活性氧ROS介導(dǎo)的乙醛氧化損傷心肌致細(xì)胞凋亡的初步研究PPT課件

1、 研究背景 第1頁/共27頁酒精性心肌病迅速蔓延酒精性心肌病迅速蔓延 在西方世界，酒精是繼發(fā)性非缺血性擴(kuò)張型心肌病主要原因在西方世界，酒精是繼發(fā)性非缺血性擴(kuò)張型心肌病主要原因1) 據(jù)統(tǒng)計，成年人2/3不同程度飲酒2) 酒精性心肌病,1/3以上與酒精有關(guān) 在中國，隨著生活水平不斷提高，酒精性代謝相關(guān)疾病增多在中國，隨著生活水平不斷提高，酒精性代謝相關(guān)疾病增多第2頁/共27頁乙醇？乙醛？損傷心肌乙醇？乙醛？損傷心肌 乙醇，乙醛誘導(dǎo)心肌細(xì)胞比較實(shí)驗(yàn)1）養(yǎng)化應(yīng)激水平2）細(xì)胞凋亡水平 轉(zhuǎn)基因過表達(dá)ADH或ALDH比較實(shí)驗(yàn)1）過表達(dá)ADH加劇心肌收縮功能障礙2）過表達(dá)ALDH減少心肌細(xì)胞凋亡乙醇 乙醛 乙

2、酸ADHALDH第3頁/共27頁乙醛通過何種途徑損傷心??？乙醛通過何種途徑損傷心肌？心肌肥大、凋亡致功能改變遺傳因素病毒感染DNA突變免疫改變T細(xì)胞殺傷心肌炎第4頁/共27頁ROS途經(jīng)導(dǎo)致靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡途經(jīng)導(dǎo)致靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡J. Biol. Chem. 279:11244.第5頁/共27頁 心肌細(xì)胞胞漿特異表達(dá)心肌細(xì)胞胞漿特異表達(dá) -MHC, 200 體外心肌細(xì)胞培養(yǎng)第6頁/共27頁ROSROS隨乙醛誘導(dǎo)濃度增加的變化隨乙醛誘導(dǎo)濃度增加的變化umol/L第7頁/共27頁ROSROS隨乙醛誘導(dǎo)時間增加的變化隨乙醛誘導(dǎo)時間增加的變化h第8頁/共27頁乙醛誘導(dǎo)心肌細(xì)胞乙醛誘導(dǎo)心肌細(xì)胞Bcl-2B

3、cl-2蛋白表達(dá)蛋白表達(dá)0 2 6 12 18 24 48 h第9頁/共27頁不同條件誘導(dǎo)下不同條件誘導(dǎo)下ROSROS的變化的變化00.20.40.60.81對照組缺氧組過氧化氫組乙醛1 0 0umol/L組M1%/gated per100cells第10頁/共27頁乙醛誘導(dǎo)細(xì)胞培液上清乙醛誘導(dǎo)細(xì)胞培液上清SODSOD活性活性h第11頁/共27頁乙醛誘導(dǎo)心肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)論乙醛誘導(dǎo)心肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)論 ROS介導(dǎo)的氧化損傷是乙醛誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的主要原因 乙醛較H2O2誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS增量水平低，提示乙醛對心肌作用為慢性氧化損傷 乙醛介導(dǎo)的氧化損傷可能經(jīng)線粒體途徑發(fā)揮作用 降低細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平可有效

4、改善心肌缺氧缺血狀態(tài)， 減少心肌細(xì)胞凋亡第12頁/共27頁 心肌凋亡ROS心力衰竭功能障礙擴(kuò)張型心肌??？第13頁/共27頁蛋白質(zhì)組學(xué)研究意義蛋白質(zhì)組學(xué)研究意義 篩選出差異蛋白 研究與疾病的相關(guān)性第14頁/共27頁SDSD鼠心力衰竭模型中鼠心力衰竭模型中ALDH2ALDH2明顯下調(diào)明顯下調(diào)第15頁/共27頁 染色體定位：12q24.2 蛋白定位：線粒體內(nèi)膜線粒體內(nèi)膜醛脫氫酶 2 aldehyde dehydrogenase(ALDH2)第16頁/共27頁線粒體功能線粒體功能 ROS產(chǎn)生主要場所 引起氧化損傷 ATP能量來源 抗氧化酶系 凋亡和抗凋亡蛋白 Bcl家族第17頁/共27頁線粒體功能線粒

5、體功能第18頁/共27頁ALDH2的的mRNA 轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)轉(zhuǎn)錄水平表達(dá) Normal TransplantGAPDHALDH2第19頁/共27頁心肌組織心肌組織ALDH2ALDH2活性測定結(jié)果活性測定結(jié)果第20頁/共27頁RT-PCRWestern Blot在SD鼠心衰模型中DDDDReal time-PCR54KD36KD第21頁/共27頁ALDH2/pAd-HM4ALDH2/pAd-HM4質(zhì)粒構(gòu)建質(zhì)粒構(gòu)建CAG poly AKpnIApaIXhoI (2)SalI (2)BamHI(2)XbaI (2)SalI (2)PstI (2)?SphIHindIII (3)total 35.3k

6、b1720bp730bp30.3kbAmprXbaI（ 2)ALDH21954bpEcoRPstBglBglHind0.8kb2.5kbAdeno virus genomeE3(-)(28133-30818)Adeno virus genomeE1(-)(342-3523)ITRITRPacIPacI第22頁/共27頁第23頁/共27頁技術(shù)路線技術(shù)路線細(xì)胞培液上清DCM組轉(zhuǎn)ALDH2*1形 DNA ladder態(tài) TUNEL基 ALDH2因 ADH-1蛋 Bcl-2家族白 caspase移植心臟組織 SD鼠心肌細(xì)胞 活 ALDH2性 ROS對照組對照組乙醛干預(yù)轉(zhuǎn)ALDH2*2未轉(zhuǎn)未干預(yù)通 MA