胞間連絲的觀察

1、實(shí)驗(yàn)一 胞間連絲的觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察植物細(xì)胞間的胞間連絲，進(jìn)一步認(rèn)識細(xì)胞并不是“獨(dú)立王國”，胞間連絲為細(xì)胞間的物質(zhì)運(yùn)輸與信號傳遞起橋梁作用。二、實(shí)驗(yàn)用具：1、器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子等2、材料：紅辣椒、玉米三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、紅辣椒表皮細(xì)胞臨時裝片制作：觀察胞間連絲，剪取一小塊紅辣椒，用小刀小心刮除果肉，留下一層極薄的表皮，置于載玻片上，滴一滴清水，蓋蓋片，吸水后即可。2、玉米籽粒糊粉層臨時裝片制作：玉米籽粒用鑷子剝?nèi)ケ砥ず?，露出糊粉層，制作徒手切片，制作時刀口與糊粉層平行，把切好的薄片置于載玻片上，加一滴清水后蓋片，即可觀察。3、柿子胚乳細(xì)胞永久裝片的觀察。四、注意事項(xiàng)：光線不要

2、太亮五、作業(yè)：1、完成實(shí)驗(yàn)報告，并繪胞間連絲圖。2、胞間連絲屬于哪種細(xì)胞連接，有何生物學(xué)功能？實(shí)驗(yàn)二 植物細(xì)胞原生質(zhì)流動的觀察一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑诨罴?xì)胞中，原生質(zhì)流動是細(xì)胞活力強(qiáng)弱的重要指標(biāo)。通常認(rèn)為，原生質(zhì)流動是原生質(zhì)中微絲肌動蛋白與肌球蛋白相互滑動的結(jié)果，這個過程要消耗能量，也受光照、溫度、滲透壓、機(jī)械損傷等的影響。通過實(shí)驗(yàn)認(rèn)識細(xì)胞原生質(zhì)流動的現(xiàn)象，并了解其影響因素。二、實(shí)驗(yàn)用品：1、材料：黑藻2、器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片等三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、黑藻葉片細(xì)胞質(zhì)流動的觀察取黑藻葉片制作臨時裝片并觀察，注意流速，并記錄。2、用溫水浸泡，再觀察其流動速度有無改變，并記錄。3、用照明燈照射一段時間后再

3、觀察其流動速度有無改變，并記錄。四、作業(yè)：1、如何理解細(xì)胞原生質(zhì)流動的原理？2、細(xì)胞質(zhì)環(huán)流有何特點(diǎn)？3、圖示細(xì)胞質(zhì)環(huán)流。實(shí)驗(yàn)三 動物細(xì)胞線粒體的超活染色與觀察一、實(shí)驗(yàn)原理：活體染色是指對生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無毒害的一種染色方法。線粒體是細(xì)胞進(jìn)行呼吸作用的場所。詹納斯綠B可專一性地對線粒體進(jìn)行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)（即有色狀態(tài)）呈現(xiàn)藍(lán)懸浮綠色，而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原為無色的色基。二、實(shí)驗(yàn)器材：顯微鏡、恒溫水浴鍋等，1%詹納斯綠B三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：（一）線粒體超活染色1、取清潔載玻片放在37恒溫水浴鍋的金屬板上，滴2滴詹納

4、斯綠B染色液。2、用牙簽取口腔上皮細(xì)胞放置于染色液的液滴中，染色15分鐘（注意：染色液不能干燥）蓋片，吸出多余的染色液即可觀察，線粒體為藍(lán)綠色顆?；蚨贪魻畹慕Y(jié)構(gòu)。（二）永久裝片的觀察1、線粒體 2、中心體四、作業(yè)：實(shí)驗(yàn)報告、并繪線粒體形態(tài)圖 實(shí)驗(yàn)四 葉綠體的分離與觀察一、實(shí)驗(yàn)原理：組織勻漿后懸浮在等滲介質(zhì)中進(jìn)行差速離心，是分離細(xì)胞器的常用方法。一個顆粒在離心場中的沉降速率取決于顆粒的大小，形狀和密度，也同離心力以及懸浮介質(zhì)的粘度有關(guān)。在一定的離心場中，同一時間內(nèi)，密度不同，大小不同、沉降速度不同，依次增加離心力和離心時間，能夠使非均一懸浮液中的顆粒按其大小、密度先后分批沉降在離心管底部，分批收

5、集即可獲得各種亞細(xì)胞組分。二、材料與用具：離心機(jī)、組織勻漿器、天平、紗布、菠菜等三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、選取新鮮嫩菠菜葉，洗凈擦干后去除葉脈，稱30g于150ml 0.35mol/LNaCl溶液中裝入研缽搗碎；2、將勻漿用紗布過濾于燒杯中；3、取濾液4ml在1000r/min下離心2分鐘，棄沉淀；4、將上清液在3000r/min下離心5分鐘，棄上清，沉淀即是葉綠體；5、將沉淀用0.35mol/L氯化鈉溶液懸浮。6、取葉綠體懸液制臨時裝片觀察。四、作業(yè)：完成實(shí)驗(yàn)報告，并繪圖。實(shí)驗(yàn)五 細(xì)胞膜的通透性一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、觀察細(xì)胞膜的通透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度。2、了解細(xì)胞膜通透性的一般規(guī)律。二、實(shí)驗(yàn)原理

6、：細(xì)胞膜是一種選擇透過性膜。將紅細(xì)胞放在低滲溶液中，水分子會大量滲到細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞脹破，血紅細(xì)胞釋放到介質(zhì)中，這種現(xiàn)象稱為溶血。將紅細(xì)胞放入含有不同溶質(zhì)的等滲溶液中，由于細(xì)胞膜對各種溶質(zhì)的透性不同，有的溶質(zhì)可以滲入，有的溶質(zhì)則不能滲入，滲入的溶質(zhì)能夠提高紅細(xì)胞的滲透壓，所以促進(jìn)水分進(jìn)入細(xì)胞，隨著水分的不斷進(jìn)入紅細(xì)胞最終破裂，即引起溶血。由于溶質(zhì)透入的速度互不相同，溶血時間也不同。因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時間長短可作為測量物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的一種指標(biāo)。三、實(shí)驗(yàn)用品：剪刀，試管等四、實(shí)驗(yàn)材料：兔血五、實(shí)驗(yàn)步驟：1、制備兔紅細(xì)胞懸液取兔靜脈血20ml（加抗凝劑3.8%檸檬酸鈉），以1份兔血加10份0.

7、17mol/L氯化鈉溶液配制兔紅細(xì)胞懸液。2、低滲溶血的觀察取試管1支，加入3mL蒸餾水，再加入0.5ml紅細(xì)胞懸液，觀察溶液顏色的變化，由不透明逐漸變成紅色澄清，說明紅細(xì)胞發(fā)生破裂造成100%紅細(xì)胞溶血。3、兔紅細(xì)胞的滲透性1）取試管1支，加入0.17mol/l氯化鈉溶液3mL，再加入0.5ml紅細(xì)胞懸液，輕輕搖動，觀察溶液顏色有無變化？有無溶血現(xiàn)象？分析原因。2）取試管9支，編號后分別加入其他9種等滲溶液各3ml，再逐一加入0.5ml紅細(xì)胞懸液，分別記下時間，輕輕搖動，觀察溶液顏色有無變化。以低滲溶血管的溶液作對照管，若有的實(shí)驗(yàn)管溶液變成與對照一樣透明，說明發(fā)生完全溶血，記下那一刻的時間。

8、某種溶液的溶血時間等于自加入紅細(xì)胞懸液到溶液變成紅色透明所需的時間。4、溶血結(jié)果判斷：1）不溶血：液體分兩層，上層淺黃色，下層紅色不透明，鏡檢紅細(xì)胞完好。2）不完全溶血：溶液渾濁，上層變紅色，鏡檢紅細(xì)胞有部分破裂。3）完全溶血：液體變紅而透明，鏡檢紅細(xì)胞全部呈碎片。六、作業(yè)：1、統(tǒng)計不同等滲溶液的溶血情況。2、討論溶血實(shí)驗(yàn)在研究中應(yīng)用的可能性。實(shí)驗(yàn)六 相差顯微鏡觀察口腔上皮細(xì)胞一、實(shí)驗(yàn)原理：相差顯微鏡具環(huán)狀光闌，帶相板的物鏡，合軸調(diào)中望遠(yuǎn)鏡及濾色片，這些特殊裝置能使活細(xì)胞或未經(jīng)染色的標(biāo)本中各部分的折射率或厚度的微小差異，產(chǎn)生相位差，然后利用光的衍射和干射原理，把相位差變成振幅（明暗差）之差，使

9、人的肉眼能夠辯認(rèn)出來。二、實(shí)驗(yàn)用具：相差顯微鏡、普通顯微鏡、解剖器具三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、 閱讀教材20：二、相差顯微鏡的成像原理掌握：環(huán)狀光闌、相板、正相差、負(fù)相差、濾光片、調(diào)中望遠(yuǎn)鏡2、 口腔上皮細(xì)胞臨時裝片的制備與普通光鏡下的觀察。3、 相差顯微鏡觀察口腔上皮細(xì)胞。四、注意事項(xiàng)：制備樣品時，防止產(chǎn)生氣泡五、作業(yè)：調(diào)好口腔上皮細(xì)胞的相差像后，對比一般明視野的像和相差像，畫圖說明你所看到的兩個像的差別，指出相差像的成像特點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)七 細(xì)胞熒光染色觀察與熒光顯微鏡的使用一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、 初步了解熒光顯微鏡的基本組件、位置和基本原理。2、 學(xué)習(xí)細(xì)胞熒光染色的基本方法。二、 實(shí)驗(yàn)用具：1、 材料：

10、洋蔥、牛蛙2、 用具：熒光顯微鏡、鑷子、蓋玻片等三、 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、 閱讀實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書P81） 熒光：物質(zhì)中電子吸收光的能量由低能轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時釋放出的光。2） 熒光顯微鏡組件：光源、激發(fā)濾片、雙色反射鏡、阻斷濾片、物鏡、目鏡等。3） 熒光顯微鏡的成像原理，2、 蛙血細(xì)胞的染色觀察蛙血涂片晾干甲醇固定，10分鐘1%丫啶橙染色，5分鐘水洗干燥3、 洋蔥表皮細(xì)胞染色觀察撕取內(nèi)表皮鋪展于玻片上晾干1%啶橙染色，5分鐘水洗干燥4、 植物葉表皮細(xì)胞自發(fā)熒光觀察 撕取綠色植物葉表皮細(xì)胞制作臨時裝片，即可觀察。四、 注意事項(xiàng)：1、 熒光顯微鏡要在光線盡量暗的環(huán)境下觀察。2、 不要直接觀察激發(fā)

11、光源，保護(hù)眼睛。五、 作業(yè)：簡述熒光顯微鏡的主要部件和基本光路。 實(shí)驗(yàn)八 細(xì)胞融合一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合的基本原理。2、通過實(shí)驗(yàn)，初步掌握細(xì)胞融合的技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理：兩個或兩個以上的細(xì)胞合成為一個雙核或多核細(xì)胞的現(xiàn)象為細(xì)胞融合，也稱為細(xì)胞雜交。常用的誘導(dǎo)方法有病毒誘導(dǎo)融合、化學(xué)融合劑誘導(dǎo)融合和電融合。它們一般都是使細(xì)胞凝聚，破壞接觸處的細(xì)胞膜的磷脂雙分子層，從而使相互接觸的細(xì)胞膜之間發(fā)生融合，進(jìn)而細(xì)胞質(zhì)溝通，形成一個大的雙核或多核融合細(xì)胞。 三、實(shí)驗(yàn)材料與用具：P89四、實(shí)驗(yàn)步驟： 1、在公雞翼下靜脈抽取2mL雞血，加入盛有8mL的Alsever液中，使血液與Alseve

12、r液的比為1：4，混勻。2、取此貯存雞血1ml加入4ml 0.85%生理鹽水，充分混勻，800r/min離心3min，棄上清，重復(fù)上述條件離心兩次。最后棄上清，加GKN液4ml離心，1000r/min，5min。3、棄上清，加GKN液制成10%細(xì)胞懸液。4、取上述細(xì)胞懸液1ml于離心管中，放入37水浴中預(yù)熱，同時將50%PEG液一并預(yù)熱20min。5、20分鐘后將0.5ml 50%PEG溶液逐滴沿離心管壁加入到1mL細(xì)胞懸液中，邊加邊搖勻，然后放入37水浴中保溫20min。6、20分鐘后加入適量GKN液到8mL，靜止于水浴中20min。7、800r/min離心3min，棄上清，加GKN液再離心

13、1次。8、棄上清，加入GKN液少許，混勻，取少量制臨時裝片觀察細(xì)胞融合情況。五、作業(yè)：1、 繪制細(xì)胞融合圖像。2、 分析實(shí)驗(yàn)中遇到的問題及其解決辦法。實(shí)驗(yàn)九 植物凝集素對紅細(xì)胞的凝集作用一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、學(xué)習(xí)植物凝集素的提取方法；2、觀察紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象。二、實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞外被是指細(xì)胞質(zhì)膜外表面的一層黏多糖物質(zhì)，它在細(xì)胞間的聯(lián)系和識別、細(xì)胞生長和分化、免疫反應(yīng)和腫瘤發(fā)生等過程中發(fā)揮重要作用。動物細(xì)胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖鏈伸向膜的表面，它們是細(xì)胞識別、細(xì)胞免疫及細(xì)胞接觸抑制等現(xiàn)象的必要組分。凝集素是一類含糖的，并能與糖專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞間形成“橋”的結(jié)果。凝集素與糖分子結(jié)合有一定的專一性和結(jié)合價，并與細(xì)胞膜上受體的分布有關(guān)。三、實(shí)驗(yàn)用具：離心機(jī)、天平、顯微鏡、試管、注射器等四、實(shí)驗(yàn)材料：土豆塊莖或蕓豆粒，家兔1只五、實(shí)驗(yàn)步驟1、提取凝集素：稱取土豆去皮塊莖20g，加100mlPBS緩沖液，浸泡2小時后，將浸出的粗提取液過濾，即為土豆凝集素提取液。2、制備2%紅細(xì)胞懸