中藥化學(xué)成分的預(yù)試驗(yàn)檢測(cè)方法匯總

1、中藥化學(xué)成分的預(yù)試驗(yàn)系統(tǒng)預(yù)試法應(yīng)用一些簡(jiǎn)單的定性試驗(yàn)，對(duì)中藥中所含各類化學(xué)成分作全面檢查。單項(xiàng)預(yù)試法根據(jù)需要，有重點(diǎn)的檢查某類成分或某藥效成分。方法：試管反應(yīng)+薄層層析檢查中草藥主要來源于植物。植物的化學(xué)成分較復(fù)雜，有些成分是植物所共有的，如纖維素、蛋白質(zhì)、油脂、淀粉、糖類、色素等。有些成分僅是某些植物所特有的，如生物堿類、甙類、揮發(fā)油、有機(jī)酸、鞣質(zhì)等。 各類化學(xué)成分均具有一定的特性，一般可由藥材的外觀、色、嗅、味等作為初步檢查判斷的手段之一。如藥材樣品折斷后，斷面不油點(diǎn)或擠壓后有油跡者，多含油脂或揮發(fā)油；有粉層的多含淀粉、糖類；嗅之有特殊氣味者，大多含有揮發(fā)油、香豆精、內(nèi)酯；有甜奈者多含糖類

2、；味若者大多含生物堿、甙類、苦味質(zhì)；味酸者含有有機(jī)酸；味澀者多含有鞣質(zhì)等等。 中草藥所含化學(xué)成分均為多類的混合物，分析時(shí)常?；ハ喔蓴_，不易得到正確結(jié)果。因此需根據(jù)中草藥所含各種化學(xué)成分的溶解度、酸堿度、極性等理化性質(zhì)，再用各類成分的鑒別反應(yīng)加以鑒別。 一、 預(yù)試溶液的制備1、 水提取液糖、多糖、有機(jī)酸、皂苷、酚類、鞣質(zhì)、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)2、 乙醇提取液酚類、鞣質(zhì)、有機(jī)酸、香豆素、強(qiáng)心苷、黃酮、蒽醌、甾體3、 5%HCl-乙醇提取液生物堿4、 石油醚提取液甾體、萜類、脂肪油 （一）鑒別注意事項(xiàng) 1根據(jù)各灰成分不同性質(zhì)，選用適宜的溶劑提取，以保證等成分能被提取出來。 2檢品提取液的濃度應(yīng)足以達(dá)

3、到各該反應(yīng)的靈敏度。 3檢品提取液的酸堿度（pH）值應(yīng)不致影響鑒別反應(yīng)中所需要的pH值。相差甚大時(shí)應(yīng)事先調(diào)節(jié)。 4提取液較深時(shí)，常易影響觀察鑒別反應(yīng)的效果，此時(shí)可適當(dāng)稀釋，或進(jìn)一步提純。 5鑒別反應(yīng)時(shí)應(yīng)注意防止多類成分的相互干擾，以免出現(xiàn)假陽性，或顏色不正等情況。最好在化學(xué)鑒別的同時(shí)，做空白試驗(yàn)和對(duì)照試驗(yàn)（用已知含某類成分的中草藥或純品做陽性對(duì)照）。 6在鑒別試驗(yàn)中，如果某一類成分的幾個(gè)鑒別反應(yīng)結(jié)果不一致時(shí)（即有的呈陽性反應(yīng)，有的呈陰性）則應(yīng)進(jìn)行全面分析。首先應(yīng)注意呈陽性反應(yīng)的試驗(yàn)是否屬于該類成分的專一反應(yīng)，否則應(yīng)檢查其他類成分能否產(chǎn)生該反應(yīng)，從多方面加以判斷。但也應(yīng)注意，某些反應(yīng)只能對(duì)某一類

4、成分中的某個(gè)化學(xué)基團(tuán)呈性反應(yīng)，如檢查黃酮類的鹽酸鎂粉試驗(yàn)，它只對(duì)黃酮類中的羥基黃酮類（黃酮醇類）反應(yīng)明顯，其余類的黃酮類則不甚明顯，但也不能輕易否定不是黃酮類，為了避免孤立和片面的下結(jié)論，一定要全面考慮綜合分析。 中草藥化學(xué)成分一般鑒別試驗(yàn)屯只是一個(gè)初步判斷，最后確證尚需進(jìn)一步提純，以鑒定后才能予以肯定。（二）鑒別方法 1、 氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)（1）加熱沉淀試驗(yàn)：加熱煮沸 混濁或沉淀 （蛋白質(zhì)） +5%H2SO4（不加熱）混濁或沉淀（2）雙縮脲反應(yīng)：+40%NaOH，1%CuSO4 紫色、紅色或紫紅色（多肽、蛋白質(zhì)）（3）茚三酮反應(yīng)：+0.2%茚三酮試液 藍(lán)或藍(lán)紫色（氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)）（

5、4）吲哚醌反應(yīng)：+吲哚醌試液 各種顏色（氨基酸）（5）Millon反應(yīng)：+Hg，H2NO2 紅色（蛋白質(zhì)分子中有酪氨酸組成）（6）Hopkins-Cole反應(yīng)：+乙醛酸，濃硫酸 各色（蛋白質(zhì)分子中有色氨酸組成）（7）氨基酸的薄層層析檢查：吸附劑硅膠G 展開劑 n-BuOH，n-BuOH：HAc：H2O 顯色劑0.25%茚三酮試液 紫紅色斑點(diǎn) （1）加熱或礦酸試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml于試管中，加熱至沸或加5鹽酸，如發(fā)生混濁或有沉淀示含有水溶性蛋白質(zhì)。 （2）縮二脲試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加10氧化鈉溶液2滴，充分搖勻，逐漸加入硫酸銅試液，隨加搖勻，注意觀察，如呈現(xiàn)紫色或紫紅色示可能含有蛋白

6、質(zhì)和氨基酸。 凡蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵（CONH）者均有此反應(yīng)，能在堿性溶液中與Cu2+生成仙絡(luò)合物，呈現(xiàn)一系列的顏色反應(yīng)，二肽呈藍(lán)色，三肽呈紫色，加肽以上呈紅色，肽鍵越多顏色越紅。 （3）茚三酮試驗(yàn)，取檢品的水溶液1ml，加入茚三酮試液23滴，加熱煮沸45分鐘，待其冷卻，呈現(xiàn)紅色棕色或藍(lán)紫色（蛋白質(zhì)、胨類、肽類及氨基酸）。 氨基酸與茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被還原成仲醇，與所后成的氨及另一分子茚三酮縮合生成有藍(lán)紫色的化合物。 【注】茚三酮試劑主要是多肽和氨基酸的顯色劑，反應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。試劑溶液pH值以57為宜，必要時(shí)可加吡啶數(shù)滴或醋酸鈉調(diào)整。

7、 此反應(yīng)非常靈敏，但有個(gè)別氨基酸不能呈紫色，而呈黃色，如脯氨酸。 （4）氨基酸薄層層析檢出反應(yīng)： 吸附劑：硅膠G。 展開劑：（1）正丁醇：水（1：1）（2）正丁醇：醋酸：水（4：1：5） 顯色劑：0.5茚三酮丙酮溶液，噴霧后于1100烘箱放置5分鐘，顯藍(lán)紫允或紫色。 2、 皂苷（1）泡末試驗(yàn)：振搖 大量持續(xù)性泡末 +0.1M HCl 二管泡末高度相同（三萜皂苷） +0.1M NaOH 堿管高于酸管（甾體皂苷）（2）溶血試驗(yàn)：+2%紅血球懸浮液 溶血（3）LiebermanBurchard反應(yīng)：+醋酐-濃硫酸 紫紅色（三萜皂苷） 黃-紅-紫-污綠（甾體皂苷） （1）泡沫試驗(yàn)：取檢品的水溶液2ml

8、于帶塞試管中，用力振搖3分鐘，即產(chǎn)生持久性蜂窩狀泡沫（維持10分鐘以上），且泡沫量不少于液體體積的13。 【注】常用的增溶劑吐溫、司盤，振搖時(shí)均能產(chǎn)生持久性泡沫，要注意區(qū)別。 （2）溶血試驗(yàn)：取試管4支，分別加入濾液0.25、0.5、0.75 ml，然后依次分別加入生理鹽水2.25、2.0、1.75、1.5 ml，使每一個(gè)試管中的溶液都成為2.5ml, 再將各試管加入2的血細(xì)胞懸液2.5ml，振搖均勻后，同置于370水浴或25270的室溫中注意觀察溶血情況，一般觀察3小時(shí)即可，或先滴紅細(xì)胞于顯微鏡下，然后滴加檢液看血細(xì)胞是否消失。如有溶血現(xiàn)象示正反應(yīng)。 【注】鞣質(zhì)對(duì)血紅細(xì)胞有凝集作用，干擾溶血

9、試驗(yàn)的觀察，應(yīng)事先除去（可用取勝酰胺粉吸附或用明膠沉淀）。 檢液應(yīng)為中性溶液。 （3）醋酐濃硫酸試驗(yàn)（Liebrmann Burchard反應(yīng)）取檢品的水溶液置蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，殘?jiān)尤肷倭勘姿崾谷芙?，再加入醋酐濃硫酸?9：1）試液，呈現(xiàn)紅紫色并變成污色綠色（甾類、三萜類成分或皂甙） （4）區(qū)別甾體皂甙和三萜皂甙：取帶塞試管兩支，各盛檢品的水溶解1 ml，1支加0.1N鹽酸溶液2ml，另一支加0.1N氫氧化鈉溶液2ml用力振搖1分鐘（需左右手交替振搖各半分鐘），觀察兩管泡沫的多少，若兩管泡沫體積相同或酸管多，示含三萜式皂甙；若加堿管泡沫多于加酸管示含甾示含甾體皂甙。 三萜皂甙為酸性皂

10、甙在酸性水溶液中形成較穩(wěn)定的泡沫；甾體皂甙為中性皂甙在堿笥溶液中能形成較穩(wěn)定的泡沫。 濃硫酸、高氯酸、高氯酸-香草醛、濃硫酸-香草醛等的顯色原理主要是使羧基脫水，增加雙鍵結(jié)構(gòu)，再經(jīng)雙鍵位移，雙分子縮合等反應(yīng)生成共軛雙鍵系統(tǒng)，又在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色 3、 糖和苷（1）斐林試劑：+硫酸銅、酒石酸鉀鈉 磚紅色沉淀（還原糖） （）+1%HCl +NaOH 沉淀（苷元） 30min 上清液（+）（多糖、苷）（2）Molish反應(yīng)：+-萘酚-濃硫酸 紫紅色環(huán)（3）銀鏡反應(yīng)：+0.1N硝酸銀、5N氨水 銀褐色（還原糖）（4）薄層層析檢查：吸附劑硅膠G或纖維素 展開劑 n-BuOH：Pd：H2O；1

11、5%HAc顯色劑 苯胺-鄰苯二甲酸 （1）堿性酒石酸銅試液：取檢品的水溶液12ml（如為醇溶液須將醇蒸發(fā)除去），加入堿笥酒石酸銅試液1ml，于沸水浴上加熱5分鐘，產(chǎn)生棕紅色或磚紅色氧化亞銅沉淀，示有還原糖。 還原糖能使二價(jià)銅鹽（藍(lán)色）還原成氧化亞銅，醛糖的醛基氧化成羧基： 【注】如檢液呈酸性，應(yīng)先堿化。 此反應(yīng)所產(chǎn)生的沉淀由于條件不同，其顏色也不同，質(zhì)點(diǎn)上的呈黃色，質(zhì)點(diǎn)大的呈紅色。有保持性膠體存在時(shí)，也常產(chǎn)生黃色沉淀。 職樣品中含有其他醛、酮及還原較強(qiáng)的其他成分，或中劃藥制劑中附加的抗氧劑、；葡萄糖等均可顯陽性反應(yīng)。 （2）萘酚試驗(yàn)（Molisch紫環(huán)反應(yīng)）：取檢品的水溶液1ml，加5萘酚試液

12、數(shù)滴振搖后，沿管壁滴入56滴濃硫酸，使成兩液層，待23分鐘后，兩層液面出現(xiàn)紫紅色環(huán)（糖、多糖或甙類）。 多糖類遇濃硫酸被水解成單糖，單糖被濃硫酸脫水閉環(huán)，形成糠醛類化合物，在濃硫酸存在下與萘酚發(fā)生酚醛縮合反應(yīng)，生成紫紅色縮合物。 【注】甙的分子結(jié)構(gòu)中含有糖基，一般屬于單糖類，如葡萄糖，鼠李糖、半乳糖，但也有含二分子糖（雙糖）或多分子糖（多糖）。在上述反應(yīng)條件下，甙被水解成單糖，因此甙萘酚試驗(yàn)，系分子中糖部分的反應(yīng)。 由于此反應(yīng)較為靈敏，如有微量濾紙纖維或中草藥粉末存在于溶液中，都能產(chǎn)生上述反應(yīng)。故濾過時(shí)應(yīng)加注意。 （3）多糖的確證試驗(yàn)：取檢品的水溶液5ml于水蒸發(fā)至干，加入1ml蒸餾水，再加入

13、乙醇5ml，如出現(xiàn)沉淀，濾過收集后用少量熱乙醇洗滌，再將沉淀物溶于3ml蒸餾水中，做下例試驗(yàn)。 碘試驗(yàn)：取檢品的不溶液1ml，加碘試液1滴，觀察顏色變化，如呈藍(lán)黑色為地衣糖；紫黑色為糊精；藍(lán)色加熱消失，冷后藍(lán)色再現(xiàn)為淀粉。 多糖水解：取檢品的水溶液1ml，加入稀鹽酸5滴，置沸水浴中加熱1015分鐘，然后用10氫氧化鈉液中和至中性，再加新配制的堿性酒石酸銅試淮4滴，另取檢液1ml，不加酸水解直接加入上述試液4滴，兩管同置水浴上煮沸56分鐘。如果水解后生成棕紅色常常物的量比未經(jīng)水解的多，則示有多糖。 多糖水解后產(chǎn)生單糖，利用單糖的還原性，使銅離子還原成氧化亞銅。 4、 酚類和鞣質(zhì)（1）FeCl3試

14、劑：+1%FeCl3試液 藍(lán)、暗綠或藍(lán)紫色（2）三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑：噴灑藍(lán)色斑點(diǎn)（3）香草醛-鹽酸試劑：噴灑 紅色（間苯二酚、間苯三酚）（4）重氮鹽試劑：+對(duì)硝基苯胺、亞硝酸鈉 紅色（5）薄層層析檢查：吸附劑硅膠G或纖維素 展開劑 n-BuOH：HAc：H2O；15%HAc 顯色劑1% FeCl3試液1%三氯化鐵-1%鐵氰化鉀試液 藍(lán)、綠或黑色鞣質(zhì)與酚類的區(qū)別：+明膠 沉淀 上清液 +1%FeCl3試液 藍(lán)、暗綠或藍(lán)紫色 （1）三氯化鐵試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加三氯化鐵試液12滴，呈現(xiàn)綠色、污綠色、藍(lán)黑色或暗紫色（可水解鞣質(zhì)顯藍(lán)一藍(lán)黑色，縮合鞣顯綠色一污綠色）。 鞣質(zhì)均是多羥基酚的衍生

15、物，即多元酚，能和三價(jià)鐵離子發(fā)生顏色反應(yīng)生成復(fù)雜的絡(luò)鹽。 【注】此反應(yīng)如遇有礦酸或有機(jī)酸、醋酸鹽等存在，能阻礙顏色的生成。硝基酚類對(duì)三氯化鐵試劑無明顯反應(yīng)。 （2）明膠試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加氯化鈉明溶液23滴，即生成白色沉淀物。 鞣質(zhì)有凝固蛋白的性能。 （3）溴試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加溴試液12滴，生成白色或沉淀物，示可能含有酚或兒茶酚鞣質(zhì)。 【注】過多的溴會(huì)阻礙鞣質(zhì)的沉淀，因此溴水不宜多加。 （4）香草醛一酸試驗(yàn)：取檢品的水溶液點(diǎn)于濾紙片上，干后，噴霧或滴加香草醛一鹽酸試液，呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)（多元酚類物質(zhì)）。 （5）鞣質(zhì)、酚類薄層層析檢出反應(yīng)： 吸附劑：聚酰胺；硅膠；硅膠；石膏：水

16、（5：1：7）調(diào)成狀，涂成薄板，1050烘干45分鐘。 展開劑：乙醇：醋酸（100：2）；正丁醇：乙酸乙酯：水（5：4：1）；苯：甲醇（95：5）。 顯色劑：10三氯化鐵溶液；1三氯化鐵乙醇溶液與1鐵氰化鉀水溶液（1：1）顯藍(lán)一紫色斑點(diǎn)。 5黃酮及其甙類 （1）鹽酸-鎂粉反應(yīng)：+HCl-Mg 紅色（2）三氯化鋁反應(yīng)：+AlCl3 黃色（3）濃氨水反應(yīng)：+NH3 亮黃或橙色（4）薄層層析檢查：吸附劑聚酰胺或硅膠G （1）鹽酸一鎂（或鋅）粉試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液1ml，加放少量鎂粉（或鋅粉），然后加濃鹽酸45滴，置沸水浴中加熱23分鐘，如出現(xiàn)紅色示有游離黃酮類或黃酮甙（以同法不加鎂或粉做一對(duì)照，如

17、兩管都顯紅色則有花色素存在。如繼續(xù)加碳酸試液使成堿笥即變成紫色雙轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，即證明含花色素）。 黃酮類的乙醇溶液，在鹽酸存在的情況下，能被鎂粉還原，生成花色甙元而呈現(xiàn)紅色或紫色反應(yīng)（個(gè)別為淡黃色、橙色、紫色或藍(lán)色）。這是由于酮類化合物分子中含有一個(gè)堿性氧原子，致能溶于稀酸中被還原成帶四價(jià)的氧原子即鋅鹽。本法是鑒別黃酮類的一個(gè)反應(yīng)。但花色素本身在酸性下（不需加鎂粉）呈紅色，應(yīng)加以區(qū)別。 【注】此反慶僅在化學(xué)結(jié)構(gòu)中，第三位上帶羥基的酮醇類顯色較明顯，而其它黃酮烷酮類均不甚明顯。因此試驗(yàn)呈陰性反慶是不能做出否定的結(jié)論，尚需結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)再做結(jié)論。 試驗(yàn)應(yīng)在醇中進(jìn)行，水分多會(huì)影響顏色的生成。此反慶較慢，

18、有時(shí)需置水浴上加熱，以促使反應(yīng)的進(jìn)行。 （2）熒光試驗(yàn)： 三氯化鋁試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液點(diǎn)于濾紙片上（干后再點(diǎn)1次，使其濃度庥中），干后，噴霧1三氯化鋁乙醇試液，在紫外光燈下觀察，呈現(xiàn)黃色、綠色、橙色等熒光為黃酮類；呈現(xiàn)天藍(lán)色或黃綠色；熒光，則為二氫黃酮類。這是區(qū)別二氫黃酮類化合物的一種鑒別反應(yīng)。 硼酸丙酮枸櫞酸丙酮試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液1ml，在沸水浴上蒸干加入飽和硼酸丙酮溶液及10枸櫞酸丙酮溶液各0.5ml，蒸去丙酮后，在紫外光燈下觀察，管內(nèi)呈現(xiàn)強(qiáng)烈的綠色熒光（黃酮或其甙類）。 （3）堿液試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液點(diǎn)于濾紙片上（干后，再點(diǎn)一次，使其溶液集中），干后，噴1碳酸鈉溶液或在氨蒸氣中熏

19、幾分鐘，呈現(xiàn)亮黃、綠或橙黃色。如將氨氣熏過的濾紙露置空氣中，顏色逐漸裉去而變?yōu)樵械念伾S酮或其甙類）。5、 生物堿（1）沉淀反應(yīng)碘化汞鉀試劑 白色或淺黃色沉淀 碘化鉍鉀試劑 橘紅色沉淀 碘碘化鉀試劑 淺棕或暗棕色沉淀 硅鎢酸試劑 淺黃或黃棕色沉淀磷鎢酸試劑 淺黃色沉淀 磷鉬酸試劑 白色或淡黃色沉淀 苦味酸試劑 黃色結(jié)晶或非結(jié)晶形沉淀 鞣酸試劑 棕黃色沉淀 氯化金試劑 黃色結(jié)晶 氯化鉑試劑 白色結(jié)晶雷氏銨鹽 紅色無定形沉淀（2）薄層層析檢查：吸附劑堿性氧化鋁（級(jí)，干法鋪板） 硅膠G（稀堿濕法鋪板） 展開劑氯仿：甲醇 顯色UV；碘化鉍鉀6、 有機(jī)酸（1）PH試紙檢查（2）溴酚蘭試液：噴灑藍(lán)色背

20、景黃色斑點(diǎn)（3）薄層層析檢查：吸附劑硅膠G或酸性氧化鋁 展開劑 C6H6：EtOH 顯色劑0.1%溴酚蘭試液黃色7、甾體（1）LiebermanBurchard反應(yīng)：+醋酐-濃硫酸 黃-紅-紫-污綠（2）氯仿-濃硫酸反應(yīng)：+氯仿-濃硫酸 氯仿層紅或青色 硫酸層綠色熒光（3）五氯化銻或三氯化銻反應(yīng)：+SbCl3或SbCl5 紅色（4）薄層層析檢查：吸附劑中性氧化鋁或硅膠G 展開劑 C6H6-MeOH；CHCl3-MeOH顯色劑 10%磷鉬酸 藍(lán)-藍(lán)紫色5%三氯化銻試液 紅、棕紅或綠色9、香豆素、內(nèi)酯（1）開閉環(huán)反應(yīng)：+1%NaOH澄清 +2%HCl混濁（2）異羥污酸鐵反應(yīng)：+7%鹽酸羥胺、10%KOH +稀HCl