影響酶活性的因素

1、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作 一一. 玻璃儀器的洗滌玻璃儀器的洗滌在生化實(shí)驗(yàn)中，玻璃儀器潔凈與否，是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的在生化實(shí)驗(yàn)中，玻璃儀器潔凈與否，是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的重要環(huán)節(jié)。潔凈的玻璃儀器內(nèi)壁應(yīng)十分明亮光潔，無重要環(huán)節(jié)。潔凈的玻璃儀器內(nèi)壁應(yīng)十分明亮光潔，無水珠附著在玻壁上。水珠附著在玻壁上。 常用的洗滌方法：常用的洗滌方法：1.一般儀器，如燒杯、試管等可用毛刷蘸肥皂液、合一般儀器，如燒杯、試管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗滌劑仔細(xì)刷洗。然后用自來水反復(fù)沖洗，最后用成洗滌劑仔細(xì)刷洗。然后用自來水反復(fù)沖洗，最后用少量蒸餾水沖洗少量蒸餾水沖洗23次，倒置在器皿架上晾干或置于次，倒置在器皿架上晾

2、干或置于烘箱烤干備用。烘箱烤干備用。 2.容量分析儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能容量分析儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后應(yīng)及時(shí)用自來水多次沖洗，細(xì)心檢用毛刷刷洗。用后應(yīng)及時(shí)用自來水多次沖洗，細(xì)心檢查潔凈程度，根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方法。查潔凈程度，根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方法。（1）如不掛水珠，用蒸餾水沖洗、干燥，方法同上；）如不掛水珠，用蒸餾水沖洗、干燥，方法同上； （2）如掛水珠，則應(yīng)瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡）如掛水珠，則應(yīng)瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡46小時(shí)，然后按上法順序操作，即先用自來水沖洗，小時(shí)，然后按上法順序操作，即先用自來水沖洗，再用蒸餾水沖洗，最后

3、干燥。再用蒸餾水沖洗，最后干燥。 二二.刻度吸量管刻度吸量管刻度吸量管刻度吸量管的種類：的種類： 按容量規(guī)格來分，有按容量規(guī)格來分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等數(shù)種。其精密度按不同的容積可達(dá)移等數(shù)種。其精密度按不同的容積可達(dá)移取量的取量的0.11%。通常將管身標(biāo)明的總?cè)萘糠挚虨椤Ｍǔ⒐苌順?biāo)明的總?cè)萘糠挚虨?00等分。等分。因此，因此，10ml的吸量管一格代表的吸量管一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表的吸量管一格代表0.01ml,其余類推。其余類推。 刻度吸量管的正確使用方法：刻度吸量管的正確使用方法：用右手拇指和中指夾住管身，將吸量管的尖端伸入試用右手拇

4、指和中指夾住管身，將吸量管的尖端伸入試液深處，左手持洗耳球把試液吸入管內(nèi)至高過刻度以液深處，左手持洗耳球把試液吸入管內(nèi)至高過刻度以上時(shí)，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制試上時(shí)，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制試液的泄放。吸液后應(yīng)盡量使吸量管保持垂直，使右眼液的泄放。吸液后應(yīng)盡量使吸量管保持垂直，使右眼與刻度等高，稍微輕抬食指或輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)吸量管，使試與刻度等高，稍微輕抬食指或輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)吸量管，使試液面緩慢降落，至管內(nèi)試液彎月面的最低點(diǎn)與吸量管液面緩慢降落，至管內(nèi)試液彎月面的最低點(diǎn)與吸量管的刻度線相齊為止。然后將吸量管插到需加試劑的容的刻度線相齊為止。然后將吸量管插到需加試劑的容器中，讓尖

5、端與容器內(nèi)壁靠緊，松開食指讓液體流出。器中，讓尖端與容器內(nèi)壁靠緊，松開食指讓液體流出。液體流完后再等液體流完后再等15秒鐘，捻動(dòng)一下吸量管后移去秒鐘，捻動(dòng)一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，則吹出尖端的液體后再捻轉(zhuǎn)一下（如需吹的吸量管，則吹出尖端的液體后再捻轉(zhuǎn)一下吸量管移去）。吸量管移去）。 三三. 溶液的混勻溶液的混勻 混勻的目的：混勻的目的：使反應(yīng)體系內(nèi)的各種物質(zhì)分子很好地互相接觸，充分進(jìn)行使反應(yīng)體系內(nèi)的各種物質(zhì)分子很好地互相接觸，充分進(jìn)行反應(yīng)；反應(yīng)； 使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液。使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液。 混勻的方法通常有以下幾種：混勻的方法通常有以下幾種：使盛器作離心運(yùn)動(dòng)。

6、使盛器作離心運(yùn)動(dòng)。左手持試管上端，用右手指輕擊試管下半部，使管內(nèi)溶液左手持試管上端，用右手指輕擊試管下半部，使管內(nèi)溶液作旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。作旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)。 混勻的注意事項(xiàng)：混勻的注意事項(xiàng)：防止盛器內(nèi)的液體濺出或被污染。防止盛器內(nèi)的液體濺出或被污染。嚴(yán)禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻。嚴(yán)禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻。實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書寫1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.實(shí)驗(yàn)原理3.實(shí)驗(yàn)步驟4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果5.實(shí)驗(yàn)分析影響酶作用的因素一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過對(duì)唾液淀粉酶活性的觀察，驗(yàn)證通過對(duì)唾液淀粉酶活性的觀察，驗(yàn)證溫度、溫度、pH、激活劑、抑制劑等對(duì)酶活性、激活劑、抑制劑等對(duì)酶活性的影響。的影響。二、實(shí)驗(yàn)原理 唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用

7、唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用的底物是淀粉。的底物是淀粉。 淀粉 I2：藍(lán)色淀粉酶糊精（大分子，小分子） 紫紅色、暗褐色或紅色淀粉酶麥芽糖+少量葡萄糖 棕黃色，碘本身顏色 淀粉水解過程中與碘反應(yīng)，其顏色的變化，可以指淀粉水解過程中與碘反應(yīng)，其顏色的變化，可以指示淀粉的水解程度，也可以由此判斷淀粉酶活力強(qiáng)弱。示淀粉的水解程度，也可以由此判斷淀粉酶活力強(qiáng)弱。三、實(shí)驗(yàn)試劑及器材1.試劑試劑 1%淀粉淀粉溶液溶液 碘碘液液 pH5.0、pH6.8、pH8.0磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液 1% CuSO4溶液溶液 1% NaCl溶液溶液 Na2SO4溶液溶液2. 器材器材 恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋 電爐電爐 比

8、色板比色板四、實(shí)驗(yàn)操作 1.唾液淀粉酶的制備唾液淀粉酶的制備 取干凈的紙杯，盛上蒸餾水。取干凈的紙杯，盛上蒸餾水。 用蒸餾水漱口。用蒸餾水漱口。 口含約口含約20ml蒸餾水，蒸餾水，2-3分鐘后，吐入一干凈試分鐘后，吐入一干凈試管中，棉花過濾。管中，棉花過濾。管別管別淀粉管淀粉管稀釋唾液稀釋唾液蒸餾水蒸餾水同時(shí)放同時(shí)放于于30-40oC水水浴中浴中2分鐘后分鐘后對(duì)照組3ml2ml實(shí)驗(yàn)組3ml2ml 2分鐘后做碘液檢查：在比色板上滴上碘液，于二管各取一滴加入，看是否開始水解，以后每隔2分鐘再取一滴加以檢查，約6-10分鐘后實(shí)驗(yàn)管水解過程由藍(lán)紫 紅棕 無色，此時(shí)水解完成。但對(duì)照管仍藍(lán)色。觀察兩管淀

9、粉在水解后的乳樣光澤分別取兩管溶液5滴，加入班氏試劑0.5ml，加熱煮沸，觀察有何現(xiàn)象發(fā)生。2.pH對(duì)唾液淀粉酶活性的影響對(duì)唾液淀粉酶活性的影響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解pH對(duì)酶活性的影響及最適pH的定義。二、原理 酶的催化活性與環(huán)境pH有密切關(guān)系，通常各種酶只在一定pH范圍內(nèi)才具有活性，酶活性最高時(shí)的pH，稱為酶的最適pH，高于或低于此pH時(shí)酶的活性都逐漸降低。不同酶的最適pH不同。酶的最適pH不是一個(gè)特征性的物理常數(shù)，對(duì)于一個(gè)酶，其最適pH因緩沖液和底物的性質(zhì)不同而有差異。操作操作管號(hào)管號(hào) 1 2 3pH5.0磷酸緩沖液磷酸緩沖液(ml) 1 0 0pH6.8磷酸緩沖液磷酸緩沖液(ml) 0 1

10、0pH8.0磷酸緩沖液磷酸緩沖液(ml) 0 0 11%淀粉溶液淀粉溶液(ml) 1 1 1唾液淀粉酶溶液唾液淀粉酶溶液(ml) 1 1 1 搖勻，置于常溫下，立即自搖勻，置于常溫下，立即自PH6.8的一管中取出一滴置的一管中取出一滴置于比色盤中，以后每隔于比色盤中，以后每隔2分鐘左右檢查一次，觀察與碘液的分鐘左右檢查一次，觀察與碘液的顯色反應(yīng)，當(dāng)出現(xiàn)淡紅褐色時(shí)，向每管滴加碘液顯色反應(yīng)，當(dāng)出現(xiàn)淡紅褐色時(shí)，向每管滴加碘液1滴，比較滴，比較各管顏色。各管顏色。取試管取試管3支，按下表操作支，按下表操作3. 溫度對(duì)唾液淀粉酶活力的影響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解溫度對(duì)酶活性的影響并了解最適溫度的定義。二、原理

11、 對(duì)溫度敏感是酶的一個(gè)重要特性，酶作為生物催化劑，和一般催化劑一樣呈現(xiàn)出溫度效應(yīng)，提高溫度可以提高酶促反應(yīng)速度，但另一方面又會(huì)加速酶蛋白的變性速度，所以在較低的溫度范圍內(nèi)，酶反應(yīng)速度隨溫度升高而增大，但是超過一定溫度后，反應(yīng)速度反而下降。酶反應(yīng)速度達(dá)到最大時(shí)的溫度稱為酶的最適溫度。酶的最適溫度不是一個(gè)常數(shù)，它與作用時(shí)間的長(zhǎng)短有關(guān)系。 取取3支試管，按下表操作支試管，按下表操作：操作項(xiàng)目操作項(xiàng)目管號(hào)管號(hào) 1 2 31%淀粉溶液淀粉溶液(ml) 2 2 2唾液淀粉酶溶液唾液淀粉酶溶液(ml) 1 1 1溫度處理（溫度處理（） 37 沸水 0-4 1.在上述溫度情況下，保溫10分鐘2.從上3管各取水解液少許用碘液試之。有何變化？3.將2、3管從水中取出，放入37水浴中保溫10 分鐘，再以碘液試之，有何變化？4.激活劑和抑制劑對(duì)唾液淀粉激活劑和抑制劑對(duì)唾液淀粉 酶活性的影響酶活性的影響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解激活劑和抑制劑對(duì)酶活力的影響。二、原理 酶的活性受某些物質(zhì)的影響，能使酶活性增加的稱為激活劑，能使酶活性降低的稱為抑制劑。很少量的激活劑和抑制劑就會(huì)影響酶的活性，而且常具有特異性，但激活劑和抑制劑不是絕對(duì)的，濃度的改變可能使激活劑變成抑制劑。 置于常溫下，同時(shí)向各管中加入等量唾液置于常溫下，同時(shí)向各管中加入等量唾液1ml，立即混勻，并，立即混勻，并立即從第二管中用滴管