422生物選修1課堂教學(xué)課件微生物的分離與計(jì)數(shù)

1、2021-11-162021-11-16u大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)；u分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù);u分解纖維素微生物的分離分解纖維素微生物的分離。1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.1.計(jì)算：計(jì)算：培養(yǎng)基用量培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成分的用量依配方計(jì)算各成分的用量2.2.稱量：稱量：3.3.溶化：溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙牛肉膏、稱量紙

2、、少量水加熱溶解、少量水加熱溶解 取紙取紙蛋白胨、蛋白胨、naclnacl瓊脂瓊脂 補(bǔ)水定容補(bǔ)水定容4.4.調(diào)調(diào)phph、分裝、封口：分裝、封口：5.5.滅菌：滅菌：6.6.倒平板：倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個(gè)細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞, ,形成單個(gè)菌落形成單個(gè)菌落約約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：純化大腸桿菌：平板劃線法：平板劃線法：菌種菌種劃劃3 3個(gè)個(gè)平板平板

3、1 1個(gè)個(gè)不劃線不劃線1.1.接種：接種：接種環(huán)接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對(duì)照）（空白對(duì)照）平板劃線法平板劃線法 為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？接種環(huán)嗎？為什么？ 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來源于上次劃線的末端，從

4、而通過劃線次菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。便得到菌落。 及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。染環(huán)境和感染操作者。6 6支支試管，分別加入試管，分別加入9ml9ml無菌水無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液梯度稀釋菌液：菌液菌液微量微量 移移液器液器稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法：a.a.梯度稀釋菌液梯度稀釋菌液：b.b.涂布平板涂布平

5、板：不超過不超過0.1ml0.1ml各各梯度分別涂布梯度分別涂布3個(gè)平板個(gè)平板1 1個(gè)個(gè)不涂布作空白對(duì)照不涂布作空白對(duì)照滴滴灼灼試試涂涂稀稀釋釋10103 3倍倍稀稀釋釋10104 4倍倍稀稀釋釋10105 5倍倍平板劃線法：平板劃線法：大腸桿菌的純化培養(yǎng)大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌：純化大腸桿菌：1.1.接種：接種：稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法：2.2.培養(yǎng)：培養(yǎng)：將將接種后接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種未接種的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基放入放入3737恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)12h12h24h24h后，后，觀察并記錄觀察并記錄菌種的保藏

6、：菌種的保藏：1.1.臨時(shí)保藏：臨時(shí)保藏： 試管固體斜面培養(yǎng)基上試管固體斜面培養(yǎng)基上442.2.長期保存：長期保存：菌種易被污染、變異菌種易被污染、變異甘油管藏甘油管藏1ml1ml甘油甘油1ml1ml菌液菌液2020復(fù)習(xí)復(fù)習(xí)尿素尿素co(nhco(nh2 2) )2 2重要的農(nóng)業(yè)氮肥。重要的農(nóng)業(yè)氮肥。只能被土壤中細(xì)菌分解為只能被土壤中細(xì)菌分解為nhnh3 3才能被植物吸才能被植物吸收利用收利用 co(nh co(nh2 2) )2 2 + h + h2 2o coo co2 2 +2nh+2nh3 3細(xì)菌脲酶細(xì)菌脲酶u篩選菌株篩選菌株 提出的問題提出的問題 如何尋找如何尋找耐高溫耐高溫的酶？的

7、酶？ 解決問題的思路解決問題的思路 尋找尋找耐高溫耐高溫環(huán)境；環(huán)境； 原理原理 高溫淘汰其他菌，選出耐高溫細(xì)菌，高溫淘汰其他菌，選出耐高溫細(xì)菌， 耐高溫菌種提取耐高溫酶。耐高溫菌種提取耐高溫酶。u篩選菌株篩選菌株選擇培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基：允許特定種類允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。u篩選菌株篩選菌株khkh2 2popo4 4 1.4g 1.4g nahpo nahpo4 4 2.1g 2.1g mgso mgso4 4 h h2 2o 0.2go 0.2g 葡萄糖葡萄糖 10.0g10.0g 尿素尿素

8、1.0g1.0g 瓊脂瓊脂 15.0g15.0g 將上述物質(zhì)溶解后將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到，用蒸餾水定容到1000ml1000ml。 該培養(yǎng)基的配方中，為該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮微生物的生長提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？源的分別是什么物質(zhì)？ 此配方能否篩選出產(chǎn)生此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌？為什么？脲酶的細(xì)菌？為什么？碳源：葡萄糖、尿素碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素氮源：尿素能。只有產(chǎn)生脲酶的能。只有產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌能利用尿素作為氮細(xì)菌能利用尿素作為氮源而生存。源而生存。u統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目： 1 1、活體計(jì)數(shù)法（、活體計(jì)數(shù)法（稀釋涂布平板稀釋涂布平板） （

9、1 1）操作方法：）操作方法： 稀釋涂布平板稀釋涂布平板統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù) （2 2）原理：）原理： 1 1個(gè)菌落個(gè)菌落1 1個(gè)活菌個(gè)活菌 （3 3）統(tǒng)計(jì)原則）統(tǒng)計(jì)原則 選選 3030 300 300 個(gè)菌落的平板統(tǒng)計(jì)個(gè)菌落的平板統(tǒng)計(jì) 每個(gè)稀釋度取每個(gè)稀釋度取3 3個(gè)平板取個(gè)平板取其其平均值平均值為什么？u統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 1 1、活菌計(jì)數(shù)法、活菌計(jì)數(shù)法 （4 4）統(tǒng)計(jì)結(jié)果：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的）統(tǒng)計(jì)結(jié)果：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目實(shí)際數(shù)目低低，因此統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)表，因此統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)表示。示。 每克樣品中的菌株數(shù)每克樣品中的菌株數(shù)= =（c/v)c/v)* *

10、 m m c: c:某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)；某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)； v: v:所用稀釋液的體積；所用稀釋液的體積；m:m:稀釋倍數(shù)。稀釋倍數(shù)。為什么？ 例：兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同例：兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同 一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10106 6的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。 1 1、甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的、甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為菌落數(shù)為230230。 2 2、乙同學(xué)在該濃度下涂布了、乙同學(xué)在該濃度下涂布了a a、b b、c

11、c三個(gè)平板，三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為2121、212212、256256，該同學(xué)以這三個(gè)，該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值平板上菌落數(shù)的平均值163163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。 你認(rèn)為這兩位同學(xué)的作法正確嗎？如果有問題，你認(rèn)為這兩位同學(xué)的作法正確嗎？如果有問題，錯(cuò)在哪？錯(cuò)在哪？ 甲：沒有甲：沒有重復(fù)實(shí)驗(yàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)（至少涂布（至少涂布3 3個(gè)平板）個(gè)平板） 乙：乙：a a組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)用于計(jì)算平均值組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)用于計(jì)算平均值2、顯微觀察法：比例計(jì)數(shù)或直接計(jì)數(shù)（血球計(jì)數(shù)板）、顯微觀察法：比例計(jì)數(shù)或直接計(jì)數(shù)（血球計(jì)數(shù)板）計(jì)數(shù)室（中央大方格）的長、寬和高分別為

12、：計(jì)數(shù)室（中央大方格）的長、寬和高分別為：1 mm 、1 mm和和 0.1mm 計(jì)數(shù)室的容積：計(jì)數(shù)室的容積：0.1mm3 （萬分之一毫升）（萬分之一毫升）取樣：稀釋一定倍數(shù)的菌液取樣：稀釋一定倍數(shù)的菌液酵母細(xì)胞數(shù)酵母細(xì)胞數(shù)/ml80小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)小格內(nèi)酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)/80400104稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 計(jì)數(shù)順序：計(jì)數(shù)順序：左上左上右上右上右下右下左下左下 壓在格線的，只統(tǒng)計(jì)左線和上線壓在格線的，只統(tǒng)計(jì)左線和上線3.稱重法：稱重法：一個(gè)細(xì)胞（細(xì)菌）一般重約一個(gè)細(xì)胞（細(xì)菌）一般重約10121013g4.4.比濁法記數(shù)比濁法記數(shù) 當(dāng)細(xì)菌濃度達(dá)到當(dāng)細(xì)菌濃度達(dá)到107個(gè)個(gè)/ml時(shí)時(shí),培養(yǎng)基會(huì)渾濁培養(yǎng)基會(huì)

13、渾濁 利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行尿素分解菌的分離利用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行尿素分解菌的分離過程中，從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為過程中，從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為10106 6的培養(yǎng)基中，的培養(yǎng)基中，a a、b b兩同學(xué)分別得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。兩同學(xué)分別得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。 1 1、a a同學(xué)篩選出同學(xué)篩選出150150個(gè)菌落。個(gè)菌落。 2 2、b b同學(xué)篩選出同學(xué)篩選出5050個(gè)菌落。個(gè)菌落。 b b認(rèn)為認(rèn)為a a的培養(yǎng)基被雜菌污染了，或培養(yǎng)基的培養(yǎng)基被雜菌污染了，或培養(yǎng)基中混入了其他含氮物質(zhì)，因而導(dǎo)致不能分解尿中混入了其他含氮物質(zhì)，因而導(dǎo)致不能分解尿素的細(xì)菌也能在該培養(yǎng)基中生長。素的細(xì)菌也能在該培養(yǎng)基中生長。a a確認(rèn)自己確

14、認(rèn)自己的操作無誤，但也拿不出能令人信服的證據(jù)。的操作無誤，但也拿不出能令人信服的證據(jù)。 請(qǐng)你幫助請(qǐng)你幫助a a同學(xué)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)，提供具有說明同學(xué)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)，提供具有說明了的證據(jù)。了的證據(jù)。 設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照同等條件下，培養(yǎng)空白培養(yǎng)基同等條件下，培養(yǎng)空白培養(yǎng)基u設(shè)置對(duì)照設(shè)置對(duì)照 1 1、設(shè)置對(duì)照的目的：、設(shè)置對(duì)照的目的： 排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 對(duì)照實(shí)驗(yàn)對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了是指除了 被測(cè)試被測(cè)試 的條件外的條件外，其他條件都，其他條件都 相同相同 的實(shí)驗(yàn)。滿足該條的實(shí)驗(yàn)。滿足該條件的稱為件的稱為 對(duì)照對(duì)照

15、組，未滿足該條件的稱組，未滿足該條件的稱為為 實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn) 組。組。尿素培養(yǎng)基尿素培養(yǎng)基未接種的尿未接種的尿素培養(yǎng)基素培養(yǎng)基10-510-4實(shí)驗(yàn)過程實(shí)驗(yàn)過程 （一）土壤取樣（一）土壤取樣 1 1、取樣的位置：、取樣的位置： 土壤，天然培養(yǎng)基，含有大量的微生物，土壤，天然培養(yǎng)基，含有大量的微生物，其中其中7070 9090是細(xì)菌。在富含有機(jī)質(zhì)的土壤層是細(xì)菌。在富含有機(jī)質(zhì)的土壤層的的3 3 8cm8cm處中分布著絕大多數(shù)的細(xì)菌。處中分布著絕大多數(shù)的細(xì)菌。 2 2、取樣要求：鏟去表層土。、取樣要求：鏟去表層土。 菌落計(jì)數(shù)菌落計(jì)數(shù)配制土壤溶液配制土壤溶液系列稀釋系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)涂布平板與培養(yǎng)（二）樣

16、品稀釋（二）樣品稀釋 （1 1）測(cè)細(xì)菌數(shù)：一般用）測(cè)細(xì)菌數(shù)：一般用10104 4、10105 5、10106 6稀釋液稀釋液 （2 2）測(cè)放線菌：一般用）測(cè)放線菌：一般用10103 3、10104 4、10105 5稀釋液稀釋液 （3 3）測(cè)真菌數(shù)：一般用）測(cè)真菌數(shù)：一般用10102 2、10103 3、10104 4稀釋液稀釋液原則：確保平板上的菌落數(shù)在原則：確保平板上的菌落數(shù)在3030 300300之間。之間。（三）微生物的培養(yǎng)與觀察（三）微生物的培養(yǎng)與觀察 1 1、接種：用適當(dāng)?shù)南♂屢鹤魍坎计桨濉⒔臃N：用適當(dāng)?shù)南♂屢鹤魍坎计桨?2 2、培養(yǎng)：細(xì)菌：、培養(yǎng)：細(xì)菌：3030 3737，1 1

17、 2d;2d; 放線菌放線菌:25:25 28, 528, 5 7d;7d; 霉菌霉菌: 25: 25 28, 328, 3 4d.4d. 3 3、觀察：、觀察：a.a.每每24h24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目 b.b.以以“穩(wěn)定穩(wěn)定菌落菌落”為觀察對(duì)象為觀察對(duì)象 （四）鑒定（四）鑒定鑒別培養(yǎng)基：不影響鑒別培養(yǎng)基：不影響微生物的生存微生物的生存酚紅培養(yǎng)基：酚紅培養(yǎng)基： 鑒定分解尿素的細(xì)菌鑒定分解尿素的細(xì)菌原理：脲酶催化尿素原理：脲酶催化尿素分解成氨分解成氨培養(yǎng)基堿培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)性增強(qiáng) 酚紅變紅酚紅變紅脲酶陽性脲酶陽性復(fù)習(xí)復(fù)習(xí) 纖維素酶是一種纖維素酶是一種復(fù)合酶復(fù)合酶，一般，一般認(rèn)為它至

18、少包括三種組分認(rèn)為它至少包括三種組分，即，即c1酶、酶、 cx酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖酶將纖維二糖分解成葡萄糖。維二糖分解成葡萄糖。纖維素纖維素纖維纖維二糖二糖葡萄糖葡萄糖c1酶酶cx酶酶葡萄糖葡萄糖苷酶苷酶背景知識(shí)背景知識(shí)濾濾紙紙崩崩潰潰法法纖維素酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)：纖維素酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)：背景知識(shí)背景知識(shí) 剛果紅可以與纖維剛果紅可以與纖維素形成素形成紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物，當(dāng)，當(dāng)纖維素被纖維素被纖維素酶纖維素酶分解分解后，紅色復(fù)合物無法形后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以成，出現(xiàn)以纖維素分解纖維素分解菌菌為中

19、心的為中心的透明圈透明圈，我，我們可以通過們可以通過是否產(chǎn)生透是否產(chǎn)生透明圈明圈來篩選纖維素分解來篩選纖維素分解菌。菌。背景知識(shí)背景知識(shí)實(shí)驗(yàn)流程示意圖實(shí)驗(yàn)流程示意圖實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)酵母膏：實(shí)際上是膏狀的酵母抽提物，酵母抽提物是國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定名稱。酵母抽提物以酵母為原料，采用自溶法或加酶水解法工藝，經(jīng)分離、脫色而成的，含氨基酸、肽、多肽及酵母細(xì)胞水溶性成分的產(chǎn)品。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思考：思考： 1. 1.為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？解菌？ 2. 2.將濾紙埋

20、在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？該埋進(jìn)土壤多深？ 將將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一適宜環(huán)境。一般將紙般將紙埋于深約埋于深約10cm10cm左右腐殖土左右腐殖土壤中。壤中。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)“濃縮濃縮”作用作用u將土樣加入裝有將土樣加入裝有30ml30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下振蕩培養(yǎng)下振蕩培養(yǎng)1-2d1-2d，直至培養(yǎng)液變混

21、濁。，直至培養(yǎng)液變混濁。u吸取一定量的培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移至另一瓶新鮮吸取一定量的培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移至另一瓶新鮮的選擇培養(yǎng)基中，以同樣的方法培養(yǎng)到培的選擇培養(yǎng)基中，以同樣的方法培養(yǎng)到培養(yǎng)液變混濁。養(yǎng)液變混濁。根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量來確定是否需要根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量來確定是否需要。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。挑取產(chǎn)生明顯的挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。 接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在30300 0c c37

22、370 0c c培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)剛果紅染色法剛果紅染色法方法一：方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)。顏色反應(yīng)。方法二：方法二：在倒平板時(shí)就加入剛果紅。在倒平板時(shí)就加入剛果紅。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)復(fù)習(xí)復(fù)習(xí)微生物培養(yǎng)的基本程序微生物培養(yǎng)的基本程序培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制稱量稱量溶化溶化調(diào)調(diào)ph分裝分裝包扎包扎滅菌滅菌（高壓蒸汽滅菌）（高壓蒸汽滅菌）接種接種固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基平板劃線（接種環(huán)）、稀釋涂布（玻璃刮刀）平板劃線（接種環(huán)）、稀釋涂布（玻璃刮刀）液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基用接種環(huán)蘸取菌液（擴(kuò)大培養(yǎng)）用接種環(huán)蘸取菌液（擴(kuò)

23、大培養(yǎng)）培養(yǎng)培養(yǎng) 固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基倒置，倒置，37恒溫培養(yǎng)箱，恒溫培養(yǎng)箱，24h左右左右液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基空氣浴或水浴培養(yǎng)箱（搖床），震蕩培養(yǎng)空氣浴或水浴培養(yǎng)箱（搖床），震蕩培養(yǎng)固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基劃線的末端出現(xiàn)單菌落劃線的末端出現(xiàn)單菌落液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)液變渾濁培養(yǎng)液變渾濁觀察觀察 廢棄菌種和培養(yǎng)基滅菌后丟棄廢棄菌種和培養(yǎng)基滅菌后丟棄 （20132013新課標(biāo)卷新課標(biāo)卷iiii）臨床試用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥）臨床試用抗生素前，有時(shí)需要做細(xì)菌耐藥實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要從病人身上獲取少量樣本，然后按照一定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確

24、定某致病菌對(duì)不同抗生素的敏感性。定的實(shí)驗(yàn)步驟操作，以確定某致病菌對(duì)不同抗生素的敏感性?；卮鹣铝袉栴}：回答下列問題： （1 1）為了從樣本中獲取致病菌菌落，可用）為了從樣本中獲取致病菌菌落，可用_法或法或_法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒法將樣本接種于固體培養(yǎng)基表面，經(jīng)過選擇培養(yǎng)、鑒別等步驟獲得。別等步驟獲得。 （2 2）取該單菌落適當(dāng)稀釋，用）取該單菌落適當(dāng)稀釋，用_法接種于固體培養(yǎng)基法接種于固體培養(yǎng)基表面，在表面，在3737培養(yǎng)箱中培養(yǎng)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h24h，使其均勻生長，布滿平板。，使其均勻生長，布滿平板。 【答案答案】：（：（1 1）劃線）劃線 稀釋涂布（或涂布）（稀釋涂

25、布（或涂布）（2 2）涂布）涂布 （3 3）為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，將分別含有）為了檢測(cè)該致病菌對(duì)于抗生素的敏感性，將分別含有a a，b b，c c，d d四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，四種抗生素的濾紙片均勻置于該平板上的不同位置，培養(yǎng)一段時(shí)間后，含培養(yǎng)一段時(shí)間后，含a a的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌的濾紙片周圍出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對(duì)抗生素對(duì)抗生素a_a_；含；含b b的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該的濾紙片周圍沒有出現(xiàn)透明圈，說明該致病菌對(duì)抗生素致病菌對(duì)抗生素b_b_；含；含c c的濾紙片周圍的透明圈比含的濾紙片周圍的透明圈比含a a的小，的小，說明

26、說明_；含；含d d的濾紙片周圍的透明圈也比含的濾紙片周圍的透明圈也比含a a的小，且透的小，且透明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很明圈中出現(xiàn)了一個(gè)菌落，在排除雜菌污染的情況下，此菌落很可能是抗生素可能是抗生素d d的的_。 （4 4）根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選擇抗）根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為達(dá)到抗菌目的，最好應(yīng)選擇抗生素生素_。 （3 3）敏感）敏感 不敏感不敏感 該致病菌對(duì)該致病菌對(duì)c c的敏感性比對(duì)的敏感性比對(duì)a a弱弱 耐藥菌耐藥菌 （4 4）a a （20132013上海卷）回答下列關(guān)于微生物的問題。阿拉伯膠是一種上海卷）回答下列關(guān)于微生物的問題。阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深101015cm15cm處的土樣中處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株sm01sm01，以下為該菌株的鑒，以