菌落總數(shù)和大腸菌群

1、菌落總數(shù)和大腸菌群樣品的采集與送檢菌落總數(shù)測定大腸菌群測定采樣瓶：洗凈、包扎、滅菌自來水：燒灼或酒精擦拭龍頭，放水5-10min水源水：距水面10-15cm送檢時間：=2h(常溫) ，=4h(冷藏)無無菌菌取取樣樣檢檢 樣樣固體樣品：在電子天平上稱取固體樣品：在電子天平上稱取25g + 225mL0.85%滅菌生理滅菌生理 鹽水鹽水液體樣品：直接取用液體樣品：直接取用固體樣品存放罐固體樣品存放罐用鑷子取酒精棉擦手，點(diǎn)燃酒精燈；用鑷子取酒精棉擦手，點(diǎn)燃酒精燈；打開稀釋瓶蓋，放在天平上，等顯示屏上的數(shù)字穩(wěn)定后，按打開稀釋瓶蓋，放在天平上，等顯示屏上的數(shù)字穩(wěn)定后，按“去皮去皮”鍵，當(dāng)顯示屏上的數(shù)字顯

2、示為鍵，當(dāng)顯示屏上的數(shù)字顯示為“0”0”時，可開始稱量。時，可開始稱量。去去皮皮鍵鍵器材與試劑 樣品，無菌水，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，吸管，平皿等。概念：菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后，所得1g或1mL檢樣中所含微生物菌落的總數(shù)。肉眼觀察，可用放大鏡，可標(biāo)記必要時分區(qū)計數(shù)，菌落成片者作廢計算公式：無菌操作標(biāo)記何時更換吸管吸吹混勻瓊脂培養(yǎng)基保溫生化安全常識大腸菌群的概念：在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌。每個樣品，選擇3個適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液）每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯，每管接種1mL361培

3、養(yǎng)242h，觀察倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生24 h2 h產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48 h2 h，產(chǎn)氣者進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。注意：注意：樣液加入培養(yǎng)基后不能振樣液加入培養(yǎng)基后不能振搖試管。搖試管。12用接種環(huán)從產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物1環(huán)，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯（BGLB）管中361培養(yǎng)482h，觀察產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣者，計為大腸菌群陽性管。按確證的大腸菌群LSTLST陽性管數(shù)，檢索MPN表（見附錄B），報告每g（mL）樣品中大腸菌群的MPN值。2 21.51.50.150.152 21 11 1MPNMPN表中的陽性管是表中的陽性管是LSTLST管數(shù)。管數(shù)。

4、對產(chǎn)酸但未看到氣泡的發(fā)酵，用手輕打動試對產(chǎn)酸但未看到氣泡的發(fā)酵，用手輕打動試管，如有氣泡沿管壁上浮，應(yīng)考慮可能有氣管，如有氣泡沿管壁上浮，應(yīng)考慮可能有氣體產(chǎn)生，應(yīng)作進(jìn)一步試驗(yàn)。體產(chǎn)生，應(yīng)作進(jìn)一步試驗(yàn)。 固體樣品固體樣品1g1g經(jīng)經(jīng)1010倍稀釋后加入倍稀釋后加入1ml1ml，其樣品，其樣品只有只有0.1g0.1g，故應(yīng)按，故應(yīng)按0.1g0.1g計，不應(yīng)按計，不應(yīng)按1ml1ml計。計。1 1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、?shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆粘Ｓ门囵B(yǎng)基的配制方法掌握高壓蒸汽滅菌鍋、天平等實(shí)驗(yàn)儀器的使用方法學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)2 2、實(shí)驗(yàn)原理：、實(shí)驗(yàn)原理：培養(yǎng)基的概念加熱滅菌的方法（筆記本）3 3、實(shí)驗(yàn)器材：、實(shí)驗(yàn)器材：實(shí)驗(yàn)

5、試劑：稀酸、稀堿、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)儀器：天平、電爐、高壓蒸汽滅菌鍋、培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)器皿：250mL錐形瓶、100mL量筒、培養(yǎng)皿、大試管、玻璃棒、其他輔助材料：報紙、紗繩、pH試紙4 4、實(shí)驗(yàn)過程、實(shí)驗(yàn)過程：準(zhǔn)備配制滅菌加樣培養(yǎng)觀察準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料配制培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基36保溫培養(yǎng)保溫培養(yǎng)倒入培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)基樣品按無菌操作加入平皿中樣品按無菌操作加入平皿中培養(yǎng)基分裝、滅菌培養(yǎng)基分裝、滅菌250mL錐形瓶、錐形瓶、100mL量筒、大試管、玻璃棒、電爐、量筒、大試管、玻璃棒、電爐、培養(yǎng)皿、報紙、紗繩、天平、滅菌鍋、培養(yǎng)皿、報紙、紗繩、天平、滅菌鍋、pH試紙、藥品試紙、藥品檢驗(yàn)自來水/過濾水中的

6、含菌量準(zhǔn)備熱水準(zhǔn)備熱水稱量稱量加熱溶解加熱溶解定容定容調(diào)調(diào)pH 分裝分裝滅菌滅菌冷卻至冷卻至46 倒平板倒平板 保溫實(shí)驗(yàn)保溫實(shí)驗(yàn)每每2位同學(xué)配制一份位同學(xué)配制一份200mL的營養(yǎng)瓊培養(yǎng)基和一份的營養(yǎng)瓊培養(yǎng)基和一份10mL蒸蒸餾水，分別裝于餾水，分別裝于250mL錐形瓶和大試管中，滅菌后使用。錐形瓶和大試管中，滅菌后使用。以自來水、沒滅菌的過濾水和已滅菌的無菌水作為樣以自來水、沒滅菌的過濾水和已滅菌的無菌水作為樣品；取品；取3個平皿，每個平皿中分別加入個平皿，每個平皿中分別加入1mL上述樣品上述樣品滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至46左右，馬上倒入已加入左右，馬上倒入已加入1mL樣品的樣品的3個平皿中，轉(zhuǎn)動平皿使樣品和培養(yǎng)基混合均勻個平皿中，轉(zhuǎn)動平皿使樣品和培養(yǎng)基混合均勻制作好的平皿，冷卻凝固后，標(biāo)上記號（區(qū)分所加制作好的平皿，冷卻凝固后，標(biāo)上記號（區(qū)分所加樣品），倒置放于樣品），倒置放于36的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。小時。5 5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果報告、實(shí)驗(yàn)結(jié)果報告 48小時（2天）后，到實(shí)驗(yàn)室觀察平皿中微生物的生長情況。計數(shù)并記錄每個平皿中生長出來的菌落的數(shù)量，填寫在報告中。觀察記錄后