金黃色葡萄球菌

1、金黃色葡萄球菌簡介：金黃色葡萄球菌，也稱“金葡菌”，細(xì)胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)比革蘭氏陰性菌致密，染色時(shí)結(jié)晶紫附著后不被酒精脫色故而呈現(xiàn)紫色，相反，陰性菌的細(xì)胞壁肽聚糖層薄、交聯(lián)度差，脂類含量高，所以紫色復(fù)合物被酒精沖掉然后附著了沙黃的紅色。金黃色葡萄球菌與青霉素的發(fā)現(xiàn)有很大的淵源。研究表明青霉素只對以金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽性菌作用明顯。這也是由肽聚糖層的厚度和結(jié)構(gòu)造成的。新出現(xiàn)的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，被稱作超級細(xì)菌，幾乎能抵抗人類所有的藥物，但是萬古霉素可以對付它。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8m左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌

2、無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C，最適生長pH7.4，干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0.51.0mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在1015%NaCl肉湯中生長?？煞纸馄咸烟?、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對磺胺類藥物、青霉素、紅霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性，原因是由于這些菌株產(chǎn)生青霉

3、素酶等。對堿性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制生長。流行病學(xué)金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的機(jī)會很多。美國疾病控制中心報(bào)告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。 金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)一般有如下特點(diǎn)：季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報(bào)道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位，常成為污染源。金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、

4、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血毒素：外毒素，分、四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死b.殺死白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時(shí)，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C1、C2、C3、D、E及F八種血清型。腸毒素可耐受100

5、6;C煮沸30分鐘而不被破壞。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。f .表皮剝脫毒素：引起燙傷樣皮膚綜合征，又稱剝脫樣皮炎。g.毒性休克綜合征毒素（tsst-1）引發(fā)病癥金黃色葡萄球菌腸炎是金黃色葡萄球菌引起的，多因原發(fā)疾病長期用抗生素引起腸道菌群失調(diào)所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐藥的金黃色葡萄球菌株趁機(jī)繁殖。金黃色葡萄球菌為侵襲性細(xì)菌，能產(chǎn)生毒素，對腸道破壞性大，所以金黃色葡萄球菌腸炎起病急，中毒癥狀嚴(yán)重，主要表現(xiàn)為嘔吐、發(fā)熱、腹瀉。嘔吐常在發(fā)熱前出現(xiàn)，發(fā)熱很高。輕癥大便次數(shù)稍多，為黃綠色糊狀便；重癥大便次數(shù)頻繁，每日可達(dá)數(shù)

6、十次，大便呈暗綠色水樣便，外觀像海水，所以叫海水樣便。粘液多，有腥臭味，有時(shí)可排出片狀偽膜，將偽膜放入生理水，脫落的腸粘膜即漂在水面上，對診斷幫助很大。體液損失多，患兒脫水、電解質(zhì)紊亂和酸中毒嚴(yán)重，可發(fā)生休克。挑選大便粘液部分涂片，在顯微鏡下檢查可見大量膿細(xì)胞，如經(jīng)革蘭氏染色，顯微鏡檢查可見成堆的大量革蘭氏陽性球菌。大便培養(yǎng)金黃色葡萄球菌生長，即可明確診斷。球菌檢驗(yàn)出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗(yàn)金黃色葡萄球菌為陽性。第二，金黃色葡萄球菌腸毒素檢測金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測主要有動物試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附等方法，在此就不一一贅述。預(yù)防感染第一，金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)樣品處理：無菌

7、取25g或25mL食品樣品，放入225mL滅菌生理鹽水中均質(zhì)，制成10-1稀釋液。增菌培養(yǎng)：將10-1稀釋液接入7.5%NaCl肉湯或胰蛋白胨肉湯中，37°C培養(yǎng)24小時(shí)。分離培養(yǎng)：將上述稀釋液或培養(yǎng)液分別劃線血平板和Baird-Parker平板，置37°C培養(yǎng)2448小時(shí)。金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周圍有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落為圓形，直徑23mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶。染色觀察：從平板上挑取可疑性菌落進(jìn)行革蘭氏染色，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列無芽胞、莢膜，直徑0.51m。血漿凝固酶試驗(yàn)

8、：吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌試液浸液肉湯24小時(shí)培養(yǎng)物充分混勻，置36±1°C培養(yǎng)，每隔半小時(shí)觀察一次，連續(xù)觀察6小時(shí)，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時(shí)，內(nèi)容物不流動，判為陽性。同時(shí)做陰陽性對照。耐熱核酸酶試驗(yàn)：將24小時(shí)肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板，36±1°C培養(yǎng)24小時(shí)，在刺種線周圍第一，防止金黃色葡萄球菌污染食品防止帶菌人群對各種食物的污染：定期對生產(chǎn)加工人員進(jìn)行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時(shí)停止其工作或調(diào)

9、換崗位。對肉制品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜尸體應(yīng)除去病變部位，經(jīng)高溫或其他適當(dāng)方式處理后進(jìn)行加工生 產(chǎn)。第二，防止金黃色葡萄球菌腸毒素的生成應(yīng)在低溫和通風(fēng)良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風(fēng)陰涼地方也不應(yīng)超過6小時(shí)，并且食用前要徹底加熱。第三，殺死金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌對熱和干燥的抵抗力較一般無芽胞細(xì)菌強(qiáng)，加熱8030分鐘才被殺死。 物體表面覆蓋一層0.1mg/cm3濃度的超細(xì)tio2在光照條件下可快速有效殺滅。在干燥的膿汁、痰液中可存活23月。5%石炭酸中1015分鐘死亡。對堿性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制其生長。感染處理由于MRSA（

10、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌） 的存在，一般不使用青霉素。所以有金黃色葡萄球菌感染者，可選用：紅霉素、新型青霉素、慶大霉素、萬古霉素或先鋒霉素治療。治療事項(xiàng)1、毛囊炎治療要注意飲食，不要吃辛辣刺激性食物，不能喝酒。2、不可用手搔抓患處，以防繼發(fā)感染。3、待癥狀完全消失以后，鞏固1個療程。限量存在衛(wèi)生部于2011年11月24日公布食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)速凍面米制品（GB192952011）。在幾大速凍品牌食品因檢出金黃色葡萄球菌而下架的背景下，因有條件允許金葡菌限量存在，新國標(biāo)引來議論紛紛。衛(wèi)生部專家稱，新國標(biāo)更加科學(xué)合理，并沒有降低要求。這個新國標(biāo)是根據(jù)食品安全法及其實(shí)施條例規(guī)定，由衛(wèi)生部在原速凍預(yù)包裝

11、面米食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB192952003）實(shí)施基礎(chǔ)上組織制定的，將于2011年12月21日起正式施行。傳播途徑一般來說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴(yán)，運(yùn)輸過程受到污染；奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r(shí)，對肉體其他部位的污染。培養(yǎng)方式甘露醇高鹽瓊脂可用于金黃色葡萄球菌的選擇性分離培養(yǎng)蛋白胨和牛肉粉提供氮源、維生素和生長因子；D甘露醇為可發(fā)酵糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；酚紅為pH指示劑。檢測方法材料與方法1、材料培養(yǎng)基：7

12、.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基，血瓊脂平板培養(yǎng)基（按常規(guī)方法制作）試劑：7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基，革蘭氏染色，血瓊脂平板，Baird-Parker瓊脂平板，生理鹽水，兔血漿（1：4）器材：溫箱，顯微鏡，天平，均質(zhì)器，載玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，試管及試管架，研磨，1ml注射器，實(shí)驗(yàn)動物：健康的小白鼠2、方法待檢樣品25g+225ml 滅菌生理鹽水直接計(jì)數(shù)法 增菌培養(yǎng)方法Baird-Parker瓊脂平板 7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基血平板 血平板涂片染色鏡 溶血觀察動物接種試驗(yàn) 血漿凝固試驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)步驟1、樣品的采集稱取25g火腿腸，切碎攪勻（用滅菌研缽研磨），置于250ml 錐形瓶中

13、，加入225ml 滅菌生理鹽水，制成1：10樣品混懸液，混勻后作用20分鐘，隨機(jī)取10ml 離心。2、增菌及分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)方法：吸取5ml上清液，接種于7.5%NaCl肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，置于（37±1）恒溫箱中培養(yǎng)24h，劃線接種入血平板，（37±1）恒溫箱中培養(yǎng)24h。直接計(jì)數(shù)方法：吸取上述懸液，進(jìn)行10倍遞增稀釋，根據(jù)樣品污染情況，選擇不同濃度的稀釋液各1ml，分別加入3個Baird-Parker瓊脂平板，每個平板的接種量分別為0.3ml、0.3ml、0.4ml。用滅菌L型涂布棒涂布整個平板，置于（37±1）恒溫箱中培養(yǎng)24h。之后分別對3個平板上生長的周圍有渾

14、濁帶的黑色菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)。轉(zhuǎn)接入血平板，（37±1）恒溫箱中培養(yǎng)24h。3、涂片、染色與鏡檢將純培養(yǎng)的未知菌涂片，革蘭氏染色，顯微鏡觀察。4、生化實(shí)驗(yàn)觸酶試驗(yàn)在載玻片上滴1滴3%的過氧化氫，調(diào)取純化的細(xì)菌放在過氧化氫中觀察變化。30s內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡者為陽性，不產(chǎn)生氣泡者為陰性。血漿凝固酶試驗(yàn)吸取1：4新鮮兔血漿0.5ml，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的2中的肉湯培養(yǎng)液0.5ml，搖蕩均勻，放入（37±1）恒溫箱中培養(yǎng)，每0.5h觀察一次，觀察6h，檢查是否出現(xiàn)凝固。將試管傾斜或倒置時(shí)，呈現(xiàn)凝塊狀，可判定為陽性，同時(shí)以已知陽性葡糖球菌和陰性肉湯作為對照。5、動物感染實(shí)驗(yàn)用無菌

15、生理鹽水將2中血瓊脂板上純化的菌落洗下后，以0.5ml/只腹腔注射入小白鼠體內(nèi)，同時(shí)用滅菌生理鹽水注射入另外的小白鼠體內(nèi)，以做對照，分別在相同條件飼養(yǎng)，觀察其癥狀。對感染試驗(yàn)出現(xiàn)癥狀或死亡的小白鼠進(jìn)行剖檢，并采集病料，進(jìn)行分離。結(jié)果與分析1、培養(yǎng)特性及形態(tài)特征培養(yǎng)特性在37條件下，需氧與厭氧培養(yǎng)的血液營養(yǎng)瓊脂平板均長出光滑、濕潤、隆起，約1mm大小的金黃色菌落，并且有溶血現(xiàn)象。鏡檢結(jié)果顯微鏡下觀察該菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄串狀，也有個別2個或3個球菌相連。根據(jù)菌落形態(tài)、鏡檢結(jié)果懷疑該菌為葡萄球菌。2、菌落計(jì)數(shù)報(bào)告將直接計(jì)數(shù)法試驗(yàn)中的3個平板中疑似黑色葡萄球菌的金黃色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝

16、固酶試驗(yàn)陽性數(shù)，除以5，在乘以稀釋倍數(shù)，即為每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)量。3、動物感染試驗(yàn)只注生理鹽水的小白鼠沒有任何變化：接種分離菌的小白鼠在9h內(nèi)死亡。將死亡的小白鼠剖檢采集病料，進(jìn)行細(xì)菌分離和生化試驗(yàn)，得到與原分離菌。“金球菌”列為“極重要質(zhì)量項(xiàng)目”金黃色葡萄球菌因思念、三全、灣仔碼頭事件而引發(fā)標(biāo)準(zhǔn)爭議，在2011年12月21日實(shí)施的速凍食品新國標(biāo)中，金黃色葡萄球菌從原來“不得檢出”變?yōu)椤跋蘖繖z出”，但這一檢測標(biāo)準(zhǔn)的改變并不代表可以忽略金黃色葡萄球菌的危害性。在市質(zhì)監(jiān)局征集意見而公示的抽檢項(xiàng)目中查詢到，對包括速凍水餃、湯圓、包子、花卷、饅頭、南瓜餅、八寶飯等在內(nèi)的速凍米面食品，仍然計(jì)劃把金黃色葡萄球菌列入A類檢驗(yàn)項(xiàng)目，并標(biāo)注為“極重要質(zhì)量項(xiàng)目”，同時(shí)速凍米面食品的沙門氏菌也是A類檢驗(yàn)。產(chǎn)品檢出“金球菌”屬嚴(yán)重不合格市質(zhì)監(jiān)局介紹，速凍面米抽檢中，金黃色葡萄球菌也是A類檢驗(yàn)項(xiàng)目。如果食品檢驗(yàn)項(xiàng)目中任一項(xiàng)或一項(xiàng)以上不符合規(guī)定的要求，判定為不合格；當(dāng)產(chǎn)品存在A類項(xiàng)目不合格時(shí)，屬于嚴(yán)重不合格