沉降菌監(jiān)測(cè)規(guī)程

1、 沉降菌監(jiān)測(cè)規(guī)程一、目的建立沉降菌監(jiān)測(cè)方法，規(guī)范沉降菌監(jiān)測(cè)操作。二、范圍適用于西廠區(qū)車間潔凈室、無(wú)菌檢查室、陽(yáng)性室、洗衣房、取樣間、微生物室的沉降菌監(jiān)測(cè)。三、職責(zé)檢驗(yàn)中心人員負(fù)責(zé)車間潔凈室、洗衣房、取樣間的采樣工作；負(fù)責(zé)各部分所需的材料準(zhǔn)備、培養(yǎng)、菌落計(jì)數(shù)，以及無(wú)菌檢查室、陽(yáng)性室、微生物室監(jiān)測(cè)的采樣內(nèi)容的執(zhí)行。質(zhì)量中心負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)本規(guī)程執(zhí)行情況的監(jiān)督檢查。四、內(nèi)容：1.儀器與用具1.1 培養(yǎng)皿（90mm）1.2 恒溫培養(yǎng)箱1.3 高壓蒸汽滅菌鍋2.監(jiān)測(cè)程序2.1 將已準(zhǔn)備好的合格的空白培養(yǎng)皿放入物料緩沖間。2.2 檢測(cè)人員按人員進(jìn)入潔凈區(qū)的要求穿好潔凈服，戴好口罩進(jìn)入潔凈室。2.3 按此沉降菌監(jiān)

2、測(cè)規(guī)程（西廠區(qū)）對(duì)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測(cè)。3.測(cè)試規(guī)則3.1測(cè)試條件3.1.1溫度和相對(duì)濕度沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈室（區(qū)）的溫度和相對(duì)濕度應(yīng)與生產(chǎn)工藝等要求相適應(yīng)（溫度控制在1826，相對(duì)濕度控制在45%65%之間）。3.1.2壓差沉降菌測(cè)試前，潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間、不同級(jí)別潔凈室（區(qū)）之間的壓差應(yīng)當(dāng)不低于10帕斯卡，空氣潔凈度級(jí)別要求高的潔凈室（區(qū)）對(duì)相鄰的空氣潔凈級(jí)別低的潔凈室（區(qū)）一般要求相對(duì)正壓。3.1.3換氣次數(shù)、空氣流速潔 凈 級(jí) 別換 氣 次 數(shù)（風(fēng) 速）A級(jí)0.36-0.54m/sC 級(jí)25次/hD級(jí)15次/h3.2測(cè)試狀態(tài)靜態(tài)測(cè)試：靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人。動(dòng)態(tài)測(cè)試：潔凈

3、室（區(qū)）已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)下進(jìn)行的測(cè)試。測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，測(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。（在正常的生產(chǎn)操作監(jiān)測(cè)外，可在系統(tǒng)驗(yàn)證、清潔或消毒等操作完成后增加微生物監(jiān)測(cè)。）3.3測(cè)試時(shí)間3.3.1對(duì)單向流，如C級(jí)背景下的局部A級(jí)凈化房間及層流工作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開(kāi)始。3.3.2 對(duì)非單向流，如C級(jí)、D級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開(kāi)始。3.4測(cè)試方法采用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來(lái)判

4、定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。3.4.1采樣方法靜態(tài)：將已制備好的培養(yǎng)皿按4項(xiàng)的要求及采樣點(diǎn)平面圖逐個(gè)放置，然后從里到外逐個(gè)打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中0.5h后，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上。動(dòng)態(tài)：將已制備好的培養(yǎng)皿按4項(xiàng)的要求及采樣點(diǎn)平面圖逐個(gè)放置，然后從里到外逐個(gè)打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中4h后，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上。動(dòng)態(tài)取樣應(yīng)當(dāng)避免對(duì)潔凈區(qū)造成不良影響。3.4.2培養(yǎng)3.4.2.1全部采樣結(jié)束后,將培養(yǎng)皿倒置于3035恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于72h。3.4.2.2用于檢測(cè)的培養(yǎng)皿應(yīng)經(jīng)過(guò)預(yù)培養(yǎng)合格后使用，為避免運(yùn)輸過(guò)程造成影響，在每次取樣時(shí)，取3個(gè)

5、培養(yǎng)皿與其他采樣皿同法操作但不暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿同時(shí)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。3.4.3菌落計(jì)數(shù)3.4.3.1用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用510倍放大鏡檢查是否有遺漏。3.4.3.2若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。3.5 測(cè)試人員要求測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人。4.采樣點(diǎn)數(shù)目及布置4.1采樣次數(shù)每個(gè)采樣點(diǎn)一般取樣一次。4.2最少采樣點(diǎn)數(shù)目參照表：面 積（m2）潔 凈 度 級(jí) 別A級(jí)C級(jí)D級(jí)102322102042220408224010016421002004010320

6、0400802064001604013注：表中的面積，對(duì)于單向流潔凈室，是指送風(fēng)面面積。對(duì)于非單向流潔凈室是指房間的面積。4.3潔凈區(qū)灌裝間、配制間的沉降菌取樣點(diǎn)監(jiān)測(cè)位置根據(jù)沉降菌取樣風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告確定。不能確定的點(diǎn)根據(jù)GB/T 16294-2010和2010版GMP附錄要求均勻分布沉降菌的取樣監(jiān)控點(diǎn)，具體分布規(guī)則如下：注： 為采樣點(diǎn)4.4工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.81.5m左右（略高于工作面）?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。4.5 最少培養(yǎng)皿數(shù) 滿足最少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。潔凈度級(jí)別所需培養(yǎng)皿數(shù)（90mm）（靜態(tài)以沉降0.5h計(jì)，動(dòng)態(tài)以沉降4h計(jì)。）A級(jí)14C級(jí)2

7、D級(jí)25.監(jiān)測(cè)頻率表1：監(jiān)測(cè)頻次一車間二車間三車間六車間無(wú)菌室微生物室陽(yáng)性室取樣間洗衣房周測(cè)（動(dòng)態(tài)）灌裝間A級(jí)區(qū)； 灌裝間C級(jí)區(qū)；配制間；物料稱量間；男/女二更。灌裝間A級(jí)區(qū)；灌裝間C級(jí)區(qū)；配制間；物料稱量間；男女二更。灌裝間A級(jí)區(qū)；灌裝間C級(jí)區(qū)；配制一室；配制二室。灌裝間A級(jí)區(qū)；灌裝間C級(jí)區(qū)；配制間無(wú)菌室所有房間微生物室所有房間陽(yáng)性室所有房間取樣間所有房間一二車間潔凈洗衣房每三個(gè)月動(dòng)態(tài)測(cè)試一次。三車間潔凈洗衣房在生產(chǎn)潔凈區(qū)，故每月動(dòng)態(tài)測(cè)試一次。月測(cè)（動(dòng)態(tài)）潔凈區(qū)所有房間潔凈區(qū)所有房間潔凈區(qū)所有房間潔凈區(qū)所有房間5.1 車間恢復(fù)生產(chǎn)前進(jìn)行沉降菌監(jiān)測(cè)時(shí)，對(duì)所有潔凈區(qū)房間進(jìn)行靜態(tài)測(cè)試。5.2采樣點(diǎn)

8、見(jiàn)附件,監(jiān)測(cè)結(jié)果記錄于相應(yīng)的沉降菌監(jiān)測(cè)記錄中，記錄應(yīng)包括：房間溫度、相對(duì)濕度、壓差及測(cè)試狀態(tài)等項(xiàng)目。6.結(jié)果計(jì)算6.1用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。6.2平均菌落數(shù)的計(jì)算，見(jiàn)下式：M1+M2+Mn平均菌落數(shù) M = _ n 式中：M 平均菌落數(shù)； M1 1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)； M2 2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)； Mn n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù) n 培養(yǎng)皿總數(shù)。 7.結(jié)果評(píng)定用平均菌落數(shù)判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。7.1每個(gè)測(cè)點(diǎn)的平均菌落數(shù)不得超過(guò)所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。7.2 若某個(gè)測(cè)點(diǎn)的平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先進(jìn)行消毒，然后重新連續(xù)采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均須合格。8.合格標(biāo)準(zhǔn)和糾偏限、警戒限8.

9、1合格標(biāo)準(zhǔn)潔凈級(jí)別靜態(tài)（在空氣中暴露0.5h）動(dòng)態(tài)(在空氣中暴露4h)微生物最大允許數(shù)微生物最大允許數(shù)沉降菌（CFU/皿）沉降菌（CFU/皿）A級(jí)11C級(jí)350D級(jí)10（1）表中各數(shù)值均為平均值。（2）單個(gè)沉降碟的暴露時(shí)間可以少于4小時(shí)，同一位置可使用多個(gè)沉降碟連續(xù)進(jìn)行監(jiān)測(cè),并累積計(jì)數(shù)。(即：同一位置多個(gè)沉降碟監(jiān)測(cè)的時(shí)間總和符合要求,靜態(tài)要求：各沉降碟暴露時(shí)間總和為0.5h；動(dòng)態(tài)要求：各沉降碟暴露時(shí)間總和為4h。) 8.2 糾偏限和警戒限項(xiàng)目沉降菌糾偏限A級(jí)(動(dòng)態(tài))1cfu/4小時(shí)C級(jí)(動(dòng)態(tài))20cfu/4小時(shí)（一車間灌裝間為10 cfu/4小時(shí)，二車間灌裝間為6cfu/4小時(shí)）警戒限C級(jí)(動(dòng)

10、態(tài))一車間灌裝間為8 cfu/4小時(shí)，二車間灌裝間為5cfu/4小時(shí)9.不合格處理程序若沉降菌檢測(cè)不符合要求，檢驗(yàn)人員將檢測(cè)結(jié)果反饋相關(guān)部門(mén)進(jìn)行原因分析并采取必要措施整改，按照偏差處理規(guī)程處理。10.相關(guān)文件 偏差處理規(guī)程（Q/HR GL04010）11.變更歷史版本號(hào)變更原因及內(nèi)容執(zhí)行日期修訂人A新文件下發(fā) 2013.03.04姚盛凱B增加微生物室沉降菌監(jiān)測(cè)內(nèi)容2013.06.03姚盛凱C增加六車間沉降菌檢測(cè)內(nèi)容2013.9.24姚盛凱12.附件附件1：一車間沉降菌采樣點(diǎn)房 間 名 稱房 間面積（m2）位置采樣點(diǎn)數(shù)培養(yǎng)皿數(shù)月測(cè)周測(cè)C級(jí)化驗(yàn)室1222322原料緩沖間1021122物料暫存間33

11、22物料稱量室10312222包材儲(chǔ)存室1052222氣閘室106722清潔室107722活性炭稱量室1081822清洗室1092922男二更（穿潔凈衣）11412222女二更（穿潔凈衣）11212222配件室121322二更緩沖間115222潔凈走廊1161621010辦公室1358221503線配制室11751投料處411331503線灌封間118105內(nèi)包材暫存處1011門(mén)口附近的回風(fēng)口11881504線稀配間12452投料處411331504線濃配間12552投料處411331504線灌封間13190內(nèi)包材暫存處411門(mén)口附近的回風(fēng)口11221507線配制間12635投料處211111

12、505/1506線灌封間12724內(nèi)包材暫存處211門(mén)口附近的回風(fēng)口111507線灌封間12838內(nèi)包材暫存處211門(mén)口附近的回風(fēng)口11辦公室135822A級(jí)1503線灌封間11816灌裝頭444口蓋軌道口蓋震蕩筐44口管震蕩筐口管軌道44221504線灌封間13112.1灌裝頭444加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐44加軟管工位44221505/1506線灌封間1276.29灌裝頭444加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐44加軟管工位44221507線灌封間12813.77灌裝頭444加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐44加軟管工位4422陰性對(duì)照33為保證碟子數(shù)目及監(jiān)測(cè)及時(shí)，每次監(jiān)測(cè)時(shí)碟子多取3個(gè)33總計(jì)：13210

13、0備注：微生物室采樣點(diǎn)房間名稱面積（m2）采樣點(diǎn)數(shù)培養(yǎng)皿數(shù)C級(jí)更衣一室3.2022更衣二室3.5222緩沖間2.8822微生物一室6.9622微生物二室10.2022A級(jí)超凈工作臺(tái)（一）（微）1.05214超凈工作臺(tái)（二）（微）1.05214陰性對(duì)照3培養(yǎng)皿總數(shù)41J/HR GC03265 B 一車間沉降菌監(jiān)測(cè)記錄(一)日期： 取樣人： 培養(yǎng)基批號(hào)： 培養(yǎng)箱編號(hào)： 放置時(shí)間： 取出時(shí)間 ： 監(jiān)測(cè)項(xiàng)目取樣區(qū)（點(diǎn)）位置編號(hào)結(jié)果觀察取樣時(shí)間監(jiān)測(cè)結(jié)果合格標(biāo)準(zhǔn)房間溫濕度、壓差1d2d3dA級(jí)沉降菌1181503線灌封間灌裝頭靜態(tài)：1CFU/皿動(dòng)態(tài)：1CFU/皿（90mm）-口管震蕩筐 口管軌道口蓋震蕩筐

14、 口蓋軌道 1311504線灌封間灌裝頭-加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐加軟管工位 1271505/1506線灌封間灌裝頭-加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐加軟管工位 1281507線灌封間灌裝頭-加藥塞震蕩筐輸液塞震蕩筐加軟管工位 無(wú)菌室沉降菌監(jiān)測(cè)記錄取樣日期： 取樣人： 培養(yǎng)基批號(hào)： 培養(yǎng)箱編號(hào)： 放置時(shí)間： 取出時(shí)間：監(jiān)測(cè)項(xiàng)目取樣區(qū)（點(diǎn)）編號(hào)結(jié)果觀察取樣時(shí)間監(jiān)測(cè)結(jié)果合格標(biāo)準(zhǔn)房間溫濕度、相對(duì)壓差1d2d3dA級(jí)超凈工作臺(tái)（一）（微）1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14靜態(tài)：1CFU/皿動(dòng)態(tài)：1CFU/皿（90mm） -超凈工作臺(tái)（二）（微）15 16 17 18 19 20

15、21 22 23 24 25 26 27 28 -超凈工作臺(tái)（一）（無(wú)）29 30 31 32 33 34 3536 37 38 39 40 41 42 -超凈工作臺(tái)（二）（無(wú)）43 44 45 46 47 48 4950 51 52 53 54 55 56 -超凈工作臺(tái)（三）（無(wú)）57 58 59 60 61 62 6364 65 66 67 68 69 70 -超凈工作臺(tái)（四）（無(wú)）71 72 73 74 75 76 7778 79 80 81 82 83 84 -C級(jí)微生物一室85 86靜態(tài)：3CFU/皿動(dòng)態(tài)：50CFU/皿（90mm）微生物二室87 88無(wú)菌一室89 90無(wú)菌二室91 92無(wú)菌三室93 94無(wú)菌四室95 96緩沖二97 98緩沖二（無(wú)菌室）99 100D級(jí)緩沖一101 102靜態(tài)：10CFU/皿陰性對(duì)照陰性-1 陰性-2 陰性-3無(wú)菌生長(zhǎng)測(cè)試狀態(tài)：靜態(tài)0.5h 動(dòng)態(tài)4h 監(jiān)測(cè)時(shí)間： 結(jié)束時(shí)間：監(jiān)測(cè)人： 復(fù)核人： 日期：結(jié)論： 評(píng)價(jià)人： 日期： 微生物室沉降菌監(jiān)測(cè)記錄取樣日期： 取樣人： 培養(yǎng)基批號(hào)： 培養(yǎng)箱編號(hào)： 放置時(shí)間： 取出時(shí)間監(jiān)測(cè)項(xiàng)目取樣區(qū)（點(diǎn)）編號(hào)結(jié)果觀察取樣時(shí)間監(jiān)測(cè)結(jié)果合格標(biāo)準(zhǔn)房間溫濕度、相對(duì)壓差1d2d3dA級(jí)超凈工作臺(tái)（一）（微）1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1