羅氏降鈣素檢測(cè)試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法)說(shuō)明書(shū)

1、降鈣素檢測(cè)試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法)說(shuō)明書(shū)Calcitonin【產(chǎn)品名稱(chēng)】通用名稱(chēng)：降鈣素檢測(cè)試劑盒(電化學(xué)發(fā)光法）英文名稱(chēng)：Calcitonin包裝規(guī)格100測(cè)試/盒預(yù)期用途主要用途該產(chǎn)品適用于體外定量測(cè)定人血漿和血清中的人降鈣素(甲狀腺降鈣素)。降鈣素測(cè)定主要是結(jié)合其它臨床和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果用于輔助診斷和治療一些涉及甲狀腺和甲狀旁腺的疾病，包括甲狀旁腺功能尤進(jìn)以及其他的臨床和實(shí)驗(yàn)室檢査發(fā)現(xiàn)。Elecsys和cobase免疫檢測(cè)分析&的檢測(cè)原理是電化學(xué)發(fā)光法。概要人降鈣素(hCT)是由32個(gè)氨基酸構(gòu)成的肽激素，分子量為3418道爾頓，主要是由甲狀腺的濾泡旁C細(xì)胞分泌。1它是在肝臟和腎臟中代

2、謝，受到血清鈣水平調(diào)節(jié)。生理性CT對(duì)界、磷代謝有影響。它是骨吸收作用抑制劑，防止鈣應(yīng)激(例如妊娠、哺乳和生長(zhǎng))時(shí)的骨丟失。嬰兒中血清CT水平相機(jī)對(duì)較高，而極低出生體重嬰兒中更高。5從兒童時(shí)期到成年過(guò)程中CT水平會(huì)迅速降低，且保持著相對(duì)穩(wěn)定。一般而言，男性血清降鈣素水平髙于女性，而吸煙會(huì)導(dǎo)致血清降鈣素水平進(jìn)一步升高。CT水平升高可見(jiàn)于各種病理學(xué)狀況下。9,10,11CT水平的進(jìn)一步升高還可見(jiàn)于甲狀旁腺功能亢進(jìn)、高胃泌素血癥、腎衰和慢性炎性疾病相關(guān)狀況。1V3與CT分泌過(guò)多性疾病有關(guān)的最為突出的臨床綜合癥是甲狀腺相關(guān)疾病。這種疾病可能為散發(fā)或以表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳特征的家族形式出現(xiàn)。這些疾病通常

3、產(chǎn)生具有診斷意義的血清降鈣素濃度升髙，因此通過(guò)免疫檢測(cè)方法測(cè)量血清降鈣素水平可獲得異常精確且具有極高特異性的診斷。此外，降興素測(cè)量值還可用于監(jiān)測(cè)產(chǎn)降媽素患者中治療的有效性。14,15然而，在小部分但卻是越來(lái)越多的患者中，基礎(chǔ)激素水平與正常水平不同。其中一些受試者處于C-細(xì)胞形成或增生的早期，適合接受手術(shù)治療，在臨床經(jīng)驗(yàn)中幾乎可治愈。為了在疾病早期鑒別出這些患者，有必要針對(duì)CT分泌進(jìn)行激發(fā)試驗(yàn)，以排除假陰性患者。使用鈣或五肽胃泌素或同時(shí)使用兩者后，大部分患者都會(huì)出現(xiàn)CT水平增加的反應(yīng)。16,17Elecsys降鈣素檢測(cè)使用針對(duì)人降鈣素的特異性單克隆抗體。釕復(fù)合物標(biāo)記的抗體中包括了小鼠特異性成分。

4、a)Tris(2,2,bipyridyl)ruthenium(II)-comple×(Ru(bpy)2+3三聯(lián)吡啶釕【檢驗(yàn)原理】夾心法原理。總檢測(cè)時(shí)間:18分鐘。 第1次孵育：50µL標(biāo)本、一份生物素化的hCT特異性單克隆抗體和釕復(fù)合物標(biāo)記的hCT特異性單克隆抗體一起孵育，反應(yīng)形成一”三明治”樣抗原-抗體復(fù)合物。 第2次孵育：加入鏈霉親合素包被的磁珠微粒后，該復(fù)合物通過(guò)生物素與鏈霉親合素的相互作用與固相結(jié)合。 將反應(yīng)液吸入測(cè)量池中，通過(guò)電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過(guò)ProCell/ProCellM除去。給電極加以定的電壓，使復(fù)合物化學(xué)發(fā)光，并通過(guò)光電倍

5、增器測(cè)量犮光強(qiáng)度。 通過(guò)檢測(cè)儀的定標(biāo)曲線得到最后的檢測(cè)結(jié)果，定標(biāo)曲線是通過(guò)2點(diǎn)定標(biāo)和試劑條形碼上獲得的主曲線生成的?！局饕M成成份】提供的物品包括工作溶液。工作溶液的組成如下：M鏈霉親合素包被的磁珠微粒(透明瓶蓋)，1瓶，6.5mL:鏈酶親合素包被的磁珠微粒：0.72mg/mL;防腐劑。R1生物素化的抗人降鈣素抗體(灰蓋)1瓶，8mL:生物素化的單克隆抗人降鈣素抗體(小鼠)1.50mg/L;磷酸鹽緩沖液100mmol/L,PH7.2；防腐劑。R2釕復(fù)合物標(biāo)記的抗人降鈣素抗體(黑蓋)，1瓶，8mL：釕復(fù)合物(Ru(bpy)2+3)標(biāo)記的抗人降鈣素單克隆抗體(小鼠)1.0mg/L;磷酸鹽緩沖液10

6、0mmol/L,pH7.2；防腐劑。霈要的物品(未提供）l 06445861-190,CalcitoninCalSet,4×l.0mLl 05618860-190,PreciCcmtrolVaria,規(guī)格2×3mL,分別為PreciCcmtrolVaria1和2l 03609987190。DiluentMultiAssay。規(guī)格2×16mL#本稀釋液l 實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)備l Elecsys2010,MODULARANALYTICSE170,或cobase分析儀l Elecsys2010和cobasc411分析儀所需材料：l 11662988122,ProCell,6&

7、#215;380mL系統(tǒng)緩沖液l 11662970122,CleanCell,6×380mLpJ量池清洗液l 11930346122,ElecsysSysWash,l×500mL附加洗液l 11933159001,SysCleanJS配器l 11706802001tElecsys2010AssayCup,60×60反應(yīng)管l 11706799001,Elecsys2010AssayTip,30×120移液管吸頭MODULARANALYTICSE170,cobase601和cobase602分析儀所需材料：l 04880340190,ProCellM,2&#

8、215;2L系統(tǒng)緩沖液l 04880293190,CleanCellM,2×2L檢測(cè)池清洗液l 03023141001，PC/CC-Cups,12杯用于在測(cè)定前預(yù)熱ProCellM和CleanCellMl 03005712190,ProbeWashM,12×70mL洗液，用于在檢測(cè)完畢后或更換試劑時(shí)清洗試劑針。l 03004899190,PreCleanM,5×600mL檢測(cè)清洗溶液l 12102137001,AssayTip/AssayCupCombimagazineM,48盒×84反應(yīng)杯或移液管吸頭，廢物袋l 03023150001,WasteLin

9、er,廢物袋l 03027651001,SysCleanAdapterM所有分析儀需要材料：l 11298500316，ElecsysSysClean>5×l00mL系統(tǒng)清洗液【儲(chǔ)存條件及有效期】存儲(chǔ)在2-8，有效期為15個(gè)月。請(qǐng)垂直擺放Elecsys降鈣素試劑盒，以確保使用前自動(dòng)混合過(guò)程中微粒完全有效。穩(wěn)定性：未開(kāi)封試劑，2*81C有效期內(nèi)均可使用開(kāi)封試劑，2-81C84天fl2周）置于分析儀上28天(4周）適用儀器羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)：Elecsys2010MODULARANALYTICSE170cobasc411cobase601cobase602【樣本要求】

10、樣本采集和制備只有以下類(lèi)型的樣本可用于檢測(cè)。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或有分離膠的真空管收集。肝素鋰，K2-EDTA和K3-EDTA血萊以及含有分離凝膠的肝素鋰血漿試管。判斷標(biāo)準(zhǔn)：濃度<10pg/mL時(shí)，回收率總偏差S初始值的±2.0Pg/mL;濃度lOpg/mL且斜率0.9-1.1+截距±2X空白限(LoB)+相關(guān)系數(shù)0.95時(shí)，回收率在初始值±20%以內(nèi)。20-25溫度下可穩(wěn)定保存4小時(shí)，2-8溫度下可穩(wěn)定保存1天，-20：溫度下可穩(wěn)定保存3個(gè)月。只可凍存一次。所列出的被檢測(cè)的樣本類(lèi)型采用經(jīng)挑選的市售樣本管采集，即并非檢測(cè)了所有廠商的試管產(chǎn)品。各生產(chǎn)商提供的樣

11、本采集系統(tǒng)可能含有不同的材料，某些情況下這些材料有可能影響到檢測(cè)結(jié)果。如果采用原始試管(樣本采集系統(tǒng))處理樣本，請(qǐng)參照試管生產(chǎn)商提供的說(shuō)明。如果樣本中有沉淀，測(cè)定前要進(jìn)行離心。切勿使用加熱滅活的標(biāo)本。不可使用疊氮化物作為穩(wěn)定劑的樣本和質(zhì)控品。檢測(cè)前，請(qǐng)確保標(biāo)本、定標(biāo)液及質(zhì)控液平衡至室溫(20-25)。考慮到可能的蒸發(fā)效應(yīng)，上機(jī)的樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)分析/測(cè)定?！緳z驗(yàn)方法】試劑處理該試劑盒為即用型，請(qǐng)勿分開(kāi)使用。正確操作需要的所有信息可通過(guò)相應(yīng)的試劑條碼讀取。測(cè)定為實(shí)現(xiàn)最佳檢測(cè)性能，請(qǐng)參照本文針對(duì)相應(yīng)分析儀所給出的指導(dǎo)說(shuō)明。正確參考針對(duì)特定分析儀檢測(cè)的操作人員手冊(cè)。使用前分析儀自動(dòng)對(duì)

12、磁性微粒進(jìn)行再混勻。通過(guò)試劑條碼讀取測(cè)試具體參數(shù)。在特殊情況下，分析儀無(wú)法自動(dòng)讀取條碼信息時(shí)，請(qǐng)輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。將冷藏試劑室溫平衡至20左右，放置分析儀的試劑盤(pán)(20)內(nèi)。避免形成泡沬。分析儀能自動(dòng)調(diào)節(jié)試劑溫度和開(kāi)、關(guān)各試劑盒瓶蓋。定標(biāo)溯源性：這種方法已被IRPWHO89/620參考標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)化。每批ElecsysCalcitonin試劑的試劑盒上都有條形碼記錄各批號(hào)試劑特異的定標(biāo)信息。預(yù)先確定的主曲線適用于用ElecsysCalcitoninCalSrt試劑盒進(jìn)行測(cè)定的分析儀。定標(biāo)頻率：新批號(hào)試劑必須進(jìn)行定標(biāo)(新試劑盒在分析儀上放置不能超過(guò)24小時(shí))。以下情況建議重新進(jìn)行定標(biāo)：

13、使用同一批號(hào)試劑2個(gè)月后(56天）7天后(在分析儀上使用同一試劑盒）根據(jù)需要：如質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)超過(guò)額定的限度質(zhì)量控制質(zhì)控采用PreciControl Varia其他合適的質(zhì)控品也可使用。各濃度質(zhì)控至少每24小時(shí)內(nèi)檢測(cè)一次，每次更換試劑盒或定標(biāo)后也須進(jìn)行質(zhì)控。應(yīng)根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室的具體要求采用適合的質(zhì)控間隔和限值。獲得的數(shù)值應(yīng)當(dāng)在設(shè)定的范圍內(nèi)。若失控每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須采取相應(yīng)的糾正措施。請(qǐng)遵循政府法規(guī)和當(dāng)?shù)匦袠I(yè)導(dǎo)則進(jìn)行質(zhì)量控制。計(jì)算分析儀自動(dòng)計(jì)算每一份標(biāo)本的分析物濃度，單位可為pg/mL或pmol/L(可選)。轉(zhuǎn)換因子：pg/mL×0.2926=pmol/LpMnol/L×3.4176=pg

14、/mL稀釋若標(biāo)本中降鈣素濃度超過(guò)測(cè)定范圍，則可使用DiluentMultiAssay稀釋標(biāo)本。推薦稀釋比是l:l(×)(MODULARA NALYTICSEl70,Elecsys2010和cobasdih析儀自動(dòng)稀釋或者人工稀釋)。稀釋標(biāo)本的CK-MB濃度必須>20pg/mL。手動(dòng)稀釋后，結(jié)果要乘上稀釋因子。分析儀稀釋后MODULARANALYTICSEl70，Elecsys2010和cobas e軟件會(huì)自動(dòng)計(jì)算結(jié)果?！緟⒖贾?參考范圍)】預(yù)期值參考范圍上限是以第97.5百分位數(shù)給出各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)研宄參考值對(duì)于各自患者人群的適用性，必要時(shí)建立各自的參考范圍?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】分析儀的

15、代表性性能指標(biāo)如下所示。各個(gè)試驗(yàn)室獲得的數(shù)據(jù)可能不同。精密度根據(jù)CLSI(臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)啲改良方案(EP5-A2),使用Elecsys試劑、混合人血清和質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)性測(cè)定：每天2次重復(fù)檢測(cè)，共21天(n=84).獲得如下結(jié)果：Elecsys 2010和cobas e 411分析儀可重復(fù)性b中間精密度樣本平均值SDCVSDCVpg/mLpg/mL%pg/mL%人血清11.010.0343.40.0525.2人血清211.50.3453.00.4133.6人血清31.713.5人血清448213.82.919.240人血清5191042.6 2.265.03.4Pre

16、ciControl Varia 18.880.1912.10.2612.9PreciControl Varia 297.71.441.52.512.6b)可重復(fù)性-批內(nèi)精密度MODULARANALYTICSE170,cobase601和cobase602分析儀：可重復(fù)性中間精密度樣本平均值SDCVSDCVpg/mLpg/m%pg/m%人血淸14.190.0601.40.0822.0人血淸245.40.7941.81.021 23人血淸34566.171.4g.461.9人血淸490714.0IS19.82.2 人血淸5161325.91.634.72.2PreciControl Varia 1

17、8.870.1281.40.1461.6PreciControl Varia 293.71.671.81.872.0方法學(xué)比較使用臨床標(biāo)本比較ElecsysCalcitonin檢測(cè)(y)和商用方法(×),相關(guān)性數(shù)據(jù)如下：測(cè)量的樣本數(shù)：247Passing/Bablok 線性回掃y=970X-0.133 y=l.12×-l。92t=0.911 r=0.977樣本濃度在0.600和1866pg/mL之間。群組樣本含量N第97.5百分位數(shù)95%可信區(qū)間下艱95%可信區(qū)間上限表觀健康女性1936.40pg/mL5.17 pg/mL9.82 pg/mL表觀健康男性1629.52pg/

18、mL.831 pg/mLl4.3 pg/mL分析特異性以9.11和468pg/mL的降鈣素濃度檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)了下列交叉反應(yīng)：交叉反應(yīng)物檢測(cè)濃度µg/L交叉反應(yīng)性%鮭魚(yú)降鈣素 1000.017豬降鈣素5000.007雞降鈣素5000.005ACTH(l-39) 人源1000.037C-肽400000.000降鈣素基因相關(guān)肽10000.002PTH(1-84)人源15O0.013TSHlOOOmlU/mL0.009胰島素(Insulin)試 劑盒說(shuō)明書(shū)335000.000催乳素10000.001促胃液素I2000o.001依降鈣素1000000.000鈣抑肽400000.055限值和范圍0.

19、5-2000pg/mL(通過(guò)最低檢出限和廠商定標(biāo)曲線的最高值確定)。低于檢測(cè)下限的值報(bào)告為<0.5pg/mL。超過(guò)檢測(cè)范圍的值報(bào)告>2000pg/mL(或100倍稀釋結(jié)果可報(bào)告至200000pg/mL)。測(cè)量值下限空白限值(LoB),檢出限(LoD)和定量檢出限(LoQ)空白限=0.3pg/mL空白限=0.5pg/mL定量檢出限=1.0pg/mL,總?cè)菰S誤差30% 空白限值和定量檢出限均是按照CLSI(臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會(huì))EP17-A的要求確定?？瞻紫拗祦?lái)自于幾次獨(dú)立測(cè)量序列中對(duì)幾份無(wú)分析物樣本260次測(cè)量所得數(shù)值的第95百分位數(shù)?？瞻紫尴喈?dāng)于低于無(wú)分析物樣本檢測(cè)值的濃度，其可能

20、性為95%。檢出限是根據(jù)空白限以及低濃度樣本的標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)確定。檢出限相當(dāng)于可被檢測(cè)出來(lái)的最低分析物濃度(數(shù)值有95%的可能性高于空白限)。檢出限是指樣本中可精確定量檢出的分析物最低量，總?cè)菰S誤差30%。限制性-干擾因素檢測(cè)結(jié)果不受黃疸(膽紅素<1128pmol/L或<66mg/dL),溶血(血紅蛋白<0.124mmol/或<0.2g/dL),脂血(脂肪乳劑<2000mg/dL)和生物素(<40ng/mL或<163nmol/L),以及IgG<4g/dL以及IgM 0.7g/dL和IgM<1,6g/dL的影響。判斷標(biāo)準(zhǔn)：10pg/ml的樣本在初始

21、值±10%的范圍內(nèi)回收，或<10pg/mL的樣本在初始值的±1pg/mL范圍內(nèi)回收。對(duì)于接受高劑量生物素治療的患者(即>5mg/天)，必須在末次生物素治療8小時(shí)后采集樣本。類(lèi)風(fēng)濕因子濃度低于1200IU/mL時(shí)無(wú)明顯干擾。降鈣素濃度最高達(dá)到1µg/mL時(shí)無(wú)高劑量鉤狀效應(yīng)。體外對(duì)17種常用和12種特殊藥物進(jìn)行試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，未發(fā)現(xiàn)有藥物影響檢測(cè)結(jié)果。采用下表中給出的濃度監(jiān)測(cè)特甲狀腺藥物。未發(fā)現(xiàn)有藥物影響檢測(cè)結(jié)果。判斷標(biāo)準(zhǔn)：在初始值±10%范圍內(nèi)重現(xiàn)。藥物濃度(ug/mL)碘化物0，2左甲狀腺素0,25卡比馬唑30Thiamazol80

22、丙硫氧嘧啶300Perchlorat2000普萘洛爾240胺碘達(dá)隆200潑尼松龍100氫化可的松200Fluocortolon100Octreotid0.3少數(shù)病例中極高濃度的檢測(cè)特異性抗體、鏈霉親合素或釕抗體會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。通過(guò)適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可將影響因素降到最低。用作診斷用途時(shí)，應(yīng)始終結(jié)合病人病歷、臨床檢査和其他檢測(cè)結(jié)果評(píng)估結(jié)果?！咀⒁馐马?xiàng)】注意亊項(xiàng)僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時(shí)必須遵循所有試驗(yàn)室試劑操作的注意事項(xiàng)。所有廢棄物必須按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處置。專(zhuān)業(yè)人員可索取安全數(shù)據(jù)報(bào)告。避免試劑和樣本(樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品)產(chǎn)生泡沫，【參考文獻(xiàn)】1。ZaidiM,MoongaBS,BevisPJR

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