乙肝治療性疫苗探究現狀

1、乙肝治療性疫苗探究現狀【關鍵詞】治療性疫苗；乙肝；免疫應答治療性疫苗是近年發(fā)展起來的免疫治療新概念，旨在打破 機體的免疫耐受，提高機體特異性免疫應答，清除病原體或 異常細胞，使疾病得以治愈。治療性疫苗主要應用于病毒感 染、腫瘤等疾病的治療。治療性乙肝疫苗的應用針對慢性乙 肝患者或hbv攜帶者，可由高純度和高含量的抗原和免疫佐 劑組成增強其免疫原性，并通過不同途徑呈遞乙肝抗原，打 破機體的免疫耐受，有效誘導免疫應答，達到清除乙肝病毒 的目的。乙肝治療性疫苗是治療慢性乙肝的重要措施，本文 就其研究進展作一綜述。1治療性疫苗的研制1.1蛋白疫苗蛋白質抗原是最重要的一類抗原，hbv 中多以衣殼蛋白和h

2、bc抗原設計為主；其中前s蛋白有很高 的免疫原性，可以強化同存的s蛋白。1. 1. 1基因工程蛋白疫苗 包括hbsag或hbsag、 pre si、pre s2、s蛋白任一組合構成的亞單位疫苗。研 究表明14),分別應用商業(yè)化的pre s2/s疫苗(genhevac bro, pasteur merieux)或 s 疫苗(recombivaxro, merck) 對chb病人進行治療，證實亞單位疫苗能夠減低hbv的復制, 但療效仍有限。pasteur merieux的gen hevacb疫苗（含 hbsag和pre s2蛋白）曾被單用或者和干擾素序貫用于治療 慢性乙型肝炎，患者血清hbv dn

3、a明顯下降者和陰轉者共 達44%50%。但genhevac b接種不能有效降低免疫耐受兒 童血清中病毒dna拷貝數5，且無清除或降低肝細胞內 cccdna含量的證據，因此，genhevac b的治療效果仍不確 定。此外，增加pres成分的新型疫苗hepacare雖提高了應 答率和增強了預防效果，仍不是理想的治療性疫苗。1. 1. 2 免疫原性復合物（immunogenic complex, ic） 疫苗對hbsag的免疫耐受是引起chb發(fā)病的重要原因，多 數疫苗通過提高其抗原的免疫原性而使機體易于發(fā)生免疫 應答，發(fā)揮其治療作用。聞玉梅等6）驗質的免疫復合物 型疫苗是通過改變對hbsag的呈遞方

4、式來誘生有效的免疫應 答，消除免疫耐受性。應用足量hbsag和高效價抗人hbig 復合物對慢性乙型肝炎患者進行治療，效果滿意，但能否有 效降低、清除肝細胞內cccdna,達到徹底清除肝細胞內病毒 的目的尚待證實。此類疫苗也存在不足，即對細胞免疫應答 的激發(fā)遠高于對體液免疫應答的激發(fā)，因此需要進一步優(yōu) 化。1. 1.3表位疫苗由于蛋白質抗原不是通過完整的分 子發(fā)揮作用的，抗原分子表位的研究是近年來新的研究趨勢 有效的保護取決于一組表位的組合與搭配。通過對蛋白 質抗原的b細胞表位、th細胞表位、ctl細胞表位、nk細胞 表位及mhc限制位等有利于免疫識別表位的深入研究，為設 計新一代高效、高特異性

5、疫苗奠定了基礎。針對ctl表位的 脂肽疫苗：此種疫苗的理論基礎是基于抗原分子表位水平的 研究。由于蛋白質抗原通過表位來體現其免疫特異性，有效 的保護性免疫有賴于一組表位的搭配與組合。已知hbcag中 的多肽18 27是hla a2組織相容性抗原，可被ctl識別 而產生免疫應答。將其和th細胞多肽表位（破傷風類毒素的 t細胞表位肽，tt830 843）以及脂質分子共價結合后制成了 theradign hbv疫苗，提高了 ctl多肽的免疫原性，誘導產 生特異性ctl而有清除hbv的作用。有報道（7采用cy21899 t細胞表位疫苗治療慢性乙肝患者，發(fā)現其體內產生的ctl 應答明顯低于急性hbv感染

6、者所測得的結果，這種低水平的 ctl應答是不能清除病毒的。此外，這種疫苗不僅裂解內源 性抗原肽，同時也裂解感染的肝細胞，若應答過強會導致肝 功能惡化，且它具有嚴格的hla a2限制性，應用范圍有限。 多表位疫苗：由于mhc限制性及毒株間抗原性差異，單表位 疫苗的保護作用和應答人群均十分有限，多表位疫苗，尤其 是高度保守、免疫原性強、人群應答范圍廣的，含有多個結 構蛋白或病原體表位的多特異性表位疫苗可能是具有實用 價值的短肽疫苗研究關鍵dshioka等（8）研究發(fā)現,hbv/hiv 多表位基因疫苗能同時激活各表位特異性ctl應答，并增強 部分表位免疫原性，顯示了多表位疫苗研究的可行性。1.2核酸

7、疫苗dna疫苗是20世紀90年代出現的新的 疫苗形式，是一種含抗原基因的表達質粒，誘導細胞免疫應 答為主的免疫應答，尤其是tcl應答，在治療性疫苗研究中 占重要位置。一般認為，dna疫苗在體內持續(xù)表達抗原并反 復刺激免疫活性細胞，是其誘導強烈免疫應答的關鍵，細胞 內、尤其局部apcs細胞內表達的抗原通過mhc i類途徑提 呈后誘導thl應答，激發(fā)ctl應答為主的細胞應答。研究表 明（8）, dna疫苗可誘發(fā)以igg2a型抗體為主的體液應答 （iggl/igg2a&lt；0. 3）和ctl應答,呈thl型應答，抗體滴 度高，維持時間長。此外，dna疫苗構建簡單、制備方便， 且可采用多種方

8、式接種，如肌注、口服和黏膜免疫等，并均 能誘導thl極化，如口服接種prc/cmv hbs也能打破hbsag 轉基因小鼠耐受狀態(tài)，激發(fā)thl型應答，誘導高活性ctls和 高滴度igg2抗體，降低肝組織hbsag mrna及hbsag水平, 表現出抑制肝細胞內病毒復制和清除病毒cccdna作用9, 10）。因此，dna疫苗是治療性疫苗研究重點之一。dna疫苗 的制備包括：（1）編碼某種蛋白質抗原的基因片段的擴增， 包括hbsag、hbcag和hbeag等基因均可作為目的基因；（2） 插入真核細胞表達載體以構建重組質粒，可供插入目的基因 的載體包括逆轉錄病毒載體、腺病毒載體和純化的裸dna載 體。

9、機體接種疫苗后，宿主細胞攝取質粒并表達抗原蛋白， 誘導機體產生特異性細胞免疫和體液免疫應答。1.2. 1單價核酸疫苗治療性疫苗是通過激活特異性 ctl應答來清除chb患者體內的hbv,所以目前研究主要集 中在與激發(fā)ctl活性相關的hbs、presl. pres2和hbc基因 上。davis等(11在小鼠中應用含編碼hbsag和pres s 基因和真核細胞啟動子的重組質粒dna(裸dna疫苗)免疫后, 可誘導ctl和抗hbs的產生，效果較理想。如hbc/hbe dna 疫苗，用這兩種質粒dna免疫小鼠，可有效地產生特異性抗 體，重要的是產生非常強烈的主要組織相容性復合物(mhc) 類限制性ctl

10、應答，但對chb患者的治療還需要進行深入的 研究。美國馬里蘭大學醫(yī)學院疫苗發(fā)展中心(1999)采用基 因槍轟擊皮膚方法接種編碼hbsag的dna疫苗，劑量0. 25 mg/次，共2次，6位志愿者中1人在接種一次以后血液中即 出現高滴度抗hbs抗體，在其余5人未檢測到hbs,抗體 陽轉的志愿者以前曾有hbv接觸史，說明hbsag的dna疫苗 能在人體誘生回憶性免疫反應，但低劑量不能誘生初級 (primary)免疫應答。2000年美國powerject疫苗公司(12), 用基因槍轟擊皮膚方法接種編碼hbsag的dna疫苗，劑量1、 2或4 mg/次，共3次，每劑量組4位志愿者，結果每位志 愿者均產

11、生了保護水平的抗體(至少10 miu/m 1)和cd+4、 cd+8t細胞免疫應答，且t細胞免疫應答主要表現為thl型, 尤其在hla a2陽性志愿者能誘生強的表位（hbsag 335 343）特異性ctl反應，說明dna疫苗具有可靠的安全 性，被接種者能較好耐受。但是dna疫苗應用于較大體重的 動物時，要求質粒的有效劑量也越大，而且，抗體持續(xù)時間 短暫，可見dna疫苗對大型動物的免疫效果尚不理想。1.2.2多價核酸疫苗 無論是同種多價核酸疫苗 （如hbv hcv dna疫苗13）還是異種多價核酸疫苗（如 hbv hiv dna疫苗（14）都能在大動物水平上產生針對不 同病毒的較高滴度抗體，但

12、效價不如蛋白疫苗高（15l同 時還可誘導以ctl為主、thl為輔的細胞免疫，這對擴大免 疫范圍，減少免疫次數，發(fā)展多價dna疫苗，具有良好的研 究和應用前景。由于質粒dna可在體內長期穩(wěn)定地表達抗原 蛋白，所以用這種將多病毒抗原構建在一個質粒中的嵌合載 體技術來研制多效價疫苗有著巨大的經濟和社會效益。但它 也有不足，由于dna疫苗的實驗多來自動物，用于人體的安 全性（疫苗的dna可與宿主基因組整合而誘發(fā)抑制癌基因的 滅活和原癌基因的活化，注射疫苗后機體可產生抗dna抗體 和自身抗體，誘導機體產生特異的免疫耐受和潛在對感染肝 細胞強烈的細胞毒反應）和有效性需要進一步深入研究。此 外，dna免疫經

13、肌肉注射所需的dna量大，免疫注射技術要 求嚴格。1.3其他利用病毒載體如牛痘活腺病毒表達iibsag 接種黑猩猩的實驗提示，其誘導產生的抗體效價明顯低于亞 單位疫苗。vical公司使用帶有hbcag基因的重組逆轉錄病 毒注入hbv持續(xù)感染的黑猩猩體內，能在肝細胞表面表達 hbcag并誘導產生hbcag特異的ctl,但同時并未發(fā)生hbv 標志的變化。2免疫途徑接種方式包括皮內注射和肌肉注射兩種途徑。dna疫 苗應用時使用的基因槍，是種無針頭的皮膚粉末推注器。在 氮氣沖擊下，可將hbv dna疫苗無痛注入皮內。黏附在顯微 金粉顆粒上的hbv dna質粒在表皮細胞內和金粉分離，表達 目的抗原。此法

14、可大大節(jié)省dna疫苗的接種劑量，而且皮內 注射的免疫途徑能誘生更強的hbv特異性免疫應答。這是由 于樹突狀細胞在皮膚組織中分布密度高，更有利于抗原的攝 取和呈遞。但存在需特殊設備、難于推廣等缺陷。raz等（16 報道，直接給小鼠經皮內注射編碼流感病毒核蛋白基因的質 粒dna,可誘生能持續(xù)大于6870 w的抗核蛋白特異性抗體 和ctl。而皮上劃痕法效果較差，可能與操作中dna量不易 控制有關。如能進一步證實皮內直接接種可誘發(fā)持久有效的 保護性免疫應答，則有可能通過皮內或皮下注射等常規(guī)途徑 進行dna疫苗接種，使dna疫苗更易于被接受和推廣。3結語乙型肝炎是由乙肝病毒引起的疾病，主要危害在于感 染

15、后變?yōu)槁愿窝谆虿《緮y帶者，對此類患者目前尚缺乏有 效的治療方法，故常導致患者病情遷延不愈，部分患者發(fā)展 為肝硬化甚至肝癌(hcc) 17)。乙肝治療性疫苗具有費用 低、安全、療效好等的特點，從發(fā)展趨勢來看，乙肝治療性 疫苗將成為本世紀對慢性hbv攜帶者治療研究領域的熱點。 但是這些新型乙肝疫苗大多處于研究階段，雖各有優(yōu)點，但 也存在一些問題。如dna疫苗能誘導強烈的細胞和體液免疫 應答，可打破特異性ctl耐受，但其安全性和標準化問題尚 待深入研究。多表位基因疫苗或多表位短肽疫苗為多價疫苗 研究提供了新的途徑，并以獨特優(yōu)點成為疫苗研究新的熱 點，可能有新的突破點，但在表位選擇、疫苗設計等領域尚

16、 處于探索階段，無成熟的理論，且需克服表位疫苗固有的免 疫原性弱的缺陷?！緟⒖嘉墨I】1 pol s, nalpas b, driss f, et al. efficacy and limitations of a specific immunotherapy in chronic hepatitis b (jj hepatol,2001；34:91721.2 dikici b, bosnak m, ucmak h, et al. failure of therapeutic vaccination using hepatitis b surface anti gen vaccine in th

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