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1、第二章 克隆技術(shù) 第一節(jié) 什么是克隆克隆就是指無性繁殖系??寺〖夹g(shù)用于分子或細(xì)胞水平時(shí),是獲得目的基因或特定細(xì)胞的技術(shù),用于個(gè)體水平時(shí),是通過無性繁殖產(chǎn)生新個(gè)體的過程或技術(shù)。一、無性繁殖與克隆1相關(guān)概念無性繁殖是一種過程,無性繁殖系是該過程的結(jié)果(形成群體)。(1)無性繁殖:是指只要不通過兩個(gè)分子、兩個(gè)細(xì)胞或兩個(gè)個(gè)體的結(jié)合,只由一個(gè)模板分子、母細(xì)胞或母體直接形成新一代分子、細(xì)胞或個(gè)體,就是無性繁殖。(2)無性繁殖系:個(gè)體通過無性繁殖可連續(xù)傳代并形成群體,這樣的群體稱為無性繁殖系。(3)克隆:指無性繁殖系。(4)克隆技術(shù):指從眾多的基因或細(xì)胞群體中通過無性繁殖和選擇獲得目的基因或特定類型細(xì)胞的技
2、術(shù)。2克隆的類型(1)分子水平上的基因克隆含義:是對(duì)某種目的基因的復(fù)制、分離過程。基因通過細(xì)菌(或細(xì)胞)的分裂,通過dna的復(fù)制而倍增。dna的復(fù)制就是一種克隆。 方法:(2)細(xì)胞水平上的細(xì)胞克隆:雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)含義:骨髓瘤細(xì)胞與b淋巴細(xì)胞的融合產(chǎn)物制備過程:用已免疫的效應(yīng)b細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞雜交獲得三種融合細(xì)胞:b細(xì)胞與b細(xì)胞、b細(xì)胞與瘤細(xì)胞、瘤細(xì)胞與瘤細(xì)胞的融合(當(dāng)然還有不能融合的b細(xì)胞和瘤細(xì)胞),然后用選擇培養(yǎng)基篩選獲得雜交瘤細(xì)胞。(3)個(gè)體克隆含義:由母體的特定部位或結(jié)構(gòu)產(chǎn)生新個(gè)體。植物克?。喝珩R鈴薯塊莖、草莓的匍匐莖、玫瑰的插枝等。動(dòng)物克隆:如變形蟲的分裂、水螅出芽、蚯蚓的斷裂等。無
3、性繁殖是不經(jīng)過生殖細(xì)胞的結(jié)合(或根本沒有有性生殖細(xì)胞),由母體直接產(chǎn)生新個(gè)體的生殖方式。原因:細(xì)胞核具有基因組全套遺傳信息,有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。3“克隆”一詞的發(fā)展已移植到生命科學(xué)之外的領(lǐng)域,把任何一個(gè)由原型發(fā)展或制作而來的與原型完全一樣的產(chǎn)物都叫原型克隆。如磁帶的翻錄、文件的拷貝等。二、克隆技術(shù)的發(fā)展1微生物克隆(1)含義:由一個(gè)細(xì)菌分裂(復(fù)制)出和它多個(gè)完全一樣的細(xì)菌而形成的菌落。(2)增殖方式:2n。(3)數(shù)量變化類型:在環(huán)境適宜的條件下,如果所有細(xì)菌個(gè)體都能成活,則個(gè)體數(shù)目呈指數(shù)增長,即“j”型曲線;實(shí)際上受自然界各種生存條件的限制,其增殖能力往往呈現(xiàn)“s”型曲線,任何克隆的大小都
4、是有限的。2遺傳工程克隆(1)轉(zhuǎn)化:目的基因與載體分子重組形成雜合分子,再導(dǎo)入特定的宿主細(xì)胞(如細(xì)菌)的導(dǎo)入過程。如dna克隆。(2)結(jié)果:復(fù)制大量dna或基因。3個(gè)體水平上的克隆(1)發(fā)展時(shí)期1986年,英國首次利用核移植從胚胎細(xì)胞克隆羊;20世紀(jì)80年代末,誕生胚胎細(xì)胞克隆兔;1991年,誕生一只胚胎細(xì)胞克隆羊;1993年,通過胚胎細(xì)胞克隆山羊;19951996年,胚胎細(xì)胞克隆牛獲得成功。(2)含義:不通過兩性生殖細(xì)胞的結(jié)合,從一個(gè)單一的細(xì)胞繁殖出生物個(gè)體。(3)克隆的過程(見右圖)。(4)結(jié)果:形成生物個(gè)體。三、克隆的條件1理論條件:細(xì)胞具有發(fā)育全能性。胚胎是有性生殖的產(chǎn)物,因此胚胎細(xì)胞克隆不是真正意義上的動(dòng)物個(gè)體克隆。 2.實(shí)際基本條件 (1)具有包含物種完整基因組的細(xì)胞核的活細(xì)胞(如乳腺上皮細(xì)胞)。(2)能有效調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育的細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)(如去核卵細(xì)胞質(zhì))。(3)完成胚胎發(fā)育的必要的環(huán)境條件(如誘導(dǎo)核質(zhì)重組細(xì)胞生長、分化的實(shí)驗(yàn)條件和懷胎母體的子宮環(huán)境)。6edbc3191f2351dd815ff33d4435f3756edbc3191f2351dd815ff33d4435f3756edbc3191f2351dd815ff33d4435f3756edbc3191f2351dd815f
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