動物細胞工程常用的技術手段.

1、編輯ppt1編輯ppt2動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養(yǎng)、動物細胞培養(yǎng)、 動物細胞核移植、動物細胞核移植、動物細胞融合、動物細胞融合、 單克隆抗體單克隆抗體動物細胞培養(yǎng)技術動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎。是其他動物細胞工程技術的基礎。提問：提問：v植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng), 植物體細胞雜交植物體細胞雜交編輯ppt3動物細胞培養(yǎng)和核移植技術動物細胞培養(yǎng)和核移植技術 動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相關的組織，動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后，放

2、在適宜的培養(yǎng)基將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。中，讓這些細胞生長和增殖。1、選材：、選材： 動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。程度低，容易培養(yǎng)。編輯ppt4v在進行動物細胞培養(yǎng)時，用在進行動物細胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶胰蛋白酶分散分散細胞，說明細胞間的物質主要是細胞，說明細胞間的物質主要是蛋白質蛋白質。動。動物細胞培養(yǎng)適宜的物細胞培養(yǎng)適宜的PH為為7.27.4，此環(huán)境下，此環(huán)境下胃蛋白酶（胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶）沒有活性，而胰蛋白酶

3、(7.2-8.4)的活性較高。的活性較高。2.分散成單個細胞分散成單個細胞編輯ppt53.動物細胞生長特性動物細胞生長特性： 細胞貼壁：細胞貼壁： 懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。稱為細胞貼壁。要求：要求： 培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內表面光滑、無毒、易于貼培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內表面光滑、無毒、易于貼附。附。細胞的接觸抑制細胞的接觸抑制： 當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。制。 編輯ppt64.4.過程：過程：編輯ppt7

4、細胞細胞懸浮懸浮液液1010代代細胞細胞5050代代細胞細胞無限傳無限傳代代原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞株細胞系細胞系5.5.如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細胞株和細胞系？如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細胞株和細胞系？多數(shù)組織細胞固定在表面多數(shù)組織細胞固定在表面生長和分裂。生長和分裂。隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖遺傳物質改變遺傳物質改變編輯ppt8動物動物胚胎胚胎或或幼齡幼齡動動物的組織、器官物的組織、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎單個細胞單個細胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液制成制成細胞細胞懸浮懸浮液液細胞株細胞株細胞系細胞系細胞增值細胞增值無限傳代無限傳代去掉

5、組織去掉組織間蛋白間蛋白動物細胞培養(yǎng)不能動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體最終培養(yǎng)成生物體編輯ppt9動物細胞培養(yǎng)條件：動物細胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）3、溫度和、溫度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.44、氣體環(huán)境：、氣體環(huán)境： O2和和CO2（95%空氣和空氣和5% CO2 ）保證細胞順利的保證細胞順利的生長增殖生長增殖編輯ppt10動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：動物細胞培養(yǎng)液

6、的主要成分：葡萄糖葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和、氨基酸、無機鹽、維生素和動物動物血清血清等。等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1 1）液體培養(yǎng)基）液體培養(yǎng)基（2 2）含有動物血清）含有動物血清動物體細胞大都生動物體細胞大都生活在活在液體液體的環(huán)境的環(huán)境編輯ppt11細胞的全能性細胞的全能性細胞株、細胞系細胞株、細胞系植物體植物體培養(yǎng)結果培養(yǎng)結果獲得細胞獲得細胞或或細胞產物細胞產物快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動物葡萄糖、動物血清血清蔗糖、植物激蔗糖、植物激素素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體

7、培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質培養(yǎng)基性質細胞增殖細胞增殖原理原理動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目比較項目植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較編輯ppt12動物細胞培養(yǎng)應用動物細胞培養(yǎng)應用 大規(guī)模培養(yǎng)生產生物制品（病毒疫苗、干大規(guī)模培養(yǎng)生產生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）擾素、單克隆抗體） 作為基因工程中的受體細胞作為基因工程中的受體細胞 培養(yǎng)的動物細胞可以用于檢測有毒物質，培養(yǎng)的動物細胞可以用于檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性判斷某種物質的毒性 為治療和預防癌癥及其他疾病提供理論依為治療和預防癌癥及其他疾病提供理論依據(jù)據(jù)編輯ppt13二、動物體細胞核移植技

8、術二、動物體細胞核移植技術:將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物稱為克隆動物核移植核移植胚胎細胞核移植胚胎細胞核移植體細胞核移植體細胞核移植（難度高難度高）受體細胞：受體細胞：M期的期的卵母細胞卵母細胞編輯ppt14卵細胞卵細胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細胞乳腺細胞細胞質細胞質細胞核細胞核細胞核移植細胞核移植早期胚胎早期胚胎

9、卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程融合后的卵細胞融合后的卵細胞編輯ppt15克隆動物的研究意義克隆動物的研究意義1. 1.克隆動物作為生物反應器，生產醫(yī)用蛋白克隆動物作為生物反應器，生產醫(yī)用蛋白2. 2.改良動物品種改良動物品種 3. 3.治療人類疾病，作為供體治療人類疾病，作為供體4. 4.保護瀕危動物保護瀕危動物體細胞核移植技術存在的問題：體細胞核移植技術存在的問題：許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調等

10、。器缺陷，免疫失調等。編輯ppt16 1 1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改變的細胞是變的細胞是 - -（ ） A A細胞系細胞系 B B細胞株細胞株 C C原代細胞原代細胞 D D傳代細胞傳代細胞2 2、動物細胞工程技術的基礎是、動物細胞工程技術的基礎是 - -（）（） A.A.動物細胞融合動物細胞融合 B.B.單克隆抗體單克隆抗體 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)AD編輯ppt173 3、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因或出生不久的

11、幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞是這樣的組織細胞 （ ） A.A.容易產生各種變異容易產生各種變異 B B具有更強的全能性具有更強的全能性 C.C.取材十分方便取材十分方便 D D分裂增殖的能力強分裂增殖的能力強D編輯ppt18 4. 4.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于-（ ） A.A.培養(yǎng)基不同；培養(yǎng)基不同； B.B.動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行；動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行； C.C.動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能；動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能； D.D.動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培動物細

12、胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培 養(yǎng)成植株。養(yǎng)成植株。A編輯ppt19植物體細胞雜交的意義：植物體細胞雜交的意義：打破生殖隔離，克服遠緣雜交不親和的障礙，打破生殖隔離，克服遠緣雜交不親和的障礙，培育作物新品種培育作物新品種編輯ppt201.1.過程：過程：誘導方式誘導方式物理法物理法化學法化學法生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒仙臺病毒仙臺病毒紫外線紫外線喪失感染性喪失感染性（不感染細胞）（不感染細胞）保留融合活性保留融合活性 （誘導細胞融合）（誘導細胞融合）編輯ppt211.1.過程：過程：滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜被病毒顆粒穿通細

13、胞膜連接細胞膜連接細胞融合，形成雜種細胞細胞融合，形成雜種細胞（細胞膜具有一定的流動性）（細胞膜具有一定的流動性）編輯ppt221.其由何種細胞產生？其由何種細胞產生？2.主要分布在哪里？主要分布在哪里？3.如何得到抗體？如何得到抗體？提提問問？編輯ppt23 抗體抗體1 1?？乖乖?動物體內動物體內刺激刺激效應效應B 抗原抗原 動物體內動物體內刺激刺激效應效應B 抗體抗體抗原不純抗原不純抗體不純抗體不純篩選單一效應篩選單一效應B細胞細胞不能增值產生大量抗體不能增值產生大量抗體2 2。特異性差、純度低；。特異性差、純度低； 產量低、反應不夠靈敏產量低、反應不夠靈敏編輯ppt24設計方案：設計

14、方案：一個一個B B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體淋巴細胞只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞能無限增殖小鼠骨髓瘤細胞能無限增殖- -化學性質單一、特異性強的抗體?；瘜W性質單一、特異性強的抗體。雜種細胞雜種細胞編輯ppt25 ？ ？誘導其融合的誘導其融合的方法有哪些？方法有哪些？ 抗原抗原 效應效應B細胞細胞2.2.制備過程：制備過程：編輯ppt26B BB B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤細胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細胞細胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細胞篩選雜種篩選雜種細胞細胞已知細胞合成已知細胞合成DNA有有D和和S兩條途徑，其中兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細

15、胞中有這兩條兩條DNA合成途徑，但一般不分裂增值。鼠合成途徑，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂途徑，但能不斷分裂增值，將這兩種細胞在試管中混合，加增值，將這兩種細胞在試管中混合，加PEG促融，獲得雜種細胞。促融，獲得雜種細胞。編輯ppt27主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株用途用途物理、化學方法物理、化學方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振動動、電刺激）電刺激）化學（聚乙二醇）化學（聚乙二醇）誘導方法誘導方法使細胞分散后誘使細胞分散后誘導細胞融合導細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁后

16、誘導原生質體融合導原生質體融合細胞融合的方法細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、植物細胞全能性植物細胞全能性原理原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交比較項目比較項目植物、動物細胞融合的比較植物、動物細胞融合的比較編輯ppt28除通過雜交瘤細胞產生單克隆除通過雜交瘤細胞產生單克隆抗體外，還有什么方法？抗體外，還有什么方法？編輯ppt293. 3.單克隆抗體的應用：單克隆抗體的應用： 在基礎理論研究中具有重要意義在基礎理論研究中具有重要意義 在疾病診斷、治療和預防方面，具有在疾病診斷、治療和預防方面，具有特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。特異性高

17、、靈敏度高等優(yōu)越性。生物導彈生物導彈編輯ppt30一種誘導細胞融合的新方法一種誘導細胞融合的新方法一種新細胞一種新細胞滅活病毒滅活病毒雜交瘤細胞雜交瘤細胞一個優(yōu)勢一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性強、單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢靈敏度高的優(yōu)勢編輯ppt31多莉與多莉與“母親母親”編輯ppt32卵細胞卵細胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細胞乳腺細胞細胞質細胞質細胞核細胞核細胞核移植細胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程融合后的卵細胞融合后的卵細胞編輯ppt33克隆動物的研究意義克隆動物的研究意義1. 1.用于

18、生物學和醫(yī)學研究的實驗動物用于生物學和醫(yī)學研究的實驗動物2. 2.改良動物品種改良動物品種 3. 3.治療人類疾病治療人類疾病4.4.保護瀕危動物保護瀕危動物編輯ppt346. 6.世界上第一只克隆綿羊世界上第一只克隆綿羊“多莉多莉”的培育等程序如圖所的培育等程序如圖所示。請仔細看圖后回答問題：示。請仔細看圖后回答問題：黑面綿羊去黑面綿羊去核卵細胞核卵細胞白面綿羊卵白面綿羊卵腺細胞核腺細胞核重組細胞重組細胞早期胚胎早期胚胎另一頭母綿羊子宮另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生寫出寫出 、所指的細胞工程、所指的細胞工程各稱：各稱：。實施細胞工程時，所需的實施細胞工程時，

19、所需的受體細胞大多采用動物卵細胞受體細胞大多采用動物卵細胞的原因是的原因是： 。多莉面部的毛色是多莉面部的毛色是 ，判斷依據(jù)：判斷依據(jù)： 。繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細胞綿羊培育成功，證明動物細胞也具有也具有 。 請舉例說明克隆綿羊培育成請舉例說明克隆綿羊培育成功的實際意義功的實際意義： 。編輯ppt35動物的胚胎移植動物的胚胎移植 解決某些妊解決某些妊娠時間長、每胎娠時間長、每胎產子數(shù)量少的優(yōu)產子數(shù)量少的優(yōu)良種畜的繁殖速良種畜的繁殖速度問題。度問題。編輯ppt361 1、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，

20、得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產生大量的單克隆抗得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細胞融合的是（體，與骨髓疤細胞融合的是（ ） A.A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B B淋巴細胞淋巴細胞 B.B.沒經(jīng)過免疫的沒經(jīng)過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞C.C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞 D.D.沒經(jīng)過免疫的淋巴細胞沒經(jīng)過免疫的淋巴細胞A編輯ppt372.動物細胞融合的目的中最重要的是動物細胞融合的目的中最重要的是-（ ）A.克服遠緣雜交不親和克服遠緣雜交不親和 B. 制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新品種培育新品種 D.生產雜種細胞生產雜種細胞3.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比

21、較中，正確的是動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是（ ）誘導融合的方法完全相同誘導融合的方法完全相同 B.所用的技術手段基本相同所用的技術手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成雜種細胞都能形成雜種細胞 AD編輯ppt384. 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是-（ ）A.由小鼠能產生抗體的由小鼠能產生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合淋巴細胞與肝細胞融合 B.由小鼠一個由小鼠一個B淋巴細胞誘導融合而成淋巴細胞誘導融合而成 C.由小鼠一個由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導融合而成淋巴細胞與肌瘤細胞誘導融合而成 D.由小鼠一個由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合而成淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合而成 D編輯ppt39編輯ppt401.1.過程：過程：編輯ppt412.2.動物細胞培養(yǎng)技術的應用動物細胞培養(yǎng)技術的應用（1 1）生產蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾）生產蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。素、單克隆抗體等。（3 3）用于檢測有毒物質）用于檢測有毒物質（2 2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。