Survivin、bcl-2蛋白在白血病中的表達及相關性探討

1、survivin bcl-2蛋白在白血病中的表達及相關性探討摘要目的：探討急性白血病骨髓細胞中surviving bcl-2蛋白的表達及相關性。方 法：采用免疫組化s-p法檢測70例白血病患者骨髓細胞survivin、bcl-2蛋白表達情況。結 果：病例組、anll all cml組survivin> bcl -2蛋白陽性表達率明顯高于對照組，差異 有顯著性(pv0.01)； anll、cml組survivin. bcl-2蛋白陽性表達率明顯高于all組,差 異有顯著性(pv0.01)；而anll與cml組之間差異無顯著性(p>0. 05)； spearman秩和相 關分析顯示，s

2、urvivin bcl-2蛋白表達呈顯著正相關(rs=0. 32, p<0. 01)。結論：survi vin be2均與白血病發(fā)生、發(fā)展密切相關，且兩者有一定的協(xié)同效應。關鍵詞白血病;survivin； bcl-2；凋亡中圖分類號r733. 7文獻標識碼a 文章編號1673-7210 (2008) 03 (b) -019-03the significance and correlation of survivin and bcl2 proteins expression in leukemiawang ye(department of hematologist, shenyang re

3、d cross hospital, shenyang 110013, china)abstract objective:to examine the expression of survivin and bcl-2 proteins in bone marrow cells of leukemia, and to detect correlation of them. methods:s-p immunohistochemistry detected the expression of survivin and bcl-2 in bone marrow cel 1 of 70 cases wh

4、ith leukemia. results:the positive expression rates of survivin and bcl-2 in patient group , anll, all and cml were higher than in control group, with significant difference(p0.01). the positive expression rates of survivin and bcl-2 in anll and cml were higher than in all , with significant differe

5、ncc(p<0.01). there was no significant differenee of their positive rates between anll and cml(p>0. 05). the related analysis of spearman showed the survivin and bcl-2 were closely posi tive related(rs=0. 32, p<0. 01). conelusion:expression of both survivin and be1-2 plays a role in onset, p

6、rogression, curative effect and prognosis of leukemia, and two proteins may act synergistically in the onset and development of leukemia.key words leukemia； survivin; bcl-2； apoptosis白血病是作為血液系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤己證實其發(fā)生與癌基因的激活、抑癌基因的失 活及細胞凋亡受抑有關。survivin基因表達的蛋白質是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoposis protein, iap)家族成員之一，而

7、bcl-2是調(diào)控細胞凋亡的重要基因，二者的蛋白 產(chǎn)物能抑制細胞凋亡，促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。我們通過檢測70例白血病患者骨髄細胞中 survivin. bcl-2蛋白的表達情況及相關性，探討其臨床意義及二者是否在白血病的發(fā)生、 發(fā)展過程中存在協(xié)同效應。1對象與方法11對象收集1998年1月2004年10月沈陽市紅十字會醫(yī)院血液門診及住院的70例白血病患者 骨髓涂片標本，其中，男44例、女26例，年齡1570歲，平均40.3歲。急性非淋巴細胞白 血病(anll) 36例，急性淋巴細胞白血病(all) 14例，慢性粒細胞白血病(cml) 20例， 所有病例均符合血液病診斷及療效標準1。對照組為10例

8、非血液病腫瘤患者骨髓。1.2方法1. 2.1標本制備70例患者均于化療前取肝素抗凝的骨髓液0. 20. 3 ml,用ficoll (相 對密度1.077)分離(2 000轉/min, 20 min)單個核細胞，離心涂片機制片，-20£保存， 所選標本的白血病細胞數(shù)均> 90% o1.2.2檢測試劑鼠抗人survivin單克隆抗體(工作濃度為1 : 400)購自santa公司，兔 抗人bcl-2單克隆抗體購于北京中山生物技術公司，s-p試劑盒購自福州邁新公司。1.2.3免疫組化染色每個病例分別取兩張標本，分別檢測survivin. bcl-2蛋白的表達。 4°c丙酮固定

9、骨髓涂片，采用鏈每菌抗生物素蛋白-過氧化酶連接法(s-p法)，操作步驟按試 劑盒說明書進行。蘇木素復染，中性樹膠封片，實驗中以pbs代替一抗作為陰性對照，慢性 髓細胞白血病細胞株k562做survivin、bcl-2的陽性對照。1. 2. 4結果判定survivin蛋白陽性表達定位于細胞胞漿中，呈棕黃色顆粒，bcl-2蛋白 陽性表達為細胞胞漿中充滿棕色顆粒，細胞核上散在分布，在400倍光鏡下至少觀察5個視 野，計數(shù)400個細胞，陽性細胞>5%定義為陽性，w5%為陰性，計數(shù)陽性細胞百分率。1. 3統(tǒng)計學方法釆用spss 10. 0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，率的比較釆用x 2檢驗，相關分析采用s

10、pearman 秩和相關分析，并對相關系數(shù)進行x2檢驗，組間比較釆用四格表確切概率分析，pv0.05 為差異有顯著性。2結果2. 1 survivin、bcl-2蛋白在對照組及白血病患者屮的表達圖廣5為免疫組化s-p法檢測70例白血病患者骨髓細胞與k562細胞中survivin.bcl-2 蛋白表達情況。2.2 survivin. bcl-2蛋白在白血病患者中的陽性表達關系病例組中,survivin>bcl-2蛋白表達陽性率明顯高于對照組，差異有顯著性(x 2二90. 62, x2=47. 53, p<0.01)o anll、all、cml 'p survivin、bcl-

11、2 蛋白表達陽率均高于對照組， 差異有顯著性(pv0.01)。見表1。2.3 anll、all、cml 之間 survivin、bcl-2 蛋白的表達關系anll組中survivin、bcl-2陽性率高于all組，差異有顯著性(x 2=6. 77, x 2=16. 41, p<0. 01)； cml組中survivin、bcl-2陽性率高于all組,差異有顯著性(x 2=1. 39, x2=18. 88, p<0. 05)； anll組中survivin、bcl-2陽性率與cml組比較無顯著性差異 (x2=2. 16, x2=0. 1, p>0. 05)o2. 4白血病細胞中

12、survivin、bcl-2蛋白表達的相關性在survivin陽性表達的61例中，bcl-2陽性表達率為83.61% (51/61),在bcl-2陽性 表達的55例中，survivin陽性表達率為92. 73% (51/55), spearman秩和相關分析顯示 survivin、bcl-2 蛋白表達呈顯著正相關(rs=0. 32, pv0. 01)。3討論隨著研究的深入，新近發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制因子survivin和bcl-2的表達與腫瘤發(fā)生、發(fā) 展及預后的關系越來越成為研究的熱點。survivin是凋亡抑制蛋白iap家族新成員，直接作用于caspase,主要抑制caspase3> casp

13、ase-7的活性，阻斷細胞的凋亡過程。另夕卜survivin也可通過p21間接抑制caspase, 阻止細胞凋亡。survivin的組織分布特征具有明顯的細胞選擇性，表達于胚胎和發(fā)育的胎兒 組織，但不見終末分化的成人組織(胸腺、生殖腺除外)，而在大多數(shù)腫瘤組織內(nèi)有survivin 的表達2。研究表明survivin在白血病患者及白血病細胞系中均有不同程度表達。tamm等3 采用免疫印跡法檢測人類60多種腫瘤細胞survivin蛋白表達，其中5種血液腫瘤細胞株: ccrf-cem (+), k562 (+), m0lt-4 (+), prmi-8226(+), sr(+)。林鳳茹等4應用 rt-

14、pck檢測survivin在急性髓系白血病骨髓細胞屮的表達，結果提示survivin表達陽性者 明顯高于對照組，且獲得完全緩解率明顯低于survivin陰性組，且預后較差。adi da等5 研究表明，survivin高表達的白血病患者的完全緩解率較survivin陰性患者低,且預后較差。 本研究顯示，在白血病患者中survivin蛋白陽性表達率高于對照組，差異有顯著性(p< 0.01),且anll、all、cml各分型中survivin蛋白陽性表達率高于對照組,差異有顯著性(p <0. 01),與文獻相符，說明survivin在白血病發(fā)生屮起重要作用。但本研究提示，anll中 su

15、rvivin陽性表達率高于all組，與shinozawa等6研究表明all細胞survivin基因陽性 表達高于anll的趨勢相反，值得積累更多資料并深入研究。原癌基因be 1-2是從伴有(14, 18)染色體易位的濾泡狀b細胞淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)的，bcl-2 蛋白的生理功能主要是阻遏細胞凋亡，延長細胞壽命，即抗凋亡作用。bcl-2主耍通過兩種 方式實現(xiàn)抗凋亡作用：調(diào)節(jié)抗氧化途徑；調(diào)節(jié)52+從細胞內(nèi)的流出或調(diào)節(jié)蛋白的跨膜運 輸。目前已知bcl-2蛋白廣泛分布于以細胞凋亡為特點的組織(包括骨髓)中，并認為bcl-2 基因與許多無1(14, 18)的血液系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生有關o campana等7檢測16例

16、b細胞型all 患者細胞bcl-2表達率明顯高于正常人。campos等8對82例急性髓細胞白血病患者bcl-2 表達及作用的研究也得到類似的結果。本研究中在白血病患者中bcl-2蛋白表達陽性率高于 對照組,差異有顯著性(pv0.01),且all、anll、cml各分型中bcl-2蛋白陽性表達率均高 于對照組，差異有顯著性(pv0.01),與文獻報道相符，本研究還提示anll、cml組中bcl-2 蛋白表達陽性率高于all組,差異有顯著性(pv0.01, pv0.05),而anll與cml之間的陽 性率差異無顯著性(p>0.05)。研究證實survivin表達與bcl-2表達密切相關。su

17、rvivin基因與bcl-2基因都是由無 tata的富含gc啟動子調(diào)節(jié)的，轉錄激活均增強細胞的增殖，從而推測survivin基因與bcl-2 可能有共同的轉錄激活機制，兩者協(xié)同作用發(fā)揮抗凋亡效應9,10 o我們研究表明，在白血 病細胞中survivin和bc2蛋白表達呈顯著正相關(rs=0. 32, p<0.01),與文獻相符,提 示survivin和bcl-2協(xié)同作用，促進白血病的發(fā)生、發(fā)展。有關survivin > bcl-2在白血病的發(fā)生發(fā)展過程中有很多問題還不清楚，但隨著研究的 深入，survivin與bcl-2的抗凋亡機制及相關性必將進一步被闡述。參考文獻1 張之南，沈悌

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