yǎng)液中分離出優(yōu)良的6種含膽固醇抑制劑和甘油三酯分解劑的紅曲菌，被命名為“莫納可林 ”即“他汀類 ”，此后30多年來，紅曲米提取的 “他汀”被世界醫(yī)學界公認為最好的降脂藥，在 臨床上大量使用。122002：降壓史上歷史性突破6種他丁+2種紅曲降壓素=“紅曲酵素 ”2002年，震驚世界的生物領域重大發(fā)明，紅曲中的降糖、降壓、抗癌成分(GABA-GLUCOSAMINE)通過發(fā)酵提取，在原來6種他丁的基礎上合成 “紅曲酵素(Monacolin-R)，經(jīng)大量的臨床試驗，這種復合酵素 不僅保留了生物他丁的降脂功效，而且它的降血壓效果堪比任何藥物， 藥日新聞撰文品論，紅曲酵素 的出現(xiàn)，將開辟降壓藥新時代。2008：6年臨床證實 “紅曲酵素