IL-27轉染人食管鱗癌細胞抗腫瘤效應及其機理研究PPT課件

1、IL-27IL-27轉染人食管鱗癌細胞抗腫瘤轉染人食管鱗癌細胞抗腫瘤效應及其機理研究效應及其機理研究河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院 科研中心科研中心河北省腫瘤研究所河北省腫瘤研究所劉麗華劉麗華 v我我國是食管癌的高發(fā)區(qū)，世界上約國是食管癌的高發(fā)區(qū)，世界上約50%的食的食管癌發(fā)生在中國，到醫(yī)院就診的患者中管癌發(fā)生在中國，到醫(yī)院就診的患者中95%為中晚期。為中晚期。v盡管通過手術、化療和放療使食管癌的生存盡管通過手術、化療和放療使食管癌的生存率得到很大提高，平均率得到很大提高，平均5年生存率仍為年生存率仍為10%。v近年來，腫瘤生物治療受到了人們的關注，近年來，腫瘤生物治療受到了人們的關

2、注，并逐漸成為腫瘤的第四種治療方法。并逐漸成為腫瘤的第四種治療方法。v IL-12 family members：IL-12, IL-23 and IL-27 is primarily produced from activated antigen presenting cells (monocytes, macrophages and dendritic cells) whereas IL-35 is produced by regulatory T cells. These cytokines are all composed of two subunits, a helical subu

3、nit (IL-12p35、IL-23p19、IL-27p28、IL-35p35) and a soluble cytokine receptor-like subunit (IL-12p40、IL-23p40、IL-27EBI3、 IL-35EBI3).引言引言v本研究旨在探本研究旨在探討討IL-27基因轉染對人食管癌基因轉染對人食管癌細胞在裸鼠體內(nèi)的抗腫瘤效應及其對免疫功細胞在裸鼠體內(nèi)的抗腫瘤效應及其對免疫功能的影響，探討其抗腫瘤能的影響，探討其抗腫瘤作用機制作用機制。細胞轉染細胞轉染逆轉錄逆轉錄病毒載體病毒載體( (LXSN/IL-27LXSN/IL-27) ) 2 病毒病毒 PA317

4、polybrene病毒病毒 polybreneEca109Eca109/IL-272/IL-27PA317/IL-27G418G418Eca109/LXSNG418Lipofectamine 方法方法Eca109/IL-27 Eca109/LXSNEca109細胞1107個細胞/只皮下接種腹腔接種成瘤性、生存期成瘤性、生存期腫瘤體積腫瘤體積建立動物模型建立動物模型 （mmmm3 3）長徑長徑短徑短徑2 21/21/2方法方法腫瘤組織腫瘤組織脾脾RNART-PCRT-bet, IL-12Rb b2, TNF-a a, IL-1b b and IL-6 免疫組化免疫組化NKELISAIFN-g g

5、NK殺傷活性殺傷活性LDHIL-27對免疫調(diào)節(jié)作用研究對免疫調(diào)節(jié)作用研究 方法方法 Eca109/IL-27細胞的培養(yǎng)上清中檢測到細胞的培養(yǎng)上清中檢測到IL-27，其含量為，其含量為153.737.0pg/ml。而在。而在Eca109/LXSN細胞和野生型細胞和野生型Eca109細胞的細胞的培養(yǎng)上清中未檢出培養(yǎng)上清中未檢出IL-27。 結果結果蛋白水平鑒定轉染成功蛋白水平鑒定轉染成功Fig.1 Expression of IL-27 EBI3 and p28 gene in different cells dected by RT-PCR. M: DNA marker; A:Eca109/IL

6、-27 cells; B: Eca109/LXSN cells; C: Eca109 cells. 基因水平鑒定轉染成功基因水平鑒定轉染成功EBI3 (706bp)b-actin500bpM A B C M A B CP28 (231bp)500bpb-actin結果結果IL-27基因表達基因表達*Fig.2 Tumors growth in nude mice inoculated subcutaneously with different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P0.01 IL-27對腫瘤

7、生長的影響對腫瘤生長的影響生存期564day543day974day *結果結果Fig.3 Infiltration of NK cells in tumor tissues from nude mice after inoculation with different cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P0.05 Eca109/IL-27 Eca109/LXSN Eca109 12.61.2% * 8.40.9% 7.80.7% IL-27對移植瘤組織對移植瘤組織NK細胞浸潤數(shù)量的影響細胞浸潤數(shù)量的影響結果結果(*

8、(*Fig.5 Cytotoxic activity of spleen cells from nude mice after inoculation different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P0.05 IL-27對荷瘤裸鼠脾細胞免疫功能的影響對荷瘤裸鼠脾細胞免疫功能的影響結果結果*Fig.4 IFN-g production from spleen cells after inoculation different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/L

9、XSN groups respectively, P0.01 Fig.6 Gene expression in tumor tissues after inoculation different tumor cells detected by RT-PCR. A: Eca109; B: Eca109/LXSN; C: Eca109/IL-27IL-27對移植瘤組織中細胞因子表達的影響對移植瘤組織中細胞因子表達的影響結果結果v 本研究結果表明，接種IL-27轉染細胞組裸鼠移植瘤生長緩慢、裸鼠生存期延長，移植瘤組織中仍有IL-27的表達，表明IL-27在裸鼠體內(nèi)產(chǎn)生了抗腫瘤作用。v IL-27受體

10、高表達于NK細胞，因而我們進一步檢測了移植瘤組織中NK細胞浸潤的數(shù)量。結果表明，接種IL-27轉染細胞組移植瘤組織間質中NK細胞浸潤數(shù)量增高，效應分子IFN-g產(chǎn)生增多，殺傷活性增強。說明IL-27不僅可以募集NK細胞而且能夠增強其生物學效應。討論討論v 研究結果顯示接種Eca109/IL-27細胞組移植瘤組織中T-bet和IL-12Rb2基因的表達水平增高。IL-27增強NK細胞產(chǎn)生IFN-g的分子基礎是IL-27與受體結合后活化STAT1，增加轉錄子T-bet表達，進而作用于靶基因促進IL-12Rb2和IFN-g等的轉錄。因此我們在分子水平上證明IL-27能夠促進NK細胞產(chǎn)生IFN-g 。討論討論v 接種Eca109/IL-27細胞組移植瘤組織中Thl類細胞因子TNF-a、IL-1b和IL-6基因的表達亦升高。TN